IL RISULTATO OTTIMALE DI QUESTO ESAME DIPENDE DA MOLTEPLICI FATTORI TRA CUI :

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1 Test di laboratorio nel quale il sangue raccolto dal paziente viene inoculato in flaconi contenenti terreno di coltura che consente la crescita e la rilevazione di microrganismi causa di infezioni. Si IL RISULTATO OTTIMALE DI QUESTO ESAME DIPENDE DA MOLTEPLICI FATTORI TRA CUI : IL MOMENTO DEL PRELIEVO L INTERVALLO ED IL NUMERO DI PRELIEVI IL VOLUME DEL CAMPIONE L ACCURATEZZA DEL PRELIEVO LE CARATTERISTICHE DEL MEZZO DI COLTURA

2 Prima della terapia antibiotica Prima della nuova somministrazione di antibiotico minuti prima del rialzo febbrile (quando prevedibile) Se questo non è prevedibile, allora eseguire il prelievo all inizio del rialzo febbrile Molti pazienti possono essere ipotermici anche nella fase batteriemica pertanto la febbre da sola non è un utile indicatore, tenere sotto controllo i globuli bianchi, la presenza/assenza di brivido, marcatori biologici come la proteina C reattiva ( PCR )

3 Eseguire 2 massimo 3 prelievi in rapida successione purché da diversi siti anatomici Tre prelievi ottimizzano la sensibilità dell esame (96-99%) Tre prelievi facilitano l interpretazione dei risultati nel caso di isolamento di germi di dubbio significato: patogeno o contaminante? Un solo flacone positivo di emocoltura indicherà la presenza di un contaminante, mentre se si positivizzano più set di emocolture provenienti da differenti siti anatomici, questo indicherà la presenza di un infezione del torrente circolatorio Mai effettuare un solo prelievo nell adulto: lo scarso volume di sangue analizzato potrebbe dar luogo a falso negativo, in caso di positività sarebbe di difficile interpretazione: patogeno o contaminante?

4 Per ogni prelievo utilizzare una coppia di flaconi: FLAC AEROBIO + FLAC ANAEROBIO Adulti: il volume ottimale da inoculare nel flacone aerobio FA e nel flacone anaerobio FN è di 10 ml di sangue ciascuno Pazienti pediatrici: il volume ottimale di sangue da inoculare nel flacone pediatrico PF non è stato definito con esattezza varia da 1 ml a 4 ml (basato sul peso corporeo del paziente) Se il prelievo viene eseguito utilizzando la siringa inoculare prima il Flac ANAEROBIO e successivamente il Flac AEROBIO ANAEROBIO AEROBIO PEDIATRICO Se il prelievo viene eseguito utilizzando il set di prelievo, inoculare prima il Flac AEROBIO e successivamente il Flac ANAEROBIO

5 presente in tutte le tre tipologie di flacone è la stessa :

6 VOLUME DEL CAMPIONE Il volume di sangue prelevato è la causa della significativa variabilità nel recupero di microrganismi da pazienti con infezioni del circolo ematico perciò è importante non inoculare nei flaconi una quantità di sangue superiore a quella consigliata. Tali quantità sono stabilite sulla conoscenza che un emocoltura, perché diventi positiva, deve contenere almeno Nei pazienti batteriemici la concentrazione per ml di sangue è di norma 0,1-1 UFC/ml, il recupero di batteri dal sangue aumenta del 3% per ogni ml di campione raccolto, quindi negli adulti sono necessari 10 ml per flacone, mentre sono sufficienti 1-2 ml nel flacone pediatrico, per la più alta carica riscontrabile nelle batteriemie di neonati e infanti. Inoltre è necessario rispettare tali quantità di inoculo per specialmente per quanto riguarda i batteri anaerobi, poiché i leucociti presenti nel sangue producono una quantità di CO2 sufficiente a indicare positività nella coltura. I flaconi BacT/ALERT possono essere utilizzati per valutare la presenza di microrganismi nel sangue e in tutti i fluidi biologici (es.liquor,liquido pleurico,liquido ascitico,liquido pericardico etc.) fatta eccezione per le urine. I flaconi _BacT/ALERT hanno ottenuto l autorizzazione ufficiale (510(k) notification) dalla FDA (Food and Drug Administration) Americana e marcati CE per l utilizzo nello screening di fluidi biologici

7 EMOCOLTURA : Modalità di prelievo Disinfettare la membrana di gomma con : clorexidina al 2% in alcool isopropilico al 70%, o alcool isopropilico al 70% o tintura di iodio (utilizzando tamponi o ovatta nuovi) Far asciugare la membrana di gomma del flacone per ottenere una disinfezione totale Praticare una pulizia sul sito cutaneo identificato per un diametro di circa 7-8 cm con alcool etilico al 70% procedendo dal centro alla periferia Lasciare asciugare prima della tecnica di antisepsi del sito di prelievo Disinfettare la cute lasciando in sede per almeno 30 secondi un impacco con clorexidina al 2% in alcool isopropilico al 70%, o alcool isopropilico al 70% Il sito di prelievo sarà perfettamente pulito solo se il disinfettante sarà completamente evaporato

8 Introdurre l ago senza ripalpare la zona disinfettata, se fosse necessario utilizzare guanti sterili 10 ml di campione per flacone Durante il prelievo mantenere il flacone in posizione verticale, posizionandolo su un piano d appoggio in modo da controllare la quantità di sangue aspirata Terminato il prelievo agitare delicatamente il flacone per consentire al liquido di mescolarsi al sangue e per evitare la formazione di coaguli

9 Mantenere i flaconi a temperatura ambiente Consegnare possibilmente entro 2 ore; E possibile consegnare in qualsiasi momento al laboratorio emocolture accettate come routine La data di accettazione deve essere quella del giorno in cui viene eseguito il prelievo anche se festivo Non appena i campioni arrivano in laboratorio vengono alloggiati nel sistema analitico di rilevazione microbica BacT/ALERT 3D che inizia il monitoraggio della crescita batterica Se il flacone non viene caricato tempestivamente potrebbe verificarsi una mancata rilevazione da parte dello strumento di positività, poiché la crescita batterica ha già raggiunto il plateau

10 Principio di rilevamento Il cuore del sistema BacT/ALERT 3D è il sensore colorimetrico contenuto nel flacone di coltura in grado di determinare la crescita batterica all interno del flacone di coltura mediante sistema di lettura non invasivo e completamente automatico. In caso di crescita batterica l aumento della concentrazione di CO2 disciolta nel brodo di coltura, provoca una variazione di ph. L abbassamento del ph, che si verifica con la diffusione di CO2, provoca un cambiamento di colore dell indicatore contenuto all interno del sensore. A differenza di altri tipi di sensori fluorescenti, il sensore colorimetrico BacT/ALERT 3D è poco influenzato dalla luce e garantisce una maggiore affidabilità dei risultati, ciò soprattutto nei casi di introduzione ritardata del flacone. Una volta introdotti nella cella di incubazione, i flaconi sono monitorati continuamente, 24 ore su 24, per la creazione della curva di crescita. Durante la lettura un led, situato sul fondo di ogni cella di incubazione emette un fascio di luce diretto verso il sensore colorimetrico. La quantità di luce riflessa dal sensore viene rilevata da un reflettometro che trasmetterà la lettura al computer gestionale per l analisi algoritmica, in base alla quale verrà discriminato il campione in positivo o negativo. Il software di gestione, mediante l utilizzo di sofisticati algoritmi, è anche in grado di distinguere tra la CO2 prodotta dai microrganismi e quella generata dal campione ematico in analisi (processi catabolici del sangue e attività residua dei globuli bianchi). Il monitoraggio dei flaconi in incubazione è continuo, le letture vengono eseguite ogni 10 minuti fino alla formulazione del risultato

11 Con i sistemi automatici i flaconi vengono incubati a 35 C per 5 giorni Non è necessario protrarre l incubazione nel sospetto di endocardite o Brucellosi se vengono rispettati il n di campioni e il volume di sangue Sistemi automatizzati 57% = 12 ore 82% = 24 ore 95-97% entro tre - quattro giorni anche per germi tradizionalmente ritenuti difficili: Brucella, Capnocytophaga, Campylobacter o HACEK(Haemophilus, Actinobacillus, Cardiobacterium, Eikenella, Kingella)

12 Da ogni flacone positivo viene effettuato un esame microscopico per confermare la presenza di batteri o miceti, il risultato viene prontamente refertato in attesa di identificazione biochimica ed antibiogramma E possibile avere informazioni telefoniche preliminari sull andamento delle colture e referto scritto del microscopico eseguito su campioni positivi Laboratorio di Microbiologia Tel Il progetto LaSER Lotta alla Sepsi nell AOU FE:

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14 Identificazione e antibiogramma sulle colonie isolate