LABORATORY OF CELLULAR THERAPY G. LANZANI Scientific Director: Dr. M Introna. USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti Bergamo Director: Prof.

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1 LABORATORY OF CELLULAR THERAPY G. LANZANI Scientific Director: Dr. M Introna USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti Bergamo Director: Prof. A Rambaldi

2 DL 24/4/2006 n 219 Codice comunitario (attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE) Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceutici dalla produzione alla commercializzazione. Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (cellule per terapia somatica e/o terapia genica). Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliere Vedi legge 07/07/2009 n 88, G.U. 161 del 14/07/2009

3 Norme per la Sperimentazione Clinica DPR 21/09/2001 n 439 per Fasi I DL026/04/2002 Documentazione ISS per fasi I DL 24/06/2003 N 211 (attua 2001/20/CE) per GCP e successivo DL 21/12/2007 (IMPD) DL 06/11/2007 n 200 (attua 2005/28/CE) per GCP

4 Altre norme per la Sperimentazione Clinica DL 02/03/2004 e successivi per Banca Dati DL 05/12/2006 per Usi Consolidati e successivi decreti proroga DM 08/05/2003 per Usi Compassionevoli DL 05/12/2006 per Usi Compassionevoli

5 ISTITUTO DEI TESSUTI/CNT DL 06/11/2007 n 191 (attua 2004/23/CE) DL 25/01/2010 N 16 (attua 2006/17/CE e 2006/68/CE)

6 AIFA Area produzione e controllo Ufficio autorizzazioni officine Il Laboratorio di Terapia Cellulare G.Lanzani è autorizzato a produrre prodotti per terapia cellulare sottoforma di preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenterale preparate in asepsi. Roma, N am-144/2007

7 Chronology of the AIFA inspections up to final authorization of the Cell Factory DECEMBER /12/2005 1st General Inspection APRIL 07 12/04/2007 Inspection of follow up of corrective actions JULY 07 FEBRUARY 08 30/07/2007 Preliminary authorization of the Lanzani Cell Factory by AIFA 27/02/2008 2nd General inspection NOVEMBER 08 28/11/2008 Official authorization of the Lanzani Cell Factory by AIFA n am 189/2008 NOVEMBER /11/09 Inspection of follow up

8

9 Other antigens or naive

10 Ruolo soppressorio sulla immunità da parte delle cellule MSC

11 Clinical course and immunosuppression of the patient Le Blanc et al. Lancet 2004

12 Survival from time of haemopoietic stem cell transplantation in patients given mesenchymal stem cells n = 30 n = 25 Le Blanc et al, Lancet 2008

13 Production MSC Week Expansion from BM From frozen vial P1 Quality controls Phenotype, viability Endotoxin LAL 1 incubator Medium, ½ liter PL Sterility 2 3 bags with x10 6 / batch o 1 with 100 x small bags/ batch Mycoplasma Culture (EP) Laboratory TC2: 2 incubators

14 hmsc EXPANSIONS from fresh material Code Origin of material hmsc Frozen (x 10 6 ) Frozen bags (mean:80x10 6 cells/bag) Number of frozen vials at p1 (~2x10 6 cells/vial) BG-MSC2 washout BG-MSC7 washout BG-MSC11 washout BG-MSC12 washout from frozen vials bank Code BG-MSC2 BG-MSC7 BG-MSC11 BG-MSC12 n vials used Frozen bags (mean 1x10 7 cells/bags) Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009

15 Time scale of approval of Phase I clinical study with MSC in agvhd NOVEMBER 08 24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS APRIL 09 24/04/2009 Authorization by ISS JULY 09 16/07/2009 Authorization by E.C. Monza NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo

16 MSC for the treatment of severe agvhd Dossier n Eudra CT: 2008/007869/23 Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV agvhd Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca. Clinical PI: Dott. E. Biagi Authorization by ISS on 24/04/2009 Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009

17 MSC infusions in pediatric patients Pts GVHD Grading at MSC Infusion No. of MSC Infusion Infused MSC (Dose/kg) Response After MSC Infusion Follow-up 1A Chronic overlap syndrome 1 1 x 10 6 /kg Partial response temporary Alive with chronic (skin and mucosae grade III) Skin and mucosae grade I skin and mucosae GVHD grade II 2A Chronic overlap syndrome 1 1 x 10 6 /kg Complete response definitive Alive with skin chronic GVHD grade I (skin and mucosae grade II) No GVHD 2B Chronic mucosae and liver x 10 6 /kg Partial response temporary grade III Chronic mucosae and liver grade II 3A Acute skin grade I 1 1 x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 4A Acute skin grade I x 10 6 /kg No response Alive, no GVHD Skin GVHD grade I 4B Chronic skin and liver grade III x 10 6 /kg Partial response temporary Skin and liver grade II 5A Acute skin grade II x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 5B Chronic skin GVHD grade I x 10 6 /kg No response Skin GVHD grade I 6A Chronic overlap (skin and x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD mucosae grade III) 7A Acute skin grade I x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 8A Acute (skin II and gut grade IV) x 10 6 /kg Partial response temporary Death for progressive gut GVHD Skin and gut grade II And pulmonary aspergillosis 9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 10 6 /kg No response Death for sepsis Skin and gut grade IV 10A Acute gut grade IV x 10 6 /kg Partial response temporary Alive, no GVHD Grade III 11A Acute gut grade IV x 10 6 /kg No response and pneumonia Deah for gut GVHD Lucchini G. et al, BBMC, 2010, in press

18 MSC per il trattamento della GVHD acuta grave Richiesta di emendamento sostanziale a ISS per allargamento a 13 centri ematologici italiani e cambio dosaggio (3 somministrazioni al posto di 2) Aspetti logistici critici Coordinamento pediatrico: Monza Coordinamento adulti: Bergamo In attesa di risposta formale da ISS A novembre 2010 già arruolati 13 pazienti

19 Protocol for generation of cytokine-induced killer cells INFgamma 1000 IU/ml OKT3 50 ng/ml IL2 500 IU/ml IL2 500 IU/ml every 3-4 days PBMCs Day 0 Day 1 Day 21 CIK culture CD56 CD56 CD3 CD56 CD56 NK CD56 CIK CD3 CD3 Introna M. et al, BMT, 2006 Franceschetti M. et al., Exp Hematol, 2009 Pievani A et al., Blood in press Pievani A. et al., submitted CD3 T

20 Homing of cytokine-induced killer cells in vivo Murine CIK cells GFP transduced and i.v. injected in syngenic animals carrying s.c. lymphoma Day 0: early localization of CIK cells to the lungs; Day 1: distribution to other sites, including liver and spleen; Day 3: preferential infiltration of subcutaneous tumor site; Day 12: regression of tumor and minimal signal from remaining CIK cells Edinger, M. et al, Blood 2003

21 Trafficking and survival of CIK cells upon adoptive transfer Nishimura, R. et al. Blood 2008;112:

22 Produzione CIK Week Produzione Controlli di qualità Feno[po, vitalità Nostro LAL e mycoplasma (Mycoalert) Sterilità 1 incubatore Terreno, OKT3, IFNg, IL sacche/ produzione Mycoplasma Coltura (P.E.) Laboratorio TC1: 3 incubatori

23 Cellule CIK da donatore per le ricadute leucemiche Dossier n PRE Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I Approvazione in data 30/05/2005 Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca.

24 Chiusura studio CIK Fase I 05/06 Arruolamento di 17 pazienti tutti singolarmente autorizzati dall Ufficio comma c del ISS dietro specifica richiesta Invio manoscritto con dati di 11 pazienti Pubblicazione su Hematologica 2007, 92, 07, Invio relazione finale chiusura Fase I

25 Results Clinical response None 6 Stable Disease 1 Hematologic Improvement 1 Complete response 3 Alive/dead 4/7 Days of Median Follow up from transplant 782 ( ) Introna et al, 2007

26 Response of pt 765 as determined by chimerism analysis of CD3+ cells 100% DONOR 0% RECIPIENT Days post tranplant 27 77% % 6% DLI (+102) % CIK (+132) % % CIK (+174) % Introna et al, 2007

27 AIFA Protocollo CIK 2 Numero EudraCT: Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfociti killer indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali Fase II autorizzata da AIFA il , Prot.n AIFAII/37533/P Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009 Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca, con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano. PI clinico: Prof. A Rambaldi

28

29 Therapeutic use Combination 1st DLI: 1x106/kg 1 2nd DLI: 1x106/kg 2 1 st CIK cells infusion 1x10 6 /Kg 1x10 6 /Kg 2 nd CIK cells infusion 1x10 6 /Kg 5x10 6 /kg 3 rd CIK cells infusion 5x10 6 /kg 5x10 6 /kg 3 1x10 6 /Kg 5x10 6 /kg 10x10 6 /kg 4 5x10 6 /kg 5x10 6 /kg 10x10 6 /kg

30 None 1,5, BG F L.H. VIII None 1,5, BZ F A.G. VII None 1, BZ F M.A. VI None 1, BZ F V.D. V None BG M P.P. IV None BG M T.G. III None BG F V.A. II None BG M M.C.M. I Toxicity (agvhd) Treatment Group City Gender Patient N CIK II protocol: enrollment at November 2010

31 Organigramma Unità Clinica Programma di Trapianto delle Cellule Staminali Emopoietiche Direttore: Alessandro Rambaldi USC Ematologia Centro di Raccolta SIMT Responsabile: Dott.essa A. Falanga Laboratorio di Terapia Cellulare G. Lanzani Responsabile: M. Introna Personale Amministrativo E. Traini 2. Produzione di prodotti di Terapia Cellulare in GMP Qualified person: M. Introna Assicurazione di Qualità Responsabile: J. Golay Operatori: G. Borleri C. Capelli A. Pievani E. Gotti L. Bologna A. Amaru 1. Processazione di cellule staminali emopoietiche Responsabile: M. Introna Referente Qualità del Laboratorio (RQL): J. Golay Operatori G. Borleri C. Capelli E. Gotti 3. Ricerca e Sviluppo Group leaders M. Introna J. Golay

32 Laboratorio di Terapia Cellulare G.Lanzani USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo Alessandro Rambaldi Martino Introna Josée Golay Gianmaria Borleri Chiara Capelli Alice Pievani Elisa Gotti Luca Bologna Ariel Amaru Elisabetta Traini Microbiologia OORRBG Ufficio Tecnico OORRBG Ufficio Qualità OORRBG Uffici Amministrativi OORRBG Ufficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie Direttore USC Ematologia Qualified Person DT e RRP Quality Control e RRCQ Operator Production Operator Production Operator Production Operator Production Operator Quality Control PhD, Ricerca e sviluppo Operatore di supporto gestionale Ricerca donatori: E. Oldani Gestione software: F. Delaini Gestione GCP: ML Ferrari Associazione Italiana Contro le Leucemie Linfomi e Mielomi ONLUS sezione PAOLO BELLI

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