GUIDA AGLI ESAMI DI LABORATORIO

Transcript

1 Pag 1 di 27 Milano, Il Direttore dell U.O.:

2 Pag 2 di 27 A. Presentazione Il, è classificato, ai sensi del DGR VII/3313 del e successive integrazioni, come Laboratorio specializzato in Biochimica Clinica e Tossicologia, codice SmeL 869. Il Laboratorio, logisticamente collocato al Piano Rialzato del Padiglione Guaita dell Ospedale dei Bambini Vittore Buzzi dell A.O. Istituti Clinici di Perfezionamento di Milano, è operativamente costituito da due settori integrati con attività strettamente correlate ed interdipendenti, denominati: 1. Settore Screening Neonatale (sigla: Scr). 2. Settore Biochimica delle Malattie Ereditarie (sigla: ). Indirizzo: Ospedale dei Bambini V. Buzzi A.O. Istituti Clinici di Perfezionamento Via Castelvetro n Milano. Telefoni diretti: Direzione: ; ; fax Segreteria: tel ; fax Laboratorio Screening: /.5671 Laboratorio : ;.5795.; Posta elettronica: laboratorio.screening@icp.mi.it Orario di Servizio lunedì venerdì ore Il Laboratorio di Screening Neonatale ha una propria politica di assicurazione della qualità, realizzata attraverso il Programma di Controllo di Qualità Interno e la partecipazione attiva ai più importanti Programmi (settoriali) di Valutazione Esterna della Qualità (v.tabella 1)

3 Pag 3 di 27 Tabella 1: Programmi Internazionali di VEQ. b-phe b-tsh; b-17 OHP b-trypsine ; b-tsh b-17 OH P Tabella 1 1)Interlaboratory Quality Assurance for Newborn Screening - Germany 2)Newborn Screening Quality Assurance Program - Center of Disease Control, Atlanta,USA 3)Programma di Controllo Qualità per HPA/PKU (SIMMESN) Deutsche Gesellschaft fur Klinische Chemie (Germany) Newborn Screening Quality Assurance Program Proficiency Testing-Center of Disease Control, Atlanta,USA b-acylcarnitines ; SUAC ; Newborn Screening Quality Assurance Program b-amminoacidi (phe- Proficiency Testing-Center of Disease Control, leu-met-tyr-val-cit- Atlanta,USA arg) External Quality Assurance Scheme ERNDIM AMMINOACIDI (Quantitative Scheme) INSTAND e.v. (Germany) (Quantitative /qualitative Scheme) Ac ORGANICI External Quality Assurance Scheme ERNDIM (Quantitative /Qualitative Scheme) Ac.OROTICO ; HBA External Quality Assurance Scheme ERNDIM External Quality Assurance Scheme ERNDIM OMOCISTEINA GTFCH External Quality Assurance Scheme ERNDIM AVM HVA -5HIAA INSTAND e.v. (Germany) AO.CAREGGI Firenze CDT% External Quality Assurance Scheme ERNDIM (quantitative /qualitative Scheme)

4 Pag 4 di 27 B. Organigramma e Responsabilità La sottostante Tabella 2 elenca dotazione di organico, qualifiche e funzioni del personale del Laboratorio: Qualifica Funzione n. 1 Dirigente Medico 2 livello Direttore del Laboratorio n. 3 Dirigente 1 livello Laureato di Settore n.10 Tecnici di Laboratorio Tecnico di Laboratorio n. 1 unità di personale infermieristico Ambulatorio Test del Sudore n. 3 Coadiutore Ammnistrativo Segreteria n. 1 Ausiliario Amministrativo Segreteria Tabella 2 C. Relazioni con l Utente Informazioni generali Prenotazione Test del Sudore Il Test del sudore (test biochimico per diagnosi di Fibrosi Cistica) viene effettuato solo su appuntamento il lunedì, martedì e giovedì negli orari Prenotazione Per pazienti ricoverati telefonare al numero tel Segreteria di U.O. ; il paziente verrà inserito il prima possibile nella programmazione Per pazienti ambulatoriali telefonare al N Vverde Regione Lombardia tel Per neonati selezionati dal programma di screening telefonare al numero tel Segreteria di U.O. dal lunedì al venerdì nei seguenti orari: / E disponibile, su richiesta, il mediatore culturale. Informazioni specifiche Tipologia di esami, campioni accettati, stato della richiesta esami, materiali biologici Personale Laureato di Settore e Tecnico di Laboratorio (Scr tel / 5671; : tel / 5397 / 5138) Consulenza medica - Comunicazioni Il Medico responsabile garantisce la quotidiana disponibilità a fornire informazioni o chiarimenti attinenti gli esami effettuati o da effettuare. Al fine di evitare disguidi non si rilasciano informazioni relative ai risultati degli esami effettuati agli utenti non professionali; si prega di inoltrare le richieste, utilizzando telefax o posta elettronica.

5 Pag 5 di 27 D. Parametri Analitici I parametri determinati dall Area sono distinti per settore: 1. Settore Screening Neonatale (Scr) determinazione DBS a) Fenilalanina ematica (b-phe) per screening neonatale o monitoraggio terapeutico b) TSH ematico (b-tsh) c) Tripsina Immunoreattiva ematica (b-irt) d) 17-OH-α-Progesterone ematico (b-17ohp) e) Mutazioni FC (57 Mutazioni ) Laboratorio di Biologia Molecolare (Fond. Policlinico-Mangiagalli-Regina Elena, Milano) f) Attività Gal-1-PUT ematica (b-galt). Come test di conferma biochimica per l accertamento diagnostico di fibrosi cistica il settore SCR esegue: g) Test del Sudore (determinazione di [Cl - ] nel sudore raccolto con ionoforesi pilocarpinica) 2. Settore Biochimica delle Malattie Ereditarie (). a) Aminoacidi plasmatici (36 parametri) b) Aminoacidi urinari (36 parametri) c) Aminoacidi liquorali (36 parametri) d) Acido Orotico urinario (LC MSMS) e) Mucopolisaccaridi totali urinari f) Acidi Organici urinari (GC-MS) g) Omocisteina Totale Plasmatica (HPLC) h) Omocisteina Tot. Pl. (Test da carico con Metionina) i) Acidi Grassi Non Esterificati (NEFA) serici j) β-oh-butirrato serico k) Citrato urinario l) Ossalato urinario m) Solfiti urinari (Sulfitest; test qualitativo ) n) Test urinario alla DNPH (test qualitativo) o) Mono-Disaccaridi urinari (Cromatografia a strato sottile ;4 parametri) p) Clinitest urinario (test qualitativo) q) Galattosio urinario (determinazione quantitativa) r) Fruttosio urinario (determinazione quantitativa) s) Acido Vanilmandelico urinario (HPLC) t) Acido Omovanillico urinario (HPLC) u) Acido 5-idrossi-indolacetico urinario (HPLC) v) Acido Metilmalonico plasmatico e urinario (GC-MS, diluizione isotopica) w) Succinilacetone urinario (GC-MS, diluizione isotopica) x) Acido Mevalonico urinario (GC-MS) y) Acido Omogentisico urinario (GC-MS)

6 Pag 6 di 27 z) Elastasi Pancreatica 1 aa) Acido Delta-amino-levulinico (δ-ala) urinario bb) Dosaggio Transferirne desialate seriche, per diagnosi di deficit congenito della glicosilazione (HPLC) cc) Dosaggio acilcarnitine DBS E. Modalità Operative Le attuali modalità operative sono distinte per settore: 1. Settore Screening Neonatale (SCR) a) Richiesta Il cartoncino per screening neonatale costituisce il modulo di richiesta per la determinazione dei quattro parametri di screening (b-phe, b-tsh, b-irt, b-17ohp). Il cartoncino deve essere obbligatoriamente completamente compilato in tutti i campi fronte-retro e firmato dal responsabile del prelievo. La compilazione prevede informazioni relative al punto nascita ed anagrafiche relative al paziente, Si richiede inoltre la segnalazione di eventuale presenza di ittero, exsanguino trasfusione e terapia farmacologica. In caso di dissenso all esecuzione test genetico-molecolari occorre la firma di chi si assume la potestà parentale. La richiesta di determinazione di b-galt deve essere specificamente evidenziata, sottolineando la voce Galattosemia o apponendo sulla parte cartacea del cartoncino la scritta convenzionale GAL-1-PUT. In tal caso il cartoncino disidratato deve essere trasportato e conservato a temperatura refrigerata. Per tutti i soggetti in età non neonatale (non noti per analoghe indagini precedenti) deve essere specificata l indagine richiesta, mediante richiesta medica scritta motivata, da allegare al cartoncino debitamente compilato nella sua parte anagrafica. Il Test del sudore (test biochimico per diagnosi di Fibrosi Cistica) viene effettuato solo su appuntamento; è necessaria quindi la prenotazione (vedi parag. C). Per i pazienti ambulatoriali è inoltre obbligatoria la presentazione della richiesta SSN (impegnativa). b) Prelievo ed Accettazione dei Campioni. I campioni sono accettati dal lunedì al venerdì ore Le modalità di prelievo sono schematizzate in allegato n.1; sono idonei per l accettazione i cartoncini che presentino almeno quattro gocce di sangue omogeneamente distribuite su entrambi i lati della carta da filtro e di dimensioni pari all area delineata dalla fustellatura; tale quantità è la quantità minima indispensabile per l esecuzione dello screening neonatale; è tuttavia consigliabile l adsorbimento di sei gocce di sangue, al fine di consentire eventuali azioni di rideterminazione analitica. L esecuzione di un singolo test può essere effettuata in campione costituito da due sole gocce ematiche.

7 Pag 7 di Settore Biochimica Malattie Ereditarie. a) Richiesta Compilare in modo leggibile ed esauriente l apposito modulo ICP- SCRE-MS-013: Scheda A -Richiesta Esami. Un unico modulo di richiesta è valido per l esecuzione di tutti gli esami del pannello, che devono essere correttamente elencati. Il campione biologico deve essere inoltre accompagnato dalla Scheda Informativa ICP-SCRE-MS-014: Scheda B Informazioni cliniche, indispensabile per la valutazione finale dei risultati ottenuti, debitamente compilata (v. allegati) b) Identificazione ed Accettazione dei Campioni in Laboratorio. I campioni sono accettati dal lunedì al venerdì ore I campioni biologici devono essere correttamente etichettati e devono riportare denominazione dell U.O. o Ambulatorio di provenienza, dati anagrafici del paziente, data prelievo (ora del prelievo nel caso di prelievi multipli o seriati) ed esame richiesto. Si prega di scrivere in stampatello e con inchiostro indelebile. Per la raccolta urinaria temporizzata (24 ore) è sufficiente inviare al laboratorio un aliquota del totale, dopo aver misurata la diuresi e riportato il dato sull etichetta e sul modulo di richiesta. Si accettano esclusivamente campioni biologici in provette e contenitori chiusi, non contaminati esternamente da tracce di materiale biologico. I campioni ematici e liquorali devono essere consegnati entro 30 dal momento temporale d esecuzione dl prelievo, al fine di consentire la tempestiva deproteinizzazione del plasma o del liquor; in caso di impossibilità ad effettuare una consegna nei tempi prescritti, si deve provvedere alla centrifugazione del campione ematico con separazione e trasferimento di almeno 1 ml di plasma in provetta separata, successivo congelamento (-20 C) e trasporto refrigerato (2-8 C). La determinazione dell Ossalato urinario viene eseguita in raccolta urinaria di 24 ore preventivamente acidificata con un volume predefinito di Acido Cloridrico 37% (disponibile in apposito contenitore presso il Laboratorio). Le indicazioni per una corretta raccolta sono riportate sul modulo ICP-SCRE-IS-017, allegato anche alla presente guida. L utenza esterna, dovrà inoltre compilare e firmare un modulo (ICP- SCRE-MS-018) per conferma di ricevimento del contenitore con acido cloridrico; tale modulo verrà conservato per 1 anno presso l ambulatorio La determinazione degli acidi Vanilmandelico, Omovanillico e 5-idrossi-indolacetico urinari viene eseguita in raccolta urinaria di 24 ore preventivamente acidificata con un volume predefinito di Acido Cloridrico 18% (disponibile in apposito contenitore presso il Laboratorio). Le indicazioni per una corretta raccolta sono riportate nel modulo ICP-SCRE-MS-019, allegato anche alla presente guida. L utenza esterna, dovrà inoltre compilare e firmare un modulo (ICP-SCRE-MS-018) per conferma di ricevimento del contenitore con acido cloridrico; tale modulo verrà conservato per 1 anno presso l ambulatorio. Il test qualitativo DNPH (dinitrofenilidrazina) e quello per la ricerca dei Solfiti urinari (Sulfitest) devono essere eseguiti in campione estemporaneo d appena raccolte.

8 Pag 8 di 27 Per Elastasi 1Pancreatica si consiglia di contattare preliminarmente il Laboratorio per la fornitura del dispositivo necessario per la raccolta del campione fecale. Le indicazioni per la corretta esecuzione sono riportate nel modulo ICP-MS-SCRE-018, allegato anche alla presente guida (All. 4/A-B). Campioni clinicamente urgenti ( Urgenza metabolica ): campioni biologici di soggetti che presentino condizioni biochimiche di iperammonemia, acidosi o alcalosi metabolica, iperlattacidemia, ipoglicemia persistente, chetonuria in età neonatale; condizione cliniche di obnubilamento del sensorio, altri segni neurologici clinicamente importanti Sono considerati convenzionalmente prioritari per l esecuzione analitica: tutti i campioni provenienti dalle U.O. di Rianimazione e Terapia Intensiva Neonatale e quelli relativi a pazienti affetti da errori congeniti del metabolismo. Questa tipologia di campioni viene accettata per tutto l arco di servizio (lunedì-venerdì ) Il carattere d urgenza deve essere segnalato sulla Scheda Informativa ed se possibile comunicato telefonicamente al Personale Laureato di settore c) Refertazione degli Esami: tempo di attesa (T.A.T.) e modalità di refertazione. La programmazione del processo analitico per ogni singolo parametro avviene in funzione delle priorità predefinite e della data d accettazione registrata; per i pazienti ambulatoriali, la programmazione avviene in funzione nel rispetto dei tempi di consegna previsti e concordati (vedi allegato). Tutti i referti per analisi degli aminoacidi ed acidi organici prevedono il commento finale scritto del Laureato di Laboratorio responsabile della singola analisi. Il T.A.T. complessivo è determinato dal numero totale di richieste che pervengono al laboratorio e dalla complessità d esecuzione. I campioni cosiddetti di urgenza metabolica sono processati nel più breve tempo possibile.

9 Pag 9 di 27 TEST di SCREENING NEONATALE b-fenilalanina (b-phe) Codice SSN/ICP: / 934 Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170) Modalità di prelievo: vedi allegato n.1 Colorimetrico Enzimatico mg/dl WB Valore di Cut-Off: < 2.0 (età 3 5 gg.) Area di Consegna : SCR b-tireotropina (b-tsh) Codice SSN/ICP: / 940 Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170 ) Modalità di prelievo: vedi allegato n.1 Fluoroimmunometrico (TR-FIA) µu/ml WB Valore di Cut-Off: < 10 (età 3 5 gg.) Area di Consegna : SCR b-tripsina (b-irt) Codice SSN/ICP: /938 Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170) Modalità di prelievo: vedi allegato n.1 Fluoroimmunometrico (TR-FIA) Unità di Misura : ng/ml WB Valore di Cut-Off: < 65 (età 3 5 gg.) Area di Consegna : SCR b-17-oh-α-progesterone (b-17ohp) Codice SSN/ICP: / - Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170 ) Modalità di prelievo: vedi allegato n.1 Fluoroimmunometrico (TR-FIA) nm/l WB Valore di Cut-Off: Valori di Cut-off per peso neonatale (vedi Tabella all. 6/A) Area di Consegna : SCR

10 Pag 10 di 27 b-galattosio 1 FOSFATO URIDIL-TRANSFERASI Codice SSN/ICP: / 928 Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170) Test enzimatico U/grammo Hb Riferimento normale > 2.3 Area di Consegna :

11 Pag 11 di 27 TEST PER L'ACCERTAMENTO DIAGNOSTICO DEGLI ERRORI CONGENITI DEL METABOLISMO ED IL MONITORAGGIO BIOCHIMICO DELLO STATO NUTRIZIONALE. p-aminoacidi PLASMATICI - Profilo multiparametrico Codice SSN/ICP: / 922 WB in provetta con litio eparina 1.5 ml WB; 0.8 ml plasma eparinato Modalita' di prelievo: prelievo venoso, dopo digiuno standard. Nota: in caso di consegna differita, centrifugare il campione ematico con separazione e trasferimento di 1 ml (quantità minima) di plasma in altra provetta, successivo congelamento (-20 C) e trasporto refrigerato (2-8 C). IEC µmol/l Area di Consegna : csf-aminoacidi LIQUORALI - Profilo multiparametrico Codice SSN/ICP: / 922 Liquido cefalorachidiano (CSF) in provetta con litio eparina 0.5 ml Modalita' di prelievo: rachicentesi estemporanea Nota:in caso di consegna differita, congelare il campione liquorale (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). IEC µmol/l Area di Consegna : p-omocisteina TOTALE Codice SSN/ICP: / 3452 WB in provetta con EDTA 2.0 cc WB; 1.0 ml plasma EDTA Modalità di prelievo: venoso,dopo digiuno standard Porre immediatamente in contenitore con acqua e ghiaccio e consegnare al Laboratorio entro 30. Nota:in caso di consegna differita, centrifugare il campione ematico con separazione e trasferimento di 1 ml (quantità minima) di plasma in altra provetta, successivo congelamento (-20 C) e trasporto refrigerato (2-8 C). HPLC Misura: µmoli/litro

12 Pag 12 di 27 Modalità di prelievo: p-omocisteina TOTALE (Test da carico con Metionina) WB in provetta con EDTA 2.0 cc WB; 1.0 ml plasma EDTA venoso, basale e dopo 4 ore dal carico con Metionina Porre immediatamente in contenitore con acqua e ghiaccio e consegnare al Laboratorio entro 30. Nota:in caso di consegna differita, centrifugare il campione ematico con separazione e trasferimento di 1 ml (quantità minima) di plasma in altra provetta, successivo congelamento (-20 C) e trasporto refrigerato (2-8 C). HPLC µmoli/litro s-acidi GRASSI NON ESTERIFICATI (s-nefa) Codice SSN/ICP: - / 909 siero (WB senza anticoagulante) 1.0 cc Modalita'di prelievo: venoso, dopo digiuno standard; dopo carico specifico enzimatico colorimetrico Nota:in caso di consegna differita, congelare il campione (- 20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). meq/l s- β - IDROSSI BUTIRRATO Codice SSN/ICP: - / 914 siero (WB senza anticoagulante) 2.5 ml WB; 1.0 ml siero Modalita'di prelievo: venoso, dopo digiuno standard; pre-post prandiale; dopo carico specifico (previo contatto con il laboratorio) Nota: in caso di consegna differita, centrifugare il campione ematico con separazione e trasferimento di 1 ml (quantità minima) di siero in altra provetta, successivo congelamento (-20 C) e trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS mg/dl

13 Pag 13 di 27 s-transferrine DESIALATE Codice SSN/ICP: / 4254 siero (WB senza anticoagulante) 1.0 cc Modalita'di prelievo: venoso, dopo digiuno standard HPLC % Transferrina totale ACIDO METILMALONICO dosaggio singolo (s-mma) Codice SSN/ICP: - / 4072 plasma 1.0 ml Modalita' di raccolta: prelievo venoso, dopo digiuno standard Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS diluizione isotopica Misura: mm/m creatinina ur.

14 Pag 14 di 27 u-aminoacidi Urinari - Profilo multiparametrico Codice SSN/ICP: / ml Modalita' di prelievo: diuresi 24 h Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). IEC µmol/24 h/ mq s.c. Area di Consegna : u-acidi ORGANICI - Profilo multiparametrico Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS mmol/mol Creatinina ur. u-acido OROTICO URINARIO Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). LC MSMS mmol/mol Creatinina ur. u-citrato URINARIO Codice SSN/ICP: / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). enzimatico mg/g creat.ur.

15 Pag 15 di 27 u-ossalato URINARIO Codice SSN/ICP: / ml Modalita'di raccolta: raccolta 24 ore, previa acidificazione con HCI 37% (fornito dal Laboratorio) colorimetrico mg/24 ore u-mono-disaccaridi URINARI (Zuccheri urinari) Codice SSN/ICP: - / mi Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); refrigerato (2-8 C). cromatografia su strato sottile (TLC) valutazione qualitativa u-galattosio URINARIO Codice SSN/ICP: / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); refrigerato (2-8 C). enzimatico mg/dl trasporto trasporto u-fruttosio URINARIO Codice SSN/ICP: / ml Modalita 'di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). enzimatico g/l

16 Pag 16 di 27 u-mucopolisaccaridi URINARI (u-mps) Codice SSN/ICP: / ml Modalita' di raccolta: diuresi 24 ore Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). colorimetrico mg/24 ore Modalita' di raccolta: Msura: u-solfiti (ioni solfito) URINARI 5 ml campione estemporaneo (invio immediato, previo contatto con il Laboratorio) striscia reattiva valutazione qualitativa u-sostanze RIDUCENTI (Clinitest Urinario) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). compresse reattive valutazione qualitativa u-test ALLA DINITROFENILIDRAZINA (DNPH) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo colorimetrico valutazione qualitativa

17 Pag 17 di 27 u-acido VANILMANDELICO URINARIO (u-vma) Codice SSN/ICP: / ml Modalita'di raccolta: raccolta 24 ore, previa acidificazione con HCI 18% (fornito dal laboratorio) HPLC mg/24 ore u-acido OMOVANILLICO URINARIO (u-hva) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita'di raccolta: raccolta 24 ore, previa acidificazione con HCI 18% (fornito dal laboratorio) HPLC mg/24 ore u-acido 5-IDROSSI-INDOLACETICO URINARIO (u- 5HIAA) Codice SSN/ICP: / ml Modalita'di raccolta: raccolta 24 ore, previa acidificazione con HCI 18% (fornito dal laboratorio) HPLC mg/24 ore ACIDO METILMALONICO dosaggio singolo (u-mma) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS diluizione isotopica Misura: mm/m creatinina ur.

18 Pag 18 di 27 SUCCINILACETONE dosaggio singolo (u-ssa) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS diluizione isotopica Misura: mm/m creatinina ur. ACIDO OMOGENTISICO - dosaggio singolo (u-oma) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo (conservazione al buio) Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS mm/m creatinina ur. ACIDO MEVALONICO - dosaggio singolo (u-mev) Codice SSN/ICP: - / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). GC-MS mm/m creatinina ur. u-acido DELTA-AMINO-LEVULINICO Codice SSN/ICP: / ml Modalita' di raccolta: campione estemporaneo Nota: in caso di consegna differita, congelare il campione urinario (-20 C); trasporto refrigerato (2-8 C). colorimetrico mgll

19 Pag 19 di 27 DETERMINAZIONI SPECIALI TEST DEL SUDORE Codice SSN/ICP: / 451 sudore 75 mg Modalita' di raccolta: sudore, raccolto dopo ionoforesi pilocarpinica ioni Cloro: titolazione meq/l Area di esecuzione: SCR ELASTASI 1 Pancreatica Codice SSN/ICP: D / 0015 feci fornita dal laboratorio o da punto prelievi secondo modalità allegate Modalita' di raccolta: campione estemporaneo (vedi allegati n. 4A e 4B). Immunoenzimatico µg/gr Area di Consegna : b-acilcarnitine Dried Blood Spot - Guthrie Card (WB adsorbito su cartoncino LTA SN00170) LC MSMS µm/l

20 Pag 20 di 27 A.O.Istituti Clinici di Perfezionamento Allegato n 1 MODALITA PER IL CORRETTO PRELIEVO DI SANGUE DA NEONATI (per esecuzione test di screening neonatale) 1 Si consiglia l uso di guanti durante la procedura. E importante che la superficie della carta da filtro non venga a contatto le mani (anche se protette da guanti), con omogeneizzati, soluzioni antisettiche, lozioni ed altri materiali durante le fasi di prelievo, in quanto tali materiali rischiano di venire assorbiti all interno dell area circolare e di compromettere il campione e la diagnosi. 2 Riempire i moduli forniti con il kit per il prelievo dei campioni con una normale penna a sfera. Non toccare l area all interno del cerchio della carta da filtro, per evitare il rischio di contaminazione. 3 Per individuare il punto da incidere, fare riferimento alla figura soprastante. Posizionare l arto del neonato in modo da aumentare la pressione venosa. Il flusso sanguigno deve essere incrementato riscaldando l area interessata. Coprire l area per 3 minuti con un asciugamano inumidito e caldo ad una temperatura che non superi i 42 C. 4 Disinfettare il sito con alcool al 70%. Asciugare con garza sterile. Servendosi di una lancetta con una punta < 2,45 mm., praticare un incisione sul tallone del neonato con un movimento rapido e preciso. Aciugare la prima goccia di sangue utilizzando garza sterile. CAMPIONE INSUFFICIENTE INADEGUATO CAMPIONE CORRETTO 5 Far assorbire delicatamente sulla carta filtro una grossa goccia di sangue. In un applicazione unica, il cerchio stampato sulla carta filtro deve risultare completamente imbevuto di sangue. Il sangue va applicato ad un solo lato della carta filtro. 6 Ripetere il procedimento per tutti cerchi necessari al test (almeno 4). Non sovrapporre strati successivi di sangue e non applicare sangue sulla carta filtro più di una volta per il medesimo campione. Evitare di toccare o sfregare i campioni di sangue.

21 Pag 21 di 27 7 Fare asciugare i campioni all aria in posizione orizzontale e preferibilmente elevata per almeno 3 ore. I campioni non devono venire a contatto con superfici di alcun tipo, né essere esposti a calore diretto o alla luce del sole. Non conservare in frigorifero. 8 Una volta asciutti porre i campioni in buste di carta, ruotando i fogli di carta filtro in modo che le zone imbevute si alternino (testa-coda).

22 Pag 22 di 27 Allegato n 2 Modalità per una corretta esecuzione di Raccolta Urinaria Temporizzata (24 ore) Indicazioni generali La raccolta urinaria di 24 ore è richiesta per alcune specifiche determinazioni di laboratorio, in cui è fondamentale correlare la concentrazione di analita urinario all escrezione quantitativa totale - nell arco di 24 ore di. Modalità Orario d inizio: è determinato dall ora mattutina di svuotamento della vescica; tali non vanno incluse nella raccolta. Orario consigliato d inizio:dalle ore 6.00 alle ore 7.00 a.m. Raccolta: dall orario d inizio devono essere raccolte in apposito contenitore, riportante l identificazione del paziente, tutte le emesse dal paziente nell arco di 24 ore. Il contenitore deve essere posto in luogo fresco ( è consigliabile, ove possibile, la refrigerazione a 4-8 C), al riparo da fonti di calore e dall esposizione diretta alla luce. Il paziente (e/o il pesonale addetto) deve essere attento a non effettuare una raccolta parziale, con perdita, nell arco temporale di raccolta, di alcune minzioni. La raccolta è conclusa con l aggiunta dell ultima minzione del paziente, ottenuta allo scadere della 24^ ora. Consegnare al Laboratorio l intera raccolta o, in accordo con il Laboratorio, un volume di 50 ml d prelevate dal contenitore di raccolta dopo misurazione ( con metodologia adeguata: ad esempio mediante cilindro graduato) del volume totale d e miscelazione attenta delle raccolte. Se la consegna al Laboratorio non è tempestiva la raccolta (o il campione derivato) deve essere congelata (- 20 C). Nota: la determinazione dell ossalato urinario e degli acidi vanilmandelico, omovanillico e 5-idrossiindolacetico è effettuata in delle 24 ore acidificate. La raccolta è adeguata se l acidificazione del materiale biologico è eseguita mediante preventiva immisione del volume di acido (consegnato dal laboratorio) nel contenitore prima dell inizio della raccolta. Attenzione alla manipolazione dell acido!. Allegato n 5/A

23 Pag 23 di 27 AMINOACIDI PLASMATICI e URINARI : PROFILO MULTIPARAMETRICO Determinazione quantitativa in cromatografia liquida (IEC) VALORI DI RIFERIMENTO Fascia d Età: 1-6 mesi Aminoacido (Sigla) Valori di Riferimento per Età (1-6 mesi) Plasma (µm/l) Urine (µm/24h/mq) Fosfoserina (PSER) - - Taurina (TAU) Fosfoetanolamina (PEA) - - Ac. Aspartico (ASP) Treonina (THR) Serina (SER) Asparagina (ASN) Ac. Glutamico (GLU) Glutamina (GLN) Sarcosina (SAR) - - Ac. α-amino-adipico - - Idrossiprolina (HYP) Prolina (PRO) Glicina (GLY) Alanina (ALA) Citrullina (CIT) Ac. α-amino-n-butirrico Valina (VAL) Cistina (CYS2) Metionina (MET) Cistationina(HCY-ALA) Isoleucina (ILEU) Leucina (LEU) Tiroxina (TYR) β-alanina (βala) Fenilalanina (PHE) Ac.βAminoisobutirrico(BAIBA - - Ac. γ-aminobutirrico (GABA) - - Ornitina (ORN) Lisina (LYS) Istidina (HIS) Metilistidina(HISτMe) Metilistidina(HISπMe) Carnosina (CAR) Arginino (ARG) Omocistina(HCY2) 0 0

24 Pag 24 di 27 Allegato n 5/B AMINOACIDI PLASMATICI e URINARI : PROFILO MULTIPARAMETRICO Determinazione quantitativa in cromatografia liquida (IEC) VALORI DI RIFERIMENTO Fascia d Età: 7 mesi - 12 anni Aminoacido (Sigla) Valori di Riferimento per Età (7 mesi - 12 anni) Plasma (µm/l) Urine (µm/24h/mq s.c.) Fosfoserina (PSER) - - Taurina (TAU) Fosfoetanolamina (PEA) Ac. Aspartico (ASP) Treonina (THR) Serina (SER) Asparagina (ASN) Ac. Glutamico (GLU) Glutamina (GLN) Sarcosina (SAR) - - Ac. α-amino-adipico - - Idrossiprolina (HYP) Prolina (PRO) Glicina (GLY) Alanina (ALA) Citrullina (CIT) Ac. α-amino-n-butirrico Valina (VAL) Cistina (CYS2) Metionina (MET) Cistationina(HCY-ALA) - - Isoleucina (ILEU) Leucina (LEU) Tiroxina (TYR) β-alanina (βala) Fenilalanina (PHE) Ac.βAminoisobutirrico(BAIBA - - Ac. γ-aminobutirrico (GABA) - Tracce Ornitina (ORN) Lisina (LYS) Istidina (HIS) Metilistidina(HISτMe) Metilistidina(HISπMe) Carnosina (CAR) - Tracce Arginino (ARG) Omocistina(HCY2) 0 0

25 Pag 25 di 27 Allegato n 5/C AMINOACIDI PLASMATICI e URINARI : PROFILO MULTIPARAMETRICO Determinazione quantitativa in cromatografia liquida (IEC) VALORI DI RIFERIMENTO Fascia d Età: Adulto Aminoacido (Sigla) Valori di Riferimento per Età (Adulto) Plasma (µm/l) Urine (µm/24h/mq. s.c.) Fosfoserina (PSER) - - Taurina (TAU) Fosfoetanolamina (PEA) Ac. Aspartico (ASP) Treonina (THR) Serina (SER) Asparagina (ASN) Ac. Glutamico (GLU) Glutamina (GLN) Sarcosina (SAR) - - Ac. α-amino-adipico - - Idrossiprolina (HYP) Prolina (PRO) Glicina (GLY) Alanina (ALA) Citrullina (CIT) Ac. α-amino-n-butirrico Valina (VAL) Cistina (CYS2) Metionina (MET) Cistationina(HCY-ALA) Isoleucina (ILEU) Leucina (LEU) Tiroxina (TYR) β-alanina (βala) Fenilalanina (PHE) Ac.βAminoisobutirrico(BAIBA - - Ac. γ-aminobutirrico (GABA) - Tracce Ornitina (ORN) Tracce Lisina (LYS) Istidina (HIS) Metilistidina(HISτMe) Metilistidina(HISπMe) Carnosina (CAR) - Tracce Arginino (ARG) Omocistina(HCY2) 0 0

26 Pag 26 di 27 Allegato n 5/D AMINOACIDI LIQUORALI : PROFILO MULTIPARAMETRICO Determinazione quantitativa in cromatografia liquida (IEC) VALORI DI RIFERIMENTO Aminoacido (Sigla) Valori di Riferimento (µmol/l) Fosfoserina (PSER) - Taurina (TAU) 4-13 Fosfoetanolamina (PEA) - Ac. Aspartico (ASP) 2-5 Treonina (THR) Serina (SER) Asparagina (ASN) Tracce - 18 Ac. Glutamico (GLU) - Glutamina (GLN) Sarcosina (SAR) - Ac. α-amino-adipico - Idrossiprolina (HYP) - Prolina (PRO) - Glicina (GLY) Tracce - 15 Alanina (ALA) Citrullina (CIT) - Ac. α-amino-n-butirrico 2-8 Valina (VAL) 5-38 Cistina (CYS2) - Metionina (MET) Tracce - 9 Cistationina(HCY-ALA) - Isoleucina (ILEU) 3-14 Leucina (LEU) 4-27 Tirosina (TYR) 2-14 β-alanina (βala) - Fenilalanina (PHE) 2-19 Ac.βAminoisobutirrico(BAIBA - Ac. γ-aminobutirrico (GABA) - Ornitina (ORN) 2-9 Lisina (LYS) Istidina (HIS) Metilistidina(HISτMe) - 3 Metilistidina(HISπMe) - Carnosina (CAR) - Arginina (ARG) Omocistina(HCY2) 0

27 Pag 27 di 27 All. n 5/E ACIDI ORGANICI URINARI PROFILO MULTIPARAMETRICO Analisi in GC-MS ACIDI ORGANICI URINARI Valori di Riferimento mm/mcr.ur Lattico OH-isobutirrico - Glicolico Ossalico - Piruvico OH isobutirrico - 3-OH butirrico metil-3-OH butirrico - 3-OH isovalerico - Metilmalonico <2 Etilmalonico 0-7 Fosforico - Succinico 6-30 Metilsuccinico - Fumarico <2 Glutarico <2 3-metilglutarico - 3-metilglutaconico - Adipico 0-12 Piroglutamminco - 2-OH fenilacetico - 2-OH glutarico 5-50 Pimelico - 3-OH fenilacetico - 3-OH-3-metilglutarico - 2-chetoglutarico OH fenilacetico 6-28 Suberico <2 Aconitico - Vanillico - Omovanillico - Citrico - Ippurico - vanilmandelico - Sebacico <2 4-OH fenillattico <2 4-OHfenilpiruvico <2 Metaboliti del FENOBARBITAL - Metaboliti del VALPROATO - Succinilacetone Assente Acetacetato Assente