RIDASCREEN CIS. Test immunoenzimatico per la rilevazione del latte vaccino nel latte ovino e caprino e nel formaggio ovino e caprino. Art. No.

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1 RIDASCREEN CIS Test immunoenzimatico per la rilevazione del latte vaccino nel latte ovino e caprino e nel formaggio ovino e caprino Art. No.: R4302 Test in vitro Conservare a 2-8 C R-Biopharm AG, Darmstadt, Germany Tel.: +49 (0) / Telefax: +49 (0)

2 Prodotto da: R-Biopharm AG An der neuen Bergstraße 17 D Darmstadt Per informazioni: Telefono: Centralino ( ) Telefax / Ordini ( ) orders@r-biopharm.de Marketing ( ) info@r-biopharm.de Distribuito da: R-Biopharm Italia Srl Via Morandi, Melegnano MI Telefono info@r-biopharm.it RIDA e RIDASCREEN sono marchi registrati della R-BIOPHARM AG Produttore: R-BIOPHARM AG, Darmstadt, Germania R-BIOPHARM AG è certificata ISO RIDASCREEN CIS

3 RIDASCREEN CIS Introduzione RIDASCREEN CIS (Cod.: R4302) è un immunodosaggio enzimatico per la rilevazione del latte vaccino nel latte ovino e caprino e nel formaggio ovino e caprino. Tutti i reagenti richiesti per l analisi immunoenzimatica compresi gli standard - sono contenuti nel kit. Il kit è sufficiente per 48 determinazioni (inclusi gli standard). Per la quantificazione è richiesto uno spettrofotometro per micropiastre. Preparazione campioni: Tempo richiesto: Limite di rilevabilità: (corrispondente alla sostanza Standard) latte: diluizione formaggio: omogeneizzazione, centrifugazione o filtrazione preparazione dei campioni (10 campioni) latte:... ca. 10 min formaggio:... ca. 20 min esecuzione del test (tempo d incubazione) h 0,1% latte vaccino nel latte ovino e caprino 0,1% latte vaccino nel formaggio ovino e caprino RIDASCREEN CIS

4 1. Scopo RIDASCREEN CIS è un immunodosaggio enzimatico per la rilevazione del latte vaccino nel latte ovino e caprino e nel formaggio ovino e caprino. 2. Generale Il latte ovino e il latte caprino sono molto più costosi del latte vaccino, che viene spesso utilizzato per allungarli. L adulterazione con latte si rileva mediante cromatografia o elettroforesi. Questi sono metodi laboriosi e che richiedono attrezzature sofisticate e quindi di scarso interesse nelle rilevazioni di routine per prodotti come il latte e il formaggio. 3. Principio del test Il test si basa su una reazione antigene-anticorpo. La presenza del latte vaccino nel campione viene stabilita mediante la rilevazione immunologica delle IgG bovine (l immunoglobulina G è una classe di anticorpi), le quali sono costituenti naturali del latte vaccino. I pozzetti della micropiastra sono rivestiti con anticorpi specifici anti-igg bovine. Nel caso di un prodotto adulterato, gli anticorpi contenuti nel latte vaccino si legano all anticorpo immobilizzato. I componenti non legati vengono rimossi con il lavaggio. Con l aggiunta del coniugato, che è un anticorpo coniugato con perossidasi diretto contro le IgG bovine, si individua l antigene legato (nel caso specifico le IgG bovine). L enzima coniugato non legato viene quindi eliminato con il lavaggio. Nei pozzetti vengono successivamente aggiunti e quindi incubati il substrato enzimatico (perossido d urea) e il cromogeno (tetrametilbenzidina). L'enzima coniugato legato converte il cromogeno incolore in un prodotto blu. L'aggiunta della soluzione d arresto porta al viraggio del colore dal blu al giallo. La misurazione fotometrica viene eseguita a 450 nm. 4 RIDASCREEN CIS

5 4. Reagenti forniti Ogni kit contiene materiale sufficiente per 48 analisi (incluse le analisi degli standard). Ogni kit contiene: 1 x Micropiastra (6 strip da 8 pozzetti estraibili ciascuna) rivestita con anticorpi anti-igg bovine 3 x Soluzioni standard per il latte *), 1.3 ml ciascuna 1A: 10 % latte vaccino 2A: 1 % latte vaccino 3A: 0.1 % latte vaccino 3 x Soluzioni standard per il formaggio *), 1.3 ml ciascuna 1B: 10 % latte vaccino 2B: 1 % latte vaccino 3B: 0.1 % latte vaccino 1 x Coniugato (1.3 ml)... tappo rosso anticorpo anti-igg bovine coniugato con perossidasi, concentrato 1 x Substrato (7 ml)... tappo verde contiene perossido d'urea 1 x Cromogeno (7 ml)... tappo blu contiene tetrametilbenzidina 1 x Soluzione di stop (14 ml)... tappo giallo contiene acido solforico 1N 1 x Buffer (13 ml)... tappo bianco diluente del campione e del coniugato *) I fattori di diluizione (100 per il latte, 10 per il formaggio) sono già compresi nelle concentrazioni sopra riportate. Pertanto il contenuto di latte vaccino si può leggere direttamente dai risultati degli standard. 5. Materiale richiesto ma non fornito 5.1. Attrezzatura: spettrofotometro per micropiastre (450 nm) centrifuga e provette per centrifuga (solo per i campioni di formaggio) stomacher o mortaio (solo per i campioni di formaggio) pipette graduate micropipette da 20 µl, 200 µl e µl RIDASCREEN CIS

6 6. Avvertenze e precauzioni per gli utilizzatori Il test deve essere eseguito da personale di laboratorio qualificato. Le istruzioni per l uso devono essere seguite scrupolosamente. La soluzione d arresto contiene acido solforico 1N (R36/38, S2-26). 7. Conservazione Conservare il kit a 2-8 C. Non congelare alcun componente del kit. I pozzetti non utilizzati vanno riposti insieme all essiccante nella loro confezione originale, che deve essere ben richiusa e conservata a 2-8 C (35-46 F). Il cromogeno incolore è fotosensibile: evitarne l'esposizione alla luce diretta. La garanzia di qualità del prodotto non si applica oltre la data di scadenza indicata sulla confezione. Non scambiare i reagenti di kit appartenenti a lotti diversi. 8. Indicazioni di instabilità e deterioramento dei reagenti Qualsiasi colorazione bluastra della soluzione cromogeno, prima dell esecuzione del test Un valore di assorbanza (450 nm) relativo allo standard 1A e 1B inferiore a 0,8 9. Preparazione dei campioni I campioni devono essere conservati in luogo fresco, al riparo dalla luce latte diluire i campioni di latte 1:100 (1+99) con acqua distillata (es. 0,1 ml latte + 9,9 ml di acqua distillata) nel saggio utilizzare 100 µl per pozzetto 9.2. formaggio omogeneizzare 1 g di formaggio con 10 ml di acqua distillata centrifugare per 10 minuti a 4000 g e 15 C (per rimuovere le particelle si può anche ricorrere alla filtrazione) nel saggio utilizzare 100 µl per pozzetto 6 RIDASCREEN CIS

7 10. Esecuzione del test Indicazioni preliminari Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente prima dell'uso (20-25 C/68-77 F). L anticorpo coniugato con enzima (enzima coniugato, flacone con tappo rosso) è fornito concentrato. Dal momento che l enzima coniugato diluito ha una stabilità limitata, è bene ricostituire solo la quantità necessaria ad effettuare il dosaggio. Prima di pipettare l'enzima, agitarlo accuratamente. Ricostituire l'enzima coniugato diluendolo 1:11 (1+10) nel buffer (es. 100 µl di concentrato + 1,0 ml di buffer, sufficiente per 1 strip). Le soluzioni standard per il latte (1% latte ovino, acqua distillata, 0,1% azide) sono fornite pronte all uso alle seguenti concentrazioni: Standard 1A: 0.1 % di latte vaccino diluito in latte ovino Standard 2A: 0.01 % di latte vaccino diluito in latte ovino Standard 3A: % di latte vaccino diluito in latte ovino Data una diluizione del campione di 1:100, gli standard corrispondono a una concentrazione di latte vaccino nel campione pari al 10%, all 1% e allo 0,1%. Le soluzioni standard per il formaggio (1% latte ovino, acqua distillata, 0,1% azide) sono fornite pronte all uso alle seguenti concentrazioni: Standard 1B: 340 ng/g di IgG bovine, corrispondenti a ca. l 1,0% di latte vaccino Standard 2B: 34 ng/g di IgG bovine, corrispondenti a ca. lo 0,1% di latte vaccino Standard 3B: 3.4 ng/g di IgG bovine, corrispondenti a ca. lo 0,01% di latte vaccino Data una diluizione del campione di 1:10, gli standard corrispondono a una concentrazione di latte vaccino nel campione pari al 10%, all 1% e allo 0,1%. Nota: Le concentrazioni sono state determinate utilizzando formaggi di riferimento CE. RIDASCREEN CIS

8 10.2. Procedura per l esecuzione del test Eseguire attentamente la procedura di lavaggio raccomandata. Evitare il prosciugamento dei pozzetti tra i vari passaggi. 1. Inserire un numero sufficiente di pozzetti nel supporto della micropiastra per tutti gli standard da eseguire in duplicato e per i campioni per singola determinazione. Registrare le posizioni assegnate agli standard e ai campioni. 2. Addizionare 100 µl di ciascuna soluzione standard (latte e/o formaggio) ai pozzetti standard e ai campioni preparati nei pozzetti corrispondenti. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F). 3. Svuotare i pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio di carta assorbente per almeno tre volte in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 µl di acqua distillata ed eliminare nuovamente il liquido, ripetendo l operazione altre due volte. 4. Addizionare in ogni pozzetto 100 µl di enzima coniugato diluito, miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F). 5. Svuotare i pozzetti e picchiettare energicamente la piastra su un foglio di carta assorbente per almeno tre volte in modo da eliminare tutto il liquido dai pozzetti. Riempire i pozzetti con 250 µl di acqua distillata ed eliminare nuovamente il liquido, ripetendo l operazione altre due volte. 6. Aggiungere ad ogni pozzetto 50 µl di substrato e 50 µl di cromogeno. Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e incubare per 30 minuti a temperatura ambiente (20-25 C / F) e al buio. 7. Addizionare 100 µl di soluzione di arresto in ogni pozzetto. Miscelare delicatamente facendo oscillare manualmente la piastra e leggere le assorbanze a 450 nm contro aria. Leggere entro 30 minuti. 11. Risultati latte: Calcolare il valore medio delle assorbanze a 450nm per ogni standard (1A, 2A, 3A). I campioni con assorbanze a 450 nm inferiori allo standard 3A non sono adulterati oppure contengono meno dello 0,1% di latte vaccino. I campioni con assorbanze a 450 nm inferiori allo standard 2A e superiori allo standard 3A hanno un contenuto di latte vaccino inferiore all 1%. 8 RIDASCREEN CIS

9 I campioni con assorbanze a 450 nm superiori allo standard 2A contengono più dell 1% di latte vaccino. formaggio: Calcolare il valore medio delle assorbanze a 450 nm per ogni standard (1B, 2B, 3B). I campioni con assorbanze a 450 nm inferiori allo standard 3B non sono adulterati oppure contengono meno dello 0,1% di latte vaccino. I campioni con assorbanze a 450 nm inferiori allo standard 2B e superiori allo standard 3B hanno un contenuto di latte vaccino inferiore all 1%. I campioni con assorbanze a 450 nm superiori allo standard 2B contengono più dell 1% di latte vaccino. Nota: Il test RIDASCREEN CIS individua i componenti naturali del latte vaccino (IgG bovine), pertanto risulta negativo qualora si impieghi latte vaccino UHT. Nel processo UHT, infatti, le immunoglobuline (IgG) si denaturano e non possono essere rilevate. R-Biopharm non fornisce alcuna garanzia, esplicita o implicita, oltre a quella relativa alla qualità standard dei materiali di cui sono costituiti i suoi prodotti. Nel caso tali materiali risultassero difettosi, R-Biopharm si impegna a fornire prodotti sostitutivi. Non esiste garanzia di commerciabilità o di idoneità del prodotto per uno scopo particolare. R-Biopharm non è da ritenersi responsabile per danni, ivi compresi danni speciali o indiretti, o spese derivanti direttamente o indirettamente dall utilizzo del prodotto. RIDASCREEN CIS