Formazione Interdisciplinare sulla valutazione analitica-clinica in Corelab Emocromocitometrico

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1 Formazione Interdisciplinare sulla valutazione analitica-clinica in Corelab Emocromocitometrico Dott.ssa L. Arrigoni

2 Il Passato Conta cellule, reticolociti e piastrine manuale Hb spettrofotometrica Ht per centrifigazione Conteggio manuale dei parametri derivati Valutazione di ogni striscio di sangue periferico

3 Colorazione di May-Grünwald-Giemsa May-Grunwald: eosina-blu di metilene, etanolo al 50%. Giemsa: azur-eosina-blu di metilene, metanolo tra il 20-50%. Blu di metilene (colorante basico) colora: I gruppi acidi degli acidi nucleici e delle proteine del nucleo e del citoplasma I granuli dei basofili che contengono eparina, che ha affinita per i coloranti basici Eosina (colorante acido) colora: I gruppi basici della emoglobina I granuli degli eosinofili Azur colora debolmente i granuli citoplasmatici dei neutrofili.

4 granulociti neutrofili

5 linfocito

6 monocito

7 Eosinofilo

8 Basofilo

9 megacariocita

10 Reticolociti

11 Talassemia - Eritroblasti MCC

12 PROFILI ANALITICI STANDARD SEMPRE PRESENTI XN-CBC emocromo con analisi NRBCsututti i campioni XN-DIFF formula leucocitariacon analisi Granulociti Immaturi su tutti i campioni

13 PROFILI ANALITICI DI APPROFONDIMENTO XN-RET: Reticolociti IRF, 3 frazionimaturative RET, Emoglobina Reticolocitaria XN-BF: Liquidi Biologici WBC, DifferenziazioneLeucocitaria, conteggiocellule nucleate non leucocitariee RBC XN-PLT F: Piastrine in fluorescenza Analisi PLT in fluorescenza PiastrineImmature/Reticolate(IPF) XN-WPC Approfondimento delle patologie leucocitarie

14 CBC + NRBC CBC +DIFF+ NRBC CBC + NRBC + RET CBC + NRBC + DIFF + RET Body Fluid

15 15

16 Monociti Linfociti Neutrofili Eosinofili Intensità di fluorescenza: Monociti > Linfociti > Neutrofili Eosinofili GMF

17 Citometria a flusso in fluorescenza Analisi delle cellule a 3 dimensioni con valutazione di scatter frontale (FSC), scatter laterale (SSC) e intensitàdi fluorescenza (SFL)

18 IG: Granulociti Immaturi Accuratezza analitica a supporto del conteggio microscopico Selezione più specifica dei campioni per la revisione microscopica Monitoraggio infezioni acute/sepsi, patologie mieloproliferative, mielodisplasie

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20 MCC

21 HFLC (Linfociti ad Alta Fluorescenza) Quantificazione Linfociti B attivati/plasmacellule Valutazione e monitoraggio di patologie infettive, patologie linfoproliferative associate

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23 plasmacellula

24 mieloma (SP 25x, 40x)

25 Parametri: RBC, PLT Metodi: Resistivo con Focalizzazione idrodinamica Reagenti: Cellpack DCL

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27 HGB RBC e PLT 27

28 INDICI ERITROCITARI HCT(Ematocrito) Viene misurato direttamente, tramite sommatoria dell'ampiezza degli impulsi contati nel canale RBC. Rappresenta la percentuale di eritrocitiin 100 ml di sangue MCV(volume corpuscolare medio) MCV(fl) = Hct(%) X 10 / Rbc(x 10 6 /µl ) MCH(contenuto emoglobinico medio) MCH (pg) = Hgb(gr/dl) X 10 / Rbc(x 10 6 /µl) MCHC(concentrazione emoglobinica corpuscolare media) MCHC (gr/dl) = Hgb(gr/dl) X 100 / Hct(%)

29 RDW-SD Rappresenta l'ampiezza della curva di distribuzione RBC. Viene calcolato come differenza volumetrica ad un'altezza pari al 20 % del picco RBC e viene espresso in fl. RDW-CV Rappresenta l'ampiezza di distribuzione espressa in coefficiente di variazione (%). Viene calcolato dividendo la deviazione standard (SD) per il valore di MCV. Il confronto tra i due parametri può fornire utili indicazioni per la diagnosi delle anemie

30 INDICI PIASTRINICI PCT (piastrinocrito) Viene misurato direttamente tramite sommatoria dell'ampiezza degli impulsi contati nel canale PLT. Rappresenta la percentuale di piastrine in 100 ml di sangue. MPV (volume piastrinico medio) Viene calcolato utilizzando la seguente formula: PCT (%) x 1000 / PLT (x10 3 / µl) PDW (ampiezza curva di distribuzione PLT) Viene calcolato come differenza volumetrica ad una altezza pari al 20% dell'istogramma PLT. Viene espresso in femtolitri [fl] P-LCR (percentuale di piastrine grandi) Percentuale di PLT con volume superiore a 12 fl

31 Un contributo efficace alla diagnosi delle Anemie Analisi in Fluorescenza con fluorocromo dedicato Colorazione RNA Reticolociti, in funzione del grado di maturazione 3 stadi maturativi reticolocitari: LFR, MFR, HFR; IRF Conteggio PLT-O

32 Affidabilità di risultati in presenza di: Frammenti Eritrocitari Spiccata anisopoichilocitosi Presenza di Piastrine Giganti Conteggio PLT con metodo Ottico Reflex test in completa automazione Riduce drasticamente la necessità di revisione microscopica o metodi di conteggio alternativi

33 1) Normalmente il sistema riporta il conteggio impedenziometrico(plt-i) 2) In caso di scarsa affidabilità PLT-I, viene refertato il conteggio ottico(plt-o)

34 Completa differenziazione delle cellule nucleate MN WBC PMN Leucociti Mononucleati(Linfociti + Monociti) % e # Polimorfonucleati% e # MO HF TC cellule non WBC % e # (mesoteliali, macrofagi, tumorali) LY NE EO

35 Neutropenia NEUT# < 1, /µl or NEUT%< 0.0% Neutrophilia NEUT# > 11, /µl or NEUT%> 100.0% Lymphopenia LYMPH# < 0, /µl or LYMPH%< 0.0% Lymphocytosis LYMPH# > 4, /µl or LYMPH%> 100.0% Monocytosis MONO# > /µl or MONO%> 100.0% Eosinophilia EO# > /µl or EO%> 100.0% Basophilia BASO# > /µl or BASO%> 100.0% Leukocytopenia WBC < 2, /µl Leukocytosis WBC > 18, /µl IG Present IG# > 0, /µl or IG%> 100.0% Tutti i valori sono liberamente impostabili dall operatore