man uale utente Italiano Hoefer PR150 Incubazione collettore mu PR150-IM/Italian/Rev.E0/08-12

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1 man uale utente Italiano Hoefer PR150 Incubazione collettore mu PR150-IM/Italian/Rev.E0/08-12

2 Indice Introduzione...1 Istruzioni per l uso...3 Cura e manutenzione...6 Informazioni per l ordine...6 pi

3 Introduzione Trasferimento delle proteine o acidi nucleici, frazionato mediante gel elettroforesi, ad una superficie della membrana immobilizzazione aumenta la sensibilità di una vasta gamma di metodi di rilevazione, riduce i tempi di analisi e rende possibile sequenziale sondaggio. In particolare, si è reso possibile utilizzo di procedure immunologiche che non sono pratico per realizzare in un gel. Per materiale test su un foglio di membrana con sonde differenti contemporaneamente richiede comunemente primo taglio della membrana in un numero di strisce parallele. Questa procedura distrugge tuttavia la corrispondenza tra corsie o posizioni diverse su un gel. Fig 1. Componenti del PR150. Pressione guarnizione campione di guarnizione guarnizione a labbro posti a sedere guarnizione a labbro posti a sedere tenuta cresta campione di camera Esempio di targa Spingidisco p1

4 Il PR150 Hoefer è stato progettato specificamente per preservare questa corrispondenza, riducendo al minimo il volume di miscele di reazione necessari per saggi individuali. Due lastre acriliche robuste, ogni 1 cm di spessore e cm quadrati, bloccare uno 8,8 8,8 cm membrana di trasferimento tra due guarnizioni in silicone. Dieci trogoli parallele tagliate in un lato della piastra superiore diventa camere di incubazione quando l unità è montata. Le guarnizioni assicurare che i campioni liquidi e le sonde non perdano nelle camere adiacenti. Tutte le fasi di incubazione può essere effettuata sulla membrana intatto senza l un unità. Poiché la membrana è saldamente tra le due piastre, non può galleggiare sulla superficie della miscela di reazione o bolle trappola sotto. Leggera oscillazione dell unità espone completamente la superficie della membrana di piccoli volumi di reagenti, impedendo così artefatti dovuti all esposizione incomplete o miscelazione. Dal momento che camere di reazione sono completamente chiusa, materiali pericolosi possono essere rinchiusi in modo sicuro. Il PR150 ha due applicazioni principali: 1. Fino a dieci o antisieri sonde possono essere testati contro un unico campione di proteine o acidi nucleici. Il campione viene caricato su un gel lastra in un unico, tutta larghezza bene. Quando serrate nei PR150, dieci differenti sonde o antisieri possono essere testati contro gli stessi materiali separati. 2. È opportuno per un uso efficiente di volumi preziosi o piccoli di sonde o antisieri che devono essere testati contro diversi campioni. p2

5 Istruzioni per l uso Le parti del PR150 sono mostrati in figura 1, (pagina 1). Il prodotto comprende due piastre lavorate in plastica e due guarnizioni in silicone, una fessura e un solido. L unità è assemblata e serrata con quattro viti di nylon. 1 Per testare un singolo campione con sonde multiple o antisieri, separare il campione su un formato preparativo mini (8,8 8,8 cm) gel. Questo può essere fatto sia con una larghezza piena pettine o semplicemente applicando il campione direttamente alla parte superiore di un cast gel senza pozzetti. 2 Se si sta analizzando campioni multipli su un minive Hoefer o Hoefer SE260 unità verticale, utilizzare le compatibili dieci pettine bene (si veda informazioni per l ordine) per formare i pozzetti del campione nel gel. La spaziatura dei denti di pettine questo corrisponde la spaziatura delle singole camere del PR Dopo l elettroforesi, trasferire la proteina o acido nucleico separato sul gel per uno 8,8 8,8 cm foglio di una membrana appropriato. L orientamento della membrana deve essere contrassegnato con una matita prima di iniziare il trasferimento. Il gel non deve essere pre-equilibrata prima del trasferimento in quanto tende a restringersi il gel. 4 Aprire il PR150. Posizionare sia la piastra di campioni e la piastra di tenuta con i loro lati rivolti verso l alto lavorati su una superficie piana. 5 Posizionare la guarnizione di tenuta scanalata sulle camere campione in modo che i bordi della guarnizione inseriscano nel labbro superficiale guarnizione, nella piastra. Gli slot guarnizione deve essere allineato con le camere di incubazione nella piastra campione. p3

6 Nota: Le dimensioni della membrana è importante. Si deve trovarsi completamente all interno della regione guarnizione del PR150 non deve estendersi oltre i bordi della guarnizione campione scanalato e deve coprire tutti gli slot oltre le creste di tenuta per garantire che non vi siano perdite quando la membrana è bloccato in posizione. Nota: Contrassegnare l orientamento della membrana trasferimento prima blotting tracciando i denti delle dieci pettine e con una matita vicino alla cima della membrana. La marcatura deve essere eseguita prima di bagnare la membrana. Posizionare il lato non marcata della membrana sulla superficie del gel. Allineare il smerlatura attentamente per abbinare la posizione dei pozzetti campione nel gel. Questo è fatto più facilmente tenendo la guarnizione scanalato liberamente da un bordo alla fine delle asole. Abbassare la guarnizione fino a quando il bordo cade in posizione sul bordo del piatto del campione. Gradualmente abbassare il resto della guarnizione in modo che le strisce di materiale di guarnizione aderiscono alle creste di tenuta tra le camere. 6 La membrana rimosso dal trasferimento gel deve essere posizionato con la superficie di contatto gel verso il basso contro la guarnizione di tenuta. La membrana dovrebbe rimanere umida durante la procedura. (Una membrana secco tenderà a stoppino la soluzione incubazione di camere teh.) La direzione di elettroforesi dovrebbe essere parallela alla direzione lungo degli slot. Tutti i bordi della membrana deve trovarsi all interno dei bordi della guarnizione di tenuta, ma devono anche coprire i bordi di tutti gli slot. 7 Se i campioni sono stati separati in singoli corsie, regolare l allineamento della membrana in modo che le corsie sono sopra slot liberi. La matita rintracciamento marcatura delle corsie deve essere sul lato superiore della membrana a questo punto. 8 Posizionare la guarnizione solido pressione sulla membrana di trasferimento. Assicurarsi che tutti i bordi siano allineati con la guarnizione scanalato e che sono entro il rientro fresato della piastra acrilico. Fig 2. L assemblaggio dei componenti del collettore PR150 incubazione. spingidisco pressione sulla guarnizione membrana campione di guarnizione campione di placca p4

7 9 Coprire la guarnizione di pressione con la piastra di pressione (Fig. 2). porte di accesso Fig 3. PR150 in carico/posizione di incubazione. Nota: Le piccole molecole gradualmente diffondere fuori dalle camere di incubazione attraverso la membrana. Questo effetto wicking di solito non è significativa nell arco di poche ore previste la membrana era bagnato per iniziare. Tuttavia, il PR150 non è raccomandato per procedure estendono su un periodo di giorni. Girare il complesso in modo le camere di incubazione sono al di sopra della membrana di trasferimento. Le porte di accesso alle camere sarà quindi in alto (Fig. 3).! Inserire le viti di nylon e serrarle un quarto di giro accogliente passato. Non stringere Ogni camera contiene fino a 2 ml. Con una adeguata miscelazione, il meno 0,5 ml o meno può essere usato in ogni fase di incubazione. Aggiungere i reagenti alle camere attraverso le porte di accesso. Se si desidera chiudere le camere, mettere un pezzo di nastro sulla parte superiore della piastra superiore. # Posizionare l intera unità su un bilanciere in modo che la miscela di reazione in ciascuna camera scorre avanti e indietro da un estremità della camera all altra. $ Dopo una incubazione particolare è stata completata, rimuovere il nastro dal fori e prelevare la soluzione da ciascuna camera con una pipetta Pasteur. Qualsiasi numero di reazioni sequenziali possono essere effettuati senza la un unità. % Quando tutte le fasi di reazione e di lavaggio sono stati completati, smontare l unità asciugare all aria e la membrana. Se una reazione immunologica accoppiato con una generazione enzimatica di un prodotto colorato è stato utilizzato, le bande di interesse dovrebbero essere già visibile. Se un saggio radioimmune è stato impiegato, la membrana a secco è ora pronto per autoradiografia. p5

8 Cura e manutenzione Dopo ogni uso, lavare il PR150, compresa la guarnizione del campione, con un detergente delicato. Risciacquare con acqua di rubinetto e poi con acqua distillata. Non usare acidi o basi forti o solventi organici di qualsiasi genere, con il PR150. Non risciacquare con l alcol, come vuole la moda di plastica. Informazioni per l ordine prodotto Hoefer PR150 Incubazione Collettore Viti di nylon (confezione da 4) Esempio di guarnizione Pressione guarnizione codice PR150 PR153 PR152 PR ben pettini Pettine, 0,75 mm spessore Pettine, 1,0 mm spessore Pettine, 1,5 mm spessore SE211A SE211A SE211A p6

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