Il criterio con cui è stato definito il numero dei punti di campionamento per ogni regione costiera, è il seguente:

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1 Riparte la Goletta Verde I tecnici di Legambiente durante la campagna eseguono il monitoraggio dello stato di qualità del mare e delle coste con l intento di mettere in risalto i punti critici. L obiettivo è quello di scovare le situazioni che mettono maggiormente a rischio il mare: tanto le foci dei fiumi quanto i tratti di mare interessati da fenomeni di inquinamento batteriologico di origine fecale per la presenza di scarichi abusivi o insufficiente sistema di depurazione individuando condutture derivanti da depuratori rotti, mal funzionati o di scarsa capacità o tubi sospetti. Sulla base di segnalazioni raccolte durante tutto l anno sia dai cittadini che dai circoli locali di Legambiente i tecnici individuano i punti per i campionamenti lungo le coste italiane, intervenendo con tempestività sulle situazioni a rischio di inquinamento delle acque, ampliando così il quadro delle analisi ed evidenziando le criticità. Il criterio con cui è stato definito il numero dei punti di campionamento per ogni regione costiera, è il seguente: - 1 punto ogni 15 km di costa, per le regioni che hanno meno di 500 km di costa; - 1 punto ogni 30 km di costa, per le regioni che hanno tra 500 e 1000 km di costa; - 1 / 63

2 1 punto ogni 60 km di costa, per le regioni che hanno più di 1000 km di costa. Nella tabella che segue viene riportato il dettaglio regionale del numero di punti che la squadra dei tecnici di Goletta Verde campionerà e sui quali effettuerà il monitoraggio scientifico.. PUNTI DI CAMPIONAMENTO GOLETTA 2015 Regione Km/Punti di camp. Km di costa Totale Punti 2 / 63

3 regione Friuli Venezia Giulia ,7 8 Veneto Emilia Romagna 15 3 / 63

4 Marche Abruzzo Molise 4 / 63

5 15 35,4 2 Puglia Basilicata / 63

6 Calabria Sicilia Campania / 63

7 31 Lazio ,5 24 Sardegna Liguria 15 7 / 63

8 Toscana TOTALE 7412, Il 24 marzo 2006 è entrata in vigore la Direttiva 2006/7/CE del Parlamento europeo e del Consiglio, del 15 febbraio 2006, relativa alla gestione della qualità delle acque di balneazione, che abroga la Direttiva 76/160/CEE. La nuova direttiva è stata recepita in Italia con 8 / 63

9 Decreto Legislativo del 30 maggio 2008 n L applicazione del D.lgs n. 116/2008 è stata subordinata all emanazione di apposito Decreto attuativo firmato il 30 marzo 2010 dal Ministero della Salute e dal Ministero dell Ambiente e della Tutela del Territorio e del Mare ed entrato in vigore a fine maggio CAMPIONAMENTO I prelievi sono eseguiti dalla squadra di tecnici che viaggia via terra. Vengono effettuati due tipi di analisi: chimico-fisiche direttamente in sito, con l ausilio di strumentazione da campo, e microbiologiche. Come da normativa il punto di monitoraggio è fissato dove si prevede il maggior afflusso di bagnanti o il rischio più elevato di inquinamento in base al profilo delle acque di balneazione. I campioni per le analisi microbiologiche sono prelevati in barattoli sterili immergendo completamente il barattolo nell acqua e conservati in frigorifero, protetti contro l esposizione alla luce durante tutte le fasi del trasporto fino al momento dell arrivo in laboratorio e dell analisi, che avviene lo stesso giorno del campionamento o comunque entro le 24 ore dal prelievo. Il campione viene identificato con un codice ed è associato alla rilevazione dei relativi parametri meteo-marini (come da verbale di campionamento).. PARAMETRI INDAGATI: 9 / 63

10 . MICROBIOLOGICI CHIMICO-FISICI - Enterococchi intestinali 10 / 63

11 (Metodo di riferimento dell analisi: ISO ) 11 / 63

12 ÂÂÂ - 12 / 63

13 Escherichia Coli 13 / 63

14 (Metodi di riferimento dell analisi: Metodo F APAT CNR-IRSA 7030) - 14 / 63

15 Temperatura dell acqua - 15 / 63

16 ph - 16 / 63

17 Ossigeno disciolto (in % di saturazione e in mg/l) - 17 / 63

18 Conducibilità ms/cm - 18 / 63

19 Salinità g/l 19 / 63

20 . 20 / 63

21 Enterococchi intestinali 21 / 63

22 Due specie sono comuni organismi commensali dell intestino umano: Enterococcus faecalis ed Enterococcus faecium 22 / 63

23 . Gli Enterococchi sono organismi anaerobi facoltativi (ovvero preferiscono consumare ossigeno, ma possono comunque sopravvivere anche in assenza di esso). Si trovano, tipicamente, nel tratto intestinale e nelle feci degli uomini e di altri animali ma possono colonizzare anche il tratto iniziale del sistema gastrointestinale. 23 / 63

24 Hanno una resistenza alla salinità superiore ad altri batteri, in particolari di E.coli, per questo motivo in acqua di mare resistono per periodo più lunghi (riduzione del 90% in un periodo fino a 24 / 63

25 2-3 giorni rispetto a meno di un giorno per E.coli ). 25 / 63

26 . 26 / 63

27 Escherichia coli 27 / 63

28 Sono batteri a forma di bastoncello, gram-negativi, aerobi ed anaerobi facoltativi, che crescono alla temperatura di 44 C e appartenenti alla famiglia delle Enterobacteriacee. Già da tempo 28 / 63

29 l Organizzazione Mondiale della Sanità considera questa specie come indicatore primario di inquinamento di origine fecale e quindi derivante anche da scarichi fognari non depurati. Tale scelta è motivata dalla maggiore stabilità della sua presenza nell ambiente acquatico rispetto ai coliformi, e dalla minore sensibilità del microrganismo alle procedure di disinfezione rispetto alla 29 / 63

30 maggior parte dei patogeni enterici. Inoltre va considerato che nell ambito del gruppo dei coliformi, Escherichia coli è ampiamente rappresentato ed è in esclusivo rapporto con il tratto gastrointestinale dell uomo e degli animali a sangue caldo. 30 / 63

31 Sono molto meno resistenti degli Enterococchi intestinali e il tempo di riduzione della popolazione presente in acque marine è risultato meno di un giorno. 31 / 63

32 Temperatura 32 / 63

33 La temperatura regola i processi chimici e biologici come pure il trasferimento di calore all interfaccia aria-acqua. 33 / 63

34 L'immissione in un corpo idrico di acque reflue provenienti di lavorazione di vario tipo può causare variazioni di temperatura, alterando i processi chimici e biologici e mettendo a rischio la 34 / 63

35 sopravvivenza degli organismi acquatici. 35 / 63

36 Salinità 36 / 63

37 La salinità è un indicatore ecologico importante poiché esso influenza l adeguatezza degli habitats in relazione alle capacità di osmoregolazione degli organismi. E anche indicatore della presenza di ingressi di acqua dolce, scende infatti in presenza di una foce, ma anche di uno scarico. Il valore medio nel bacino mediterraneo è di 35 g/l (35 ). 37 / 63

38 ph 38 / 63

39 Il ph in acqua di mare aperto è quasi costante (circa 8.1) mentre la variabilità in acque costiere è molto alta (6-9). Questa variabilità può influenzare, sia il rateo di crescita sia l abbondanza di 39 / 63

40 fitoplancton nelle acque costiere. Il ph dipende non solo dall ossigeno totale disciolto, dall alcalinità e dalla temperatura, ma anche dalla salinità. Quindi gradienti di salinità possono influenzare la distribuzione di alcune specie di fitoplancton anche attraverso variazioni nel ph di equilibrio. 40 / 63

41 Ossigeno disciolto 41 / 63

42 La concentrazione dell ossigeno disciolto è usualmente utilizzata come indicatore della salute degli ambienti acquatici. L ossigeno disciolto è in relazione inversa con temperatura e salinità 42 / 63

43 ed è fortemente influenzato dalla velocità del vento, dalla turbolenza dell acqua e dall attività fotosintetica da parte del fitoplancton nonché dalla presenza di reazioni che consumino ossigeno (ad es. un elevata presenza di batteri). La percentuale di saturazione dell ossigeno è la quantità di ossigeno presente rispetto al valore massimo, preso uguale a cento, che si può 43 / 63

44 avere nelle stesse condizioni di salinità, di temperatura e pressione atmosferica. 44 / 63

45 Un basso valore di saturazione indica la presenza di stress ambientali che siano causa di considerevoli consumi di ossigeno; per esempio questo può accadere dopo una fioritura di fitoplancton seguito dalla degradazione delle cellule morte. Anche in assenza di intensa attività fotosintetica, una saturazione maggiore del 100% è relativamente comune durante i periodi di 45 / 63

46 rapido raffreddamento dell acqua. Questa situazione, tuttavia, può durare solo per brevi periodi per la tendenza dell ossigeno ad equilibrarsi tra aria ed acqua. 46 / 63

47 LE ANALISI MICROBIOLOGICHE 47 / 63

48 . 48 / 63

49 Le analisi microbiologiche vengono effettuate nel laboratorio mobile. 49 / 63

50 La metodica seguita è quella delle membrane filtranti (ai sensi del Dlgs 116/2008): filtrazione dei campioni d acqua su membrane di 0,45 micron di porosità e 47 mm di diametro e successiva incubazione su terreni di coltura selettivi, ad appropriata temperatura, che viene mantenuta in termostato per i tempi stabiliti dalle metodiche di analisi previste dalla legge. 50 / 63

51 I terreni di coltura utilizzati sono freschi, adagiati in piastre Petri sterili, di diametro di 50 mm. I risultati sono espressi in Unità Formanti Colonia in 100 ml d acqua (UFC/100ml). 51 / 63

52 . 52 / 63

53 Terreni: 53 / 63

54 - Escherichia coli: 54 / 63

55 Per l identificazione di E.Coli viene usato il metodo F, APAT CNR-IRSA 7030, IRSA-CNR-ISSN ; che utilizza terreno TBX (Tryptone bile X-glucoronide agar). Il metodo è stato 55 / 63

56 prodotto su indicazione del Public Health Laboratory Service (PHLS) e contiene il composto cromogeno 5-Br-4-Cl-3-indolil- -D-glucuronide (BCIG). 56 / 63

57 Il metodo permette di contare il numero delle colonie di Escherichia coli cresciute su una membrana posta su terreno TBX che contiene sostanze cromogene. 57 / 63

58 Il metodo risulta particolarmente idoneo all analisi di acque superficiali dolci o marine. 58 / 63

59 Il composto cromogeno (X-Gluc), incorporato nel terreno, viene idrolizzato dalla -glucuronidasi di Escherichia coli, che produce quindi colonie di colore blu-verde, dopo incubazione a 44 C per 24 ore. 59 / 63

60 - Enterococchi intestinali: 60 / 63

61 Per l identificazione degli Enterocchi intestinali viene utilizzato il metodo corrispondente alla norma ISO :2000, IRSA-CNR-ISSN , che si basa sull uso del terreno Slanetz 61 / 63

62 e Bartley, indicato nel metodo. Su questo terreno, dopo incubazione a 36 ± 1 C per 44 ± 4 ore si leggono le colonie dal rosso scuro al rosso chiaro. 62 / 63

63 Per la prova di conferma si utilizza il terreno Bile esculina azide agar (BEA): la membrana su cui si sono formate le colonie rosse viene trasferita su una piastra Petri contenente il BEA e tenuta a 44 C per circa 2 ore: si considerano positive le colonie, in corrispondenza delle quali, sul retro della membrana, sul terreno all esculina compare un alone nero-marrone. 63 / 63