FREQ FEMMINE FREQ NCBI
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- Marta Patti
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2 dell asse HPA è il neuropetide Y, un peptide a funzione ansiolitica espresso in numerose regioni cerebrali quali l ipotalamo, l amigdala e l ippocampo dove contribuisce a modulare in maniera tessuto-specifica diversi processi quali l eccitabilità corticale, il ritmo circadiano, l elaborazione del dolore, la fame, la funzione cardiovascolare nonché la neurogenesi. Tuttavia in campo psichiatrico questo peptide è studiato soprattutto per il suo ruolo nella regolazione delle risposte comportamentali nelle malattie psichiatriche e nella risposta allo stress: è dimostrato infatti che la sua espressione a livello dell amigdala è down-regolata durante uno stress acuto mentre è up-regolata dopo uno stress-ripetuto. In particolare è stata recentemente dimostrata un associazione tra la variante 399T>C (rs16147) a carico del promotore del gene NPY che ne modula l espressione a livello dell ippocampo e la risposta cortisolo-mediata allo stress (Witt et all., 2011) proponendo quindi un ruolo per questa variante nel determinare la suscettibilità individuale alle malattie correlate allo stress. In questo lavoro a 75 pazienti afferenti agli ambulatori del Centro Medico Stella Maris di Roma, in cura per disturbi legati allo stress, è stato somministrato per la valutazione clinica il questionario DS-14: ciò ha permesso di isolare un gruppo di 40 pazienti per i quali AN e SI sono risultati significativi tanto da indicare la presenza di una personalità Distressed. Tali pazienti, previo consenso informato, sono stati genotipizzati per i polimorfismi BclI e N363S a carico del GR, e NPY-399T>C mediante tecnica RFLP o sequenziamento automatico. Scopo del presente lavoro è stato valutare innanzitutto se esistesse una qualche associazione tra le varianti geniche del GR BcI e N263S e la presenza o meno della personalità D che possa supportare l'utilizzo del test DS-14 come predittore di ipercortisolismo secondario nei disturbi GAS-derivati. Si è valutata inoltre l'associazione tra personalità D e il polimorfismo a carico del promotore del gene NPY per valutare un'eventuale modulazione da parte di questo neuropeptide della secrezione di cortisolo in risposta allo stress nei pazienti classificati come Distressed. VALUTAZIONE PRELIMINARE COMPARATIVA Nei pazienti in esame è stata analizzata l incidenza dei polimorfismi GR BclI e N363S e NPY -399T>C. Per tutti e tre i polimorfismi è stato verificato l'equilibrio di Hardy-Weinberg. Le frequenze alleliche, anche se ricavate da un campione raccolto in ordine di accesso all attività ambulatoriale, sono risultate tutte in linea con quelle fornite dalla banca dati nella Popolazione Caucasica ( tranne per il polimorfismo GR BclI per il quale l'allele predominante è risultato essere il G invece del C (Tab.1). Non sono state invece riscontrate significative differenze nella frequenza dei polimorfismi tra i due sessi. SNP ALLELE FREQ TOT FREQ MASCHI FREQ FEMMINE FREQ NCBI Test X 2 p-value NPY T 0,54 0,6 0,52 0,56 n.s. C 0,46 0,4 0,48 0,44 GR BclI G 0,74 0,74 0,75 0,38 <.0001 C 0,26 0,26 0,25 0,62 GR N363S A ,94 G ,06 Tabella1. Frequenze alleliche dei polimorfismi GR BclI e N363S ed NPY -399T>C nel campione di 75 pazienti oggetto dello studio. ATTRIBUZIONE DELLA PERSONALITA' D (Distressed) Ai pazienti in esame è stato somministrato il questionario DS-14 che consiste di 14 items, 7 che verificano la presenza della componente AN (affettività negativa) e 7 che verificano la presenza della componente di
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6 Sebbene le ridotte dimensioni del campione non ci permettano di stabilire con un'adeguata significatività statistica alcuna associazione di questi polimorfismi nei pazienti con personalità D i nostri dati ci permettono di delineare un quadro di risposta allo stress in linea con quanto la letteratura ha finora proposto per questi due polimorfismi singolarmente, con una prevalenza di profilo D nei pazienti portatori dell'allele C del polimorfismo GR BclI e dell'allele T del polimorfismo NPY-399T>C. In condizioni di stress il profilo ipercortisolico dei pazienti classificati come Distressed potrebbe essere quindi favorito dall'assenza degli alleli a funzione protettiva di questi due polimorfismi: da una parte l'allele G del GR BclI, associato ad una ipersensibilità al cortisolo, che porta alla terminazione veloce della risposta allo stress; dall'altra la variante C del polimorfismo -399T>C NPY che ne aumenta l'espressione soprattutto a livello dell'amigdala e, inibendo i neuroni GABA-ergici come pure antagonizzando l'ormone rilasciante la corticotropina (CRH), porta ad una ulteriore diminuzione del rilascio di cortisolo. Le risorse date dal backgroud genetico di questi pazienti sono quindi meno efficaci nel riportare a livello basale il cortisolo dopo un'iperattivazione del sistema HPA, determinando così disturbi psichiatrici stress-correlati ma anche sintomatologie quali attivazione del sistema immunitario e infiammazione, ipersecrezione di CRH e attivazione adrenergica. RECLUTAMENTO E CLASSIFICAZIONE E stato analizzato un campione ad randum di 75 pazienti, di cui 31 maschi e 44 femmine, tutti afferenti all ambulatorio psichiatrico Stella Maris di Roma per disturbi legati allo stress. A tali pazienti è stato somministrato il questionario DS-14formato da 14 item con risposta su scalaa Likert a 5 punti (0-4) che indaga due fattori costituenti la personalità D ovvero Affettività Negativa (NA) e Inibizione Sociale (SI), formati ciascuno da 7 item. Sono stati considerati significativi per l'attribuzione della personalità D sia punteggi sopra il cut-off pari a 9 per NA e SI, sia superiori alla media del campione analizzato (NA=13,1 D.S.=6,85; SI=11,45 D.S.=4,32), come alternativamente proposto dalla letteratura. Ciascun paziente è stato correttamente informato dello scopo della ricerca ed ha liberamente deciso di parteciparvi firmando un consenso informato. Il DNA totale è stato estratto da tampone buccale mediante QIAamp DNA mini kit su sistema QIAsymphony. GENOTIPIZZAZIONE I polimorfismi scelti sono stati analizzati mediante metodica PCR (GO Taq Hot Start Promega) con primer progettati mediante l utilizzo di Vector Design su termociclatore Techne T-512. Il polimorfismo GR BclI è stato analizzato mediante analisi RFLP con enzima BclI (Fermentas), mentre gli altri due polimorfismi, G N363S e NPY -399T>C sono stati analizzati mediante sequenziamento automaticosu sistema ABI PRISM 310 Genetic Analyzer. ANALISI STATISTICA DEI DATI Le deviazioni dal HWE sono state analizzate comparando le frequenze genotipiche osservate e quelle attese attraverso il test del χ2 con df pari a due e permutazione del p-value. Il cut off scelto, dati i limiti della campionatura, è stato di 0,02. L'associazione tra frequenze alleliche osservate e la distribuzione dei pazienti nella classe D (Distressed) o NON D è stata valutata mediante tabella di contingenza e test del χ2. Reference: Van Eck M, Berkhof H, Nicolson N, Sulon J. The effects of perceived stress, traits, mood states, and stressful daily events on salivary cortisol. Psychosom Med 1996; 58: Dennolet J, Vaes J, Brutsaert DL. Inadequate response to treatment in coronary heart disease: adverse effects of Type D personality and younger age on 5-year prognosis and quality of life. Circulation 2000;102: Habra ME, Linden W, Anderson JC, WeinbergJ. Type D personality is related to cardiovascular and neuroendocrine reactivity to acute stress. J Psychosom Res 2003;55: Kumsta R.; Kooper J.W.; Van Rossum E.F.C; Hellhamme D.H.; Wust S.; Sex specific associations between common glucocorticoid receptor gene variants and Hypothalamus-Pituitary-Adrenal Axis Responses to Psychosocial Stress. BIOL PSYCHIATRY 2007;62: Stephanie H. Witt et all. An interaction between a neuropeptide Y gene polymorphism and early adversity modulates endocrine stress responses. Psychoneuroendocrinology (2011) L.Sher. Type D personality: the heart, stress, and cortisol. Q J Med; 98: (2005) Derijk, R.H. Single nucleotide polymorphism relatd to HPA axis reactivity. Neuroimmunomodulation;; 16 (5), (2009) Wust, S. Kumsta,.,Treutlein, J., Frank, J., Entringer, S., Schulze, T.G., Rietschel, M. Sex-specific association between the 5- HTT gene-linked polymorphic region and basal cortisol secretion. Psychoneuroendocrinology 34 (7), (2009)
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