CELL BLOCK Preparazione e uso per immunoistochimica

Transcript

1 CELL BLOCK Preparazione e uso per immunoistochimica EXPOSANITA 2018 PATOLOGIA NODULARE DELLA TIROIDE: focus sugli approcci diagnostici Valentina Bartolucci UOC Anatomia Patologica - Università Campus Biomedico Roma

2 COSA E UN CELL BLOCK? E una metodica di allestimento che permette di ottenere un preparato in paraffina a partire da un campione citologico. Questa metodica permette di allestire numerosi vetrini per colorazioni speciali e immunoistochimica da un unico blocchetto. Aumenta sensibilità e specificità diagnostica rispetto allo striscio classico.

3 COME SI ALLESTISCE UN CELL BLOCK PLASMA/TROMBINA ALBUMINA AGAR HISTOGEL CELLIENT

4 PLASMA/TROMBINA Tra le prime metodiche a essere utilizzata per la semplicità e la facilità di reperimento dei materiali. La trombina si acquista mentre il plasma viene fornito dal laboratorio analisi. Metodica: 1. Centrifugazione 2. Scarto del sovranatante 3. 4 gocce di plasma per ogni ml di sedimento 4. 4 gocce di trombina 5. Risospendere 6. Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo 7. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina

5 ALBUMINA Metodica piuttosto rapida con un unico limite, non funziona se il paziente ha assunto anticoagulanti. Si basa sulla coagulazione dell albumina bovina. Metodica: 1. Centrifugazione 2. Scarto del sovranatante gocce di albumina bovina al 30% 4. Fissare in alcol Lasciare riposare qualche minuto fino alla formazione del coagulo 6. Recuperare il coagulo e fissarlo in formalina

6 GEL AGGREGANTI: AGAR/HISTOGEL Sono entrambi gel che vengono fusi ad alte temperature, aggiunti al pellet, una volta raffreddati trattengono al loro interno le cellule e possono essere processati come un qualunque campione istologico. E una metodica più lunga delle altre ma permette di ottenere ottimi risultati.

7 AGAR - ALLESTIMENTO - Centrifugazione 1600 rpm per 10

8 AGAR - ALLESTIMENTO -

9 AGAR - ALLESTIMENTO - Centrifugazione 2700 rpm per 5

10 AGAR - ALLESTIMENTO - Si aggiunge agar sciolto a una temperatura di

11 AGAR - ALLESTIMENTO - 2 minuti a 90 C per far sciogliere nuovamente

12 AGAR - ALLESTIMENTO -

13 AGAR - ALLESTIMENTO -

14 Metodica: Il campione viene concentrato in un filtro grazie ad un sistema sottovuoto. Questo pellet viene fissato con un fissativo a base di metanolo. Si può utilizzare anche la formalina per una questione di rispetto dei protocolli di immunoistochimica del laboratorio. Il pellet viene processato e incluso in un blocchetto di paraffina. Tutto il processo dura 45 minuti per singolo campione. CELLIENT E uno strumento che permette di automatizzare l allestimento e la processazione dei citoinclusi.

15 CELL BLOCK VS STRISCIO: VANTAGGI Le cellule sono concentrate in un punto preciso del vetrino. Possibilità di allestire ulteriori vetrini a partire dallo stesso pellet, anche a distanza di tempo. I cell block vengono fissati in formalina, quindi si possono eseguire tutte le colorazioni speciali e immunoistochimica come su preparato istologico. Il campione è rappresentato nella sua totalità compresi aggregati cellulari o frammenti di tessuto (riconoscimento pattern tumorale).

16 figure professionali. CELL BLOCK VS STRISCIO: SVANTAGGI Tempo: L allestimento dei citoinclusi rispetto allo striscio richiede molto più tempo. Impiego di un operatore dedicato: L allestimento del citoincluso a differenza dello striscio può essere eseguito solo in laboratorio dal personale tecnico addestrato, mentre lo striscio può essere allestito in ambulatorio da diverse

17 IMMUNOISTOCHIMICA I campioni allestiti come cell block vengono fissati in formalina. Questo permette di effettuare immunoistochimica senza modificare i protocolli ottimizzati per l istologia, permettendo così standardizzazione e riproducibilità. Vengono allestiti vetrini con sezioni spesse 4 µm. Anticorpi testati su agoaspirato tiroideo: HBME-1 TIREOGLOBULINA GALECTINA3 TTF-1 CD56 CALCITONINA CK 19

18 GRAZIE PER L ATTENZIONE