PROPOSTA DI PROTOCOLLO DI STUDIO
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- Cornelio Ricciardi
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1 PROPOSTA DI PROTOCOLLO DI STUDIO Espressione di marcatori di senescenza nelle biopsie renali di pazienti affetti da glomerulonefrite membranosa/ glomerulosclerosi focale. Rapporti clinico-istologici e con la progressione della malattia Proponente Giacomo Garibotto Università di Genova DiMI Clinica Nefrologica, Dialisi, Trapianto Viale Benedetto XV, Genova tel Laboratorio Fax gari@unige.it
2 Premessa: è stato ipotizzato che l alta frequenza di insufficienza renale cronica che si riscontra nella popolazione anziana possa risultare da un interazione tra la senescenza delle cellule somatiche e patologie età-correlate quali ipertensione arteriosa e diabete mellito di tipo 2. Tali patologie infatti possono ulteriormente ostacolare la già limitata capacità dei reni senili di riparare e mantenere la funzioni cellulari. La cellula senescente va incontro ad un arresto di crescita irreversibile, a modificazioni funzionali e morfologiche, presenta accorciamento dei telomeri nonché espressione di specifici markers tra cui SA-β-Gal (β-galattosidasi senescenza-associata) e p16 (prodotto dell omonimo gene oncosoppressore, inibitore delle kinasi ciclina-dipendente) o altri prodotti di geni oncosoppressori. Recentemente, abbiamo dimostrato che reni affetti da nefropatia diabetica (in corso di diabete mellito di tipo 2) mostrano una senescenza accelerata soprattutto a livello delle cellule tubulari e, meno estensivamente, dei podociti; un simile pattern di senescenza viene inoltre ricreato incubando cellule tubulari prossimali umane con alte concentrazioni di glucosio (Verzola 2008). Abbiamo inoltre osservato che markers clinici di sindrome metabolica (quali BMI, emoglobina glicata, glicemia e proteinuria) possono essere predittori di senescenza renale. Inoltre, in letteratura, è stata dimostrata l espressione nucleare di p16 nelle cellule tubulari di reni senili (Melk 2004 e 2005), nei glomeruli sottoposti a condizioni di stress come nel rigetto cronico di trapianto renale (Melk 2000 e 2002) e in glomeruli e cellule tubulari in corso di glomerulonefriti associate a proteinuria (Sis 2007). Scopo: evidenziare l espressione di markers di senescenza nelle biopsie renali di pazienti affetti da nefropatia membranosa e glomerulosclerosi focale primitive. Indagare i rapporti tra marcatori di senescenza cellulare, parametri clinico-istologici e progressione della malattia. Biopsie renali di pazienti con diagnosi istologica di nefropatia membranosa o glomerulosclerosi focale primitiva. Si prevede di valutare almeno 70 biopsie di nefropatia membranosa e un pari numero di biopsie di glomerulosclerosi focale. Materiale bioptico: si richiede sia tessuto criopreservato (analisi SA bgal) che incluso in paraffina (p16-p21). Se non è possibile disporre di materiale criopreservato, lo studio sarà comunque possibile per l analisi immunoistochimica (paraffina). Materiale criopreservato: 3 vetrini (se possibile polarizzati per raccogliere le sezioni) con 2 fettine dello spessore di 5 µm. Dopo il taglio, le sezioni devono essere asciugate all aria per almeno 10 minuti. Le sezioni devono essere fissate in glutaraldeide 0,5% per 10 minuti e asciugate all aria a temperatura ambiente. I vetrini devono essere conservati a +4 C in scatola chiusa fino al momento della spedizione. Questa deve essere effettuata con corriere espresso (consegna sempre entro 48 ore), ma senza necessità di mantenere una temperatura costante. Materiale incluso in paraffina: 5 vetrini con 2 fettine dello spessore di 5 µm su vetrino polarizzato o poli-lisinato non colorati Vetrini colorati: PAS, argentica, tricromica, per l analisi immunopatologica tradizionale Inviare il materiale a: Dssa Daniela Verzola Dipartimento di Medicina Interna Laboratorio di Nefrologia Università di Genova Viale Benedetto XV, Genova tel ; daverz@libero.it
3 Criteri di inclusione: - Età tra 18 e 65 anni - BMI < 29 negli uomini e < 27 nelle donne - Assenza di patologie sistemiche a coinvolgimento renale - Clearance della creatinina calcolata (MDRD) > 30 ml/min - Accertamento istologico di glomerulosclerosi focale o di glomerulonefrite membranosa Criteri di esclusione: Dati clinici richiesti: vedi scheda allegata - Diabete mellito - Neoplasie - Patologie sistemiche immunologiche (SLE, sclerodermia, connettiviti, etc.) - Terapia steroidea/immunodepressiva precedente alla biopsia renale - Clearance della creatinina calcolata (MDRD) < 30 ml/min Durata del periodo di arruolamento: 2 anni Dati clinici di follow up: vedi scheda allegata. Il follow up sarà esteso per almeno 3 anni.
4 SCHEDA CLINICA Centro Inviante Referente: Data Nome (iniziali) Data di nascita Notizie anamnestiche Data della biopsia renale Diagnosi Descrizione della biopsia renale: Immunofluorescenza Microscopia Ottica Sesso M F Peso Altezza BMI PA Fumo Hb Ht GB (N L M E B ) PLT PCR VES Fibrinogeno Ferritina Creatinina urea Acido urico Prot tot Albumina Na K Glicemia Col tot LDL HDL TG Esame urine Proteinuria/die Urinocoltura Ecografia renale Terapia in atto:
5 SCHEDA CLINICA DI FOLLOW UP (semestrale) Peso Altezza BMI PA Hb Ht GB (N L M E B ) PLT PCR VES Fibrinogeno Ferritina Creatinina urea Acido urico Prot tot Albumina Na K Glicemia Col tot LDL HDL TG Esame urine Proteinuria/die Urinocoltura Deceduto SI NO In terapia dialitica SI NO Terapia in atto: Note:
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