I MARKERS IMMUNOCITOCHIMICI valore diagnostico e riproducibilità

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Edmondo Moretti
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1 I MARKERS IMMUNOCITOCHIMICI valore diagnostico e riproducibilità Dott.ssa Silvia Taccogna Responsabile Anatomia Patologica Ospedale Regina Apostolorum Albano L (RM)

2 TECNICHE ANCILLARI «..sono diventate parte integrante nella pratica diagnostica e servono a confermare o supportare l ipotesi diagnostica formulata sui preparati di routine o per identificare una lesione tra le varie possibilità diagnostiche.» Thyroid Cytopathology: An Atlas and Text - Sudha R. Kini

IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni

3 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici

4 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

5 Tumori delle cellule follicolari/dalle cellule C Carcinoma Midollare Papanicolaou Calcitonin

6 Differenziare tumori delle cellule follicolari/cellule C

7 Carcinoma Midollare Calcitonina + CEA + TTF1+ Tireoglobulina - TG Calcitonin CEA

8 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

9 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Linfoma Nucleic acids: Rearrangement Mutation Translocation

10 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Linfoma IHC: LCA+ CD + (CD20) Cytokeratin- LCA CD20

11 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Linfoma CK CK

12 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

13 Differentiate Parathyroid Lesions intrathyroidal location or in close proximity of thyroid simulating thyroid origin

14 LESIONI PARATIROIDEE IHC: PTH+ CromograninaA+ TG- PTH

15 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

16 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA CA Anaplastico CK VIM

17 Characterization of malignancy: follicular neoplasm vs metastasis Total number of cases of metastasis to thyroid reported in literature stratified by site of primary tumor Ann Surg Oncol. 2017; 24(6):

18 Characterization of malignancy: follicular neoplasm vs metastasis Thyreoglobulin Cytokeratin TTF-1 Markers of specific origin: CDX2, HMB45, PSA, etc.

19 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Primitivo vs Metastasi TG CD10 HE

20 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Primitivo vs Metastasi: polmone Napsina

21 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Primitivo vs Metastasi: Colon cdx2

22 CARATTERIZZAZIONE DELLA NEOPLASIA Primitivo vs Metastasi: CA A CELLULE DI HURTHLE VS MELANOMA HMB-45

23 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

24 CLASSIFICAZIONE ITALIANA 2014 Non diagnostico Non neoplastico TIR1 TIR2 Indeterminato TIR 3 TIR 3A: a basso rischio TIR 3B: ad alto rischio Sospetto di malignità Maligno TIR4 TIR5 Nardi F, Basolo F, Crescenzi A, Fadda G, Frasoldati A, Palombini L, Orlandi F, Papini E, Zini M, Pontecorvi A, Vitti P. Italian Consensus for the classification and reporting of thyroid cytology. J Endocrinol Invest 2014

preoperatoria Alcune molecole coinvolte nella carcinogenesi tiroidea sono state proposte come markers di malignità Risultati

25 TIR3B /TIR4 La maggior parte dei pz con nodulo indeterminate/sospetto sono sottoposti a intervento per la definizione diagnostica. L identificazione di un nuovo approccio diagnostico è di grande rilevanza per fornire dei nuovi criteri per una diagnosi preoperatoria Alcune molecole coinvolte nella carcinogenesi tiroidea sono state proposte come markers di malignità Risultati discrepanti sono stati riportati per i singoli markers immunoistochimici di malignità proposti. Application_of_Immunohistochemistry_to_Thyroid_Neoplasms 2018

26 Int. J. Mol. Sci. 2017, 18(4), 775

27 Follicular lesions

28 SUSPICIOUS FOR MALIGNANCY Nuclear features are suggestive but not fill morphological diagnostic criteria.

Several immunohistochemical markers using various antibodies have been reported to be of diagnostic utility in differentiating benign from malignant thyroid lesions Cell adhesion molecules (Gal-3)

29 Several immunohistochemical markers using various antibodies have been reported to be of diagnostic utility in differentiating benign from malignant thyroid lesions Cell adhesion molecules (Gal-3) Cytokeratins (CK19) Cell cycle proteins (cyclin D1, p27, p53) Oncoprotein (RET, PPAR-γ, β-catenin) Others (HBME-1, CD10, CD57, TPO) s [accessed Mar ].

30 Molecular markers in cytology Material: Discolored slide Thin layer Cell block

differentiated: CyclinD1, p53, Ki67 Rezk S, Ashraf K.

31 Panels of immuhistochemical markers that best support the diagnosis of malignancy PTC and FVPTC: Gal-3, HBME-1, CK19 RET β-catenina FTC: Gal-3, PPAR-γ Gal3 β-catenina Progression to poorly differentiated: CyclinD1, p53, Ki67 Rezk S, Ashraf K. Role of immunohistochemistry in the diagnosis and progression of follicular epithelium derived thyroid carcinoma. Appl Immunohistochem. Mol Morphol, 2005, 13(3):

32 Multifocal rather than diffuse distribution of nuclear features of papillary carcinoma HBME1

33 One focus of papillary carcinoma in encapsulated benign nodule HBME1 GAL-3 Cyclin D1

34 IMMUNOISTOCHIMICA NODULI TIROIDEI Differenziare tumori delle cellule follicolari dalle cellule C Caratterizzazione della neoplasia Lesioni paratiroidee Tumori scarsamente differenziati primitivi o metastatici Differenziare lesioni non neoplastiche da lesioni neoplastiche Markers prognostici

35 Markers prognostici Ki67 BRAF (V600E): alta specificità bassa sensibilità CD31 (> 4 foci di invasione vascolare >ATA hight risk) Haugen BR et al.thyroid Volume 26, Number 1, 2016

36 Lymphatic and blood vessel invasion D2-40 CD31 Giorgadze TA, Baloch ZW, Pasha T, Zhang PJ, LiVolsi VA. Mod pathol (11):

Reproducibility Preanalytic Acquisition (delay in putting samples into fixative) Fixation type and time Decalcification type and time Tissue processing

time) Antibody validation Instrumentation (different automated platforms, manual stains) Qualifications of IHC assay personnel VEQ Postanalytic Positive

37 Reproducibility Preanalytic Acquisition (delay in putting samples into fixative) Fixation type and time Decalcification type and time Tissue processing Slide-drying time and temperature Analytic Antibody selection (different clones, polyclonal) Antibody optimization (AR, antibody dilution, incubation time) Antibody validation Instrumentation (different automated platforms, manual stains) Qualifications of IHC assay personnel VEQ Postanalytic Positive and negative tissue controls Interpretation Result reporting Pathologist performance Arch Pathol Lab Med. 2014;138: ; doi: /arpa RA

39 RIPRODUCIBILITA Fissazione Cellularità Standardizzazione intralaboratorio Non tutti i markers mostrano pattern uniformi di colorazione. Attenzione alla colorazione non specifica (diffusione antigenica, coespressione antigenica etc..)

40 CONCLUSION Most of the neoplastic lesions originated from the thyroid gland are diagnosed based on well-characterized morphologic features. The use of ancillary techniques including immunohistochemistry can significantly improve diagnosis. However, a single marker is usually suboptimal in terms of sensitivity and specificity. Panels of 2 or more antibodies usually are more effective and can improve diagnostic accuracy in fine-needle aspirates and paraffinembedded tissue. [accessed Mar ].

41 GRAZIE

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