Tossicologia Forense

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1 Tossicologia Forense La tossicologia forense è la branca della tossicologia a servizio delle scienze forensi Scienza che ricerca e identifica la presenza di droghe e veleni in fluidi biologici, tessuti e organi. PARACELSO sola dosis venenum facit [trad. è la dose che fa (di una sostanza) il veleno.

2 Strumentazione analitica L analisi di screening, di conferma e l eventuale identificazione di composti incogniti, particolarmente in basse concentrazioni, richiede l utilizzo di tecniche di spettrometria di massa associate a tecniche cromatografiche LC/MS GC/MS ICP-MS

3 TOSSICOLOGIA CLINICA Analisi finalizzate alla Diagnosi, trattamento tossicodipendenti afferenti alle strutture pubbliche e private TOSSICOLOGIA FORENSE Analisi per scopi amministrativi o medico-legali: Commissioni medico-legali: disabilità alla guida. Prefettura: verifica trattamenti alternativi alle sanzioni previste dal DPR 309/1990. Determinazione requisiti psicofisici per il rilascio del porto d armi (GU 304/1991). Forze d ordine: accertamento stato ebbrezza o assunzione sostanze stupefacenti nella guida (L. 214/2003 ART ). Enti pubblici e/o privati: accertamenti sui lavoratori le cui mansioni comportano rischi per la sicurezza, l incolumità e la salute di terzi (art. 125 DPR 285/1992).

4 Art. 186 Alcolemia g/l Sanzione Amministrativa Sospensione Patente Altro mesi /L 6 12 mesi Arresto 6 mesi > mesi Arresto 6 12 mesi Confisca del veicolo Se il conducente in stato di ebrezza ha causato un incidente, le sanzioni sono raddoppiate.se il valore di etanolo è > 1,5 g/l la patente è revocata

5 CUT - OFF E un valore di riferimento espresso in concentrazione, al di sopra del quale il risultato di un test analitico è giudicato positivo e al di sotto del quale il test è giudicato negativo

6 1. L analita coniugato con un marcatore si lega in modo specifico con l anticorpo dando luogo ad un prodotto colorato X ANTICORPO ANALITA CONIUGATO CON UN MARCATORE 2. L analita libero, da determinare, compete con il coniugato nella reazione con l anticorpo; molecole simili possono interferire e competere anch esse 3. L interazione tra l anticorpo e l antigene, marcato e non, dà luogo ad un segnale la cui intensità è quantificabile e può essere messa in relazione con la concentrazione dell analita presente nel campione.

7 Cut-off screening urine OPPIACEI 300 ng/ml COCAINA 300 ng/ml CANNABINOIDI 50 ng/ml AMFETAMINE ED ANALOGHI 500 ng/ml BARBITURICI 300 ng/ml BENZODIAZEPINE 200 ng/ml METADONE 300 ng/ml

8 Cut-off test GCMS conferma urine Morfina, Codeina 6-MonoAcetilMorfina Cocaina, Benzoilecgonina Ac. 11-nor-delta-9-THC Amfetamina, Metamfetamina, Mdma, Mda, Mdea 200 ng/ml 10 ng/ml 150 ng/ml 15 ng/ml 200 ng/ml 200 ng/ml Metadone, EDDP 100 ng/ml

9 Cut-off test GCMS matrice cheratinica Morfina, 6MAM, Codeina 0,2 ng/ml Cocaina, 0,2 ng/ml Benzoilecgonina, CocaEtilene Cannabidiolo, Cannabinolo, Delta-9-THC Amfetamina, Metamfetamina, Mdma, Mda, Mdea 0,05 ng/ml 0,05 ng/ml 0,2 ng/ml 0,2 ng/ml Metadone, EDDP 0,2 ng/ml

10 LE PROCEDURE CATENA DI CUSTODIA: CON IL TERMINE CATENA DI CUSTODIA SI INTENDE LA DOCUMENTAZIONE CHE ACCOMPAGNA IL CAMPIONE E CHE RIPORTA NOTIZIE SUL PRELIEVO, SUL TRASPORTO E SULLA CONSERVAZIONE MODULO RICHIESTA ANALISI OGNI CAMPIONE DEVE ESSERE ACCOMPAGNATO DA UN APPOSITO MODULO DI RICHIESTA ANALISI NEL MODULO DEVONO ESSERE RIPORTATI: DATI DEL PAZIENTE, DATA E ORA DEL PRELIEVO MOTIVO DELLA RICHIESTA IN MODO DA POTER INDIRIZZARE IL LABORATORIO NELLA SCELTA DELLE ANALISI

11 STRUTTURA ORGANIZZATIVA CONTENITORE IL CAMPIONE VA DIVISO IN DUE ALIQUOTE CHE DEVONO ESSERE SIGILLATE CIASCUN CONTENITORE DEVE ESSERE DOTATO DI ETICHETTA IN CUI E RIPORTATA: L IDENTITÀ DEL SOGGETTO INDICATA NEL DOCUMENTO DATA ORA E LUOGO DEL PRELIEVO FIRMA DEL PAZIENTE FIRMA DEL TECNICO ADDETTO AL PRELIEVO

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13 Laboratorio SPECIALIZZATO nell ambito della Biochimica Tossicologica LABORATORIODI II LIVELLO CHE ESEGUE SIA LE ANALISI INIZIALI CHE DI CONFERMA MATRICI BIOLOGICHE METODICHE TIPO DI ANALISI CUT OFF STRUMENTAZIONI PROCEDURE CONTROLLO DI QUALITA CATENA DI CUSTODIA TUTTE IMMUNOCHIMICHE E CROMATOGRAFICHE QUANTITATIVA GTFI ANALIZZATORI AUTOMATICI DI CHIMICA CLINICA GC, HPLC, GCMS, LCMS, ICPMS QUELLE STABILITE NEI MANUALI DELLA QUALITA E NELLE LINEE GUIDA PARTECIPAZIONE AD UN PROGRAMMA VEQ CHE COMPRENDA TUTTI GLI ANALITI SI

14 IL FENOMENO DELL ABUSO ALCOLICO OMS Terzo posto tra i 26 fattori di rischio 20-30% costi cure sanitarie 63% delle morti Premature Secondo solo a TABACCO e IPERTENSIONE Forte aumento delle problematiche sanitarie legate all eccessivo consumo di alcol Necessità di trovare modalità diagnostiche più efficaci per la riduzione del consumo di alcol

15 Ottima correlazione tra le due metodiche: R2= 0,917 Ottimi i valori delle DS: DS gas= 90,162 DS enz= 89,7609 La maggior parte dei valori è compresa all interno delle due DS Metodi sovrapponibili, ripetibili e confrontabili (R di Bland Altman= 0,0002 e curva di correlazione) La discrepanza tra alcuni valori (es 113 mg/dl VS 105 mg/dl) è di scarso interesse clinico e medico-legale Da notare una concordanza per valori prossimi alla soglia legale

16 ETIL GLUCURONIDE E un metabolita diretto dell alcool etilico Finestra temporale di 72 ore Si forma per coniugazione dell Etanolo con l acido glucuronico (nel fegato) Applicazione nel monitoraggio dei pazienti alcolisti Applicazioni cliniche e medico-legali

17 Diversi Cut Off Applicazioni Diverse 1000 ng\ml Consumo non Domestico 500 ng\ml Ingestione d Alcol Etilglucuronide Applicazioni Monitoraggio Alcolisti in Trattamento 500 ng\ml Ingestione di Alcol 100 ng\ml Totale astinenza da Alcol

18 Metodica GC in spazio di testa per l'analisi dell'etanolo su sangue

19 CDT Nel 1976 Stibler e Kjiellin osservarono che nel LCS degli etilisti era presente una forma di Transferrina con pi > 5.7 Trasferrina Carboidrato Carente o Desialata È uno dei test di più recente introduzione per svelare l abuso alcolico Nel corso di astinenza il valore di CDT si normalizza con una emivita media di 15gg. Utile per il monitoraggio v Il termine CDT è il nome collettivo di un gruppo di isoforme minori della transferrina che presentano un ridotto grado di glicosilazione, la cui concentrazione sierica risulta strettamente correlata all abuso alcolico

20 Alterazione genetica: alti livelli di CDT Ethanol EtG/creat CDT % 0 Acute 0 Resent 0 Chronic Blood Test su testing sangue CDT CDT Week Giorni days settimana Urine Test su Testing urine Test su urine ML MT WM GT VF S DS ML MT WM GT VF EtG EtG EtG EtG EtG EtG Alc Alc Alc Alc Alc Alc

21 ASTINENZA Ethanol EtG/creat CDT % 0 Acute 0 Resent 0 Chronic Test su sangue CDT CDT Giorni settimana Test su urine Test su urine ML MT WM GT VF S DS ML MT WM GT VF EtG EtG EtG EtG EtG EtG Alc Alc Alc Alc Alc Alc

22 Ethanol EtG/creat CDT % ALCOLISTA 0 Acute 0 Resent 0 Chronic Blood Test su testing sangue CDT CDT Week Giorni days settimana Urine Test su Testing urine Urine Testing Test su urine ML MT WM GT VF S DS ML MT WM GT VF EtG EtG EtG EtG EtG EtG Alc Alc Alc Alc Alc Alc

23 Ethanol EtG/creat CDT % DISSUEFAZIONE 0 Acute 0 Resent 0 Chronic Blood Test su testing sangue CDT CDT Week Giorni days settimana Urine Test su Testing urine Test su urine ML MT WM GT VF S DS ML MT WM GT VF EtG EtG EtG EtG EtG EtG Alc Alc Alc Alc Alc Alc

24 Il Furbone Ethanol EtG/creat CDT % 0 Acute 0 Resent 0 Chronic Blood Test su testing sangue CDT CDT Week Giorni days settimana Urine Test su Testing urine Test su urine ML MT WM GT VF S DS ML MT WM GT VF EtG EtG EtG EtG EtG EtG Alc Alc Alc Alc Alc Alc

25 Ciò che si vede è il risultato di come si guarda Kierkegaard Grazie per l attenzione Chi beve solo acqua ha qualche cosa da nascondere Baudelaire