LABORATORY OF CELLULAR THERAPY G. LANZANI Scientific Director: Dr. M Introna. USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti Bergamo Director: Prof.

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1 LABORATORY OF CELLULAR THERAPY G. LANZANI Scientific Director: Dr. M Introna USC EMATOLOGIA Ospedali Riuniti Bergamo Director: Prof. A Rambaldi DL 24/4/2006 n 219 Codice comunitario (attua le 2001/83/CE, 2003/94/CE, 2003/63/CE) Regola tutto il ciclo di vita dei prodotti farmaceutici dalla produzione alla commercializzazione. Allegato I. Parte IV: medicinali per terapie avanzate (cellule per terapia somatica e/o terapia genica). Contiene il discusso articolo 28 sulle eccezioni ospedaliere Vedi legge 07/07/2009 n 88, G.U. 161 del 14/07/2009 1

2 AIFA Area produzione e controllo Ufficio autorizzazioni officine Il Laboratorio di Terapia Cellulare G.Lanzani è autorizzato a produrre prodotti per terapia cellulare sottoforma di preparazioni liquide di piccolo volume per uso parenterale preparate in asepsi. Roma, N am-144/2007 Time GENNAIO 2004 LUGLIO 2005 DECEMBRE 2005 APRILE 07 LUGLIO 07 FEBBRAIO 08 NOVEMBRE 08 Laboratorio Lanzani ready to go Idoneità del dott. Introna come Direttore Tecnico 1 ispezione generale AIFA Ispezione di follow up delle azioni correttive Autorizzazione preliminare della Cell Factory da AIFA 2 ispezione generale AIFA 1 Autorizzazione della Cell Factory n am 189/2008 NOVEMBRE 09 OTTOBRE 10 Ispezione di follow up 2 Autorizzazione della Cell Factory n am 155/2010 2

3 Divisione di Ematologia Ospedali Riuniti di Bergamo Data inizio lavori: luglio 2002 Data prevista fine lavori: 31 luglio 2003 Inaugurazione del Centro: settembre

4 Costi di realizzazione del Centro Lavori di ristrutturazione immobili Allestimento Clean rooms Attrezzature scientifiche e sala criobiologia Arredi per laboratori e uffici Professionisti Hardware e software per controllo qualità TOTALE Finanziamento del Centro Offerta Uova di Pasqua Offerta Stelle di Natale Offerta Mele della Solidarietà Altre manifestazioni Offerte varie Contributo CREDITO BERGAMASCO TOTALE

5 Locali adeguati Stoccaggio prodotti Stoccaggio materiali Area di congelamento e stoccaggio prodotti cellulari Laboratori per i Controlli di Qualità sui prodotti di Terapia Cellulare Area di produzione dei prodotti per terapia cellulare in GMP Stoccaggio materie prime Sterile storeroom Lab Quality Control Lab CQII Lab standard Changing room OUT Corridor 3 Changing room IN Corridor 2 TC4 Corridor 1 TC3 Corridor 4 Changing room E Changing room D Cell Therapy 2 Cell Therapy 1 Filter E Filter D 5

6 hmsc EXPANSIONS from fresh material Code Origin of material hmsc Frozen (x 10 6 ) Frozen bags (mean:80x10 6 cells/bag) Number of frozen vials at p1 (~2x10 6 cells/vial) BG-MSC2 washout BG-MSC7 washout BG-MSC11 washout BG-MSC12 washout from frozen vials bank Code n vials used Frozen bags (mean 1x10 7 cells/bags) BG-MSC2 1 3 BG-MSC BG-MSC BG-MSC Capelli C. et al, BMT, 2007; Capelli C et al., Cytotherapy, 2009 Capelli C. et al, Cytotherapy, 2011 Time scale of approval of Phase I clinical study with MSC in agvhd NOVEMBER 08 24/11/2008 Submission of Phase I MSC/aGVHD IMPD to ISS APRIL 09 24/04/2009 Authorization by ISS JULY 09 16/07/2009 Authorization by E.C. Monza NOVEMBER 09 Authorisation by E.C. Bergamo 6

7 MSC for the treatment of severe agvhd Dossier n Eudra CT: 2008/007869/23 Usage of MSC for steroid resistant grade III-IV agvhd Scientific project shared with Prof. A. Biondi and dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca. Clinical PI: Dott. E. Biagi Authorization by ISS on 24/04/2009 Authorization by E.C. Monza on 16/07/2009 MSC infusions in pediatric patients Pts GVHD Grading at MSC Infusion No. of MSC Infusion Infused MSC (Dose/kg) Response After MSC Infusion Follow-up 1A Chronic overlap syndrome 1 1 x 10 6 /kg Partial response temporary Alive with chronic (skin and mucosae grade III) Skin and mucosae grade I skin and mucosae GVHD grade II 2A Chronic overlap syndrome 1 1 x 10 6 /kg Complete response definitive Alive with skin chronic GVHD grade I (skin and mucosae grade II) No GVHD 2B Chronic mucosae and liver x 10 6 /kg Partial response temporary grade III Chronic mucosae and liver grade II 3A Acute skin grade I 1 1 x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 4A Acute skin grade I x 10 6 /kg No response Alive, no GVHD Skin GVHD grade I 4B Chronic skin and liver grade III x 10 6 /kg Partial response temporary Skin and liver grade II 5A Acute skin grade II x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 5B Chronic skin GVHD grade I x 10 6 /kg No response Skin GVHD grade I 6A Chronic overlap (skin and x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD mucosae grade III) 7A Acute skin grade I x 10 6 /kg Complete response definitive Alive, no GVHD No GVHD 8A Acute (skin II and gut grade IV) x 10 6 /kg Partial response temporary Death for progressive gut GVHD Skin and gut grade II And pulmonary aspergillosis 9A Acute (skin and gut grade IV) 2 2 x 10 6 /kg No response Death for sepsis Skin and gut grade IV 10A Grade III Acute gut grade IV x 10 6 /kg Partial response temporary Alive, no GVHD 11A Acute gut grade IV x 10 6 /kg No response Deah for gut GVHD and pneumonia Lucchini G. et al, BBMC, 2010 Dander E. et al, Leukemia, 2012, Lucchini G. et al, Stem Cell Int,

8 OS adult patients treated by MSC produced at Bergamo Cell Factory Kaplan-Meier survival estimates, by pentostatina N = 12 N = analysis time pentostatina = 0 pentostatina = 1 P = Log Rank OS at 1 year 0,54 with pentostatin and 0,00 without pentostatin Biological Background of Citokine Induced Killer (CIK) cells Restricted CIK cell killing TCR + +? MHC I Target cell Non MHCrestricted killing Tumor cell CIK cells show non-specific anti-tumoral activity and home to tumors without significant GVHD in several animal models. Introna et al, BMT, 2006; Marin et al, Exp. Hematol, 2006; Franceschetti et al, Exp Hematol, 2009; Introna et al, BBMT, 2010; Pievani et al, Blood, 2011; Pievani et al, Blood,

9 Cellule CIK da donatore per le ricadute leucemiche Dossier n PRE Titolo: Impiego linfociti CIK: Fase I Approvazione in data 30/05/2005 Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca. Results Clinical response None 6 Stable Disease 1 Hematologic Improvement 1 Complete response 3 Alive/dead 4/7 Days of Median Follow up from transplant 782 ( ) Introna et al,

10 AIFA Protocollo CIK 2 Numero EudraCT: Infusione sequenziale di linfociti non manipolati del donatore (DLI) e linfociti killer indotti da citochine (CIK) dopo il trapianto allogenico di cellule staminali Fase II autorizzata da AIFA il , Prot.n AIFAII/37533/P Autorizzazione da CE Bergamo: 30/07/2009 Progetto scientifico in condivisione con il Prof. A. Biondi e il dott. E. Biagi, Unità di Pediatria, Ospedale San Gerardo, Monza, Università Milano Bicocca, con il Prof. S. Cortelazzo, Ospedale Bolzano. PI clinico: Prof. A Rambaldi Toxicity Number of patients Grade a GVHD 1 III (skin+gut) c GVHD 1 III Hemolitic anemia 1 (maybe not correlated) 10

11 Summary of results I Clinical response (100 days from the last CIK administration) Number % Total evaluable patients CR PR 4 19 NR 3 14 Early death (67%) 2 have not reached yet 100 days to clinical response evaluation (TE) Dose excalation Phase MTD not reached even at the highest dose used: x10 6 /kg So far 12/23 patients have been treated at the highest dose level Overall Survival Cumulative survival CIK-2: Overall survival, n=23 (0.55) days 11

12 Vestizione degli operatori di produzione 1 stadio di vestizione (spogliatoio D) 2 stadio di vestizione (ingresso nell area controllata, classe C) 3 stadio di vestizione (Laboratorio di produzione, classe B) Tuta pulita, guanti, maschera e copricapo Camice e sovrascarpe Tuta sterile integrale a basso rilascio di particelle Lotto PTC Example of monitoring during work shifts Data prelievo Operat. Punto Testato Batt Funghi Piastre contatto Tot. CFU /piastra Medie Batt. funghi Piastre sediment. Tot. CFU /piastra PTC CC Sotto cappa (A) Sotto cappa (A) Banco monitor (B) Guanto dx (A) Guanto sx(a) PTC CC Sotto cappa (A) Sotto cappa (A) Banco monitor (B) Guanto dx (A) Gunato sx (A) PTC CC Sotto cappa (A) Sotto cappa (A) Banco monitor (B) Guanto dx (A) Gunato sx (A) Limiti di CFU totali/ piastra da sedim.,contatto e per i guanti: Classe A: <1 Classe B: 5 Medie 12

13 Controlli microbiologici eseguiti durante i shift di lavoro nel 2009 Ambiente testato N totale di shifts di lavoro analizzati N totale di piastre usate N tests risultati fuori specifica piastre FS TC ,28% TC ,44% Microbiological monitoring Microbiologiocal monitoring of environment and operator at each workshift (10 plates) Monthly microbiological monitoring of the whole production area (16 plates) Regular microbiological monitoring of cleaning procedures (eg floor pre- and post-cleaning) and of cleaning personel At least yearly reconvalidation of all rooms in controlled area > 3500 microbiological plates used/ year 13

14 Controlli sul prodotto finale Numero e vitalità delle cellule Caratteristiche biologiche delle cellule (marcatori di superficie, attività biologica in vitro) Sterilità per batteri e muffe (USC Microbiologia) Assenza di micoplasma (ditta esterna) Limite di endotossina Dal 2007: 165 CIK batches and 97 MSC batches : tutti sono risultati sterili vitali e con livelli di endotossina adeguati Bergamo, 26/6/2012 Organigramma Unità Clinica Programma di Trapianto delle Cellule Staminali Emopoietiche Direttore: Alessandro Rambaldi USC Ematologia Centro di Raccolta SIMT Responsabile: Dott.essa A. Falanga Laboratorio di Terapia Cellulare G. Lanzani Responsabile: M. Introna Personale Amministrativo E. Traini 2. Produzione di prodotti di Terapia Cellulare in GMP Qualified person: M. Introna Assicurazione di Qualità Responsabile: J. Golay Operatori: C. Capelli O.Pedrini A.D amico E.Gotti 1. Processazione di cellule staminali emopoietiche Responsabile: M. Introna Referente Qualità del Laboratorio (RQL): J. Golay Operatori E. Gotti C.Capelli O.Pedrini 3. Ricerca e Sviluppo Group leaders M. Introna J. Golay 14

15 Locali Stoccaggio sacche Stoccaggio materiali Area di congelamento e stoccaggio prodotti cellulari Area di manipolazione delle cellule staminali Laboratori per i Controlli di Qualità Stoccaggio materie prime Sterile storeroom Lab Quality Control Corridor 3 Corridor 1 Cell Therapy 2 Lab CQII Lab standard Changing room OUT Changing room IN Corridor 2 TC4 TC3 Changing room E Changing room D Cell Therapy 1 Filter E Filter D Tutto il personale Competenza (requisiti iniziali) Addestramento specifico Formazione continua 15

16 Formazione personale dal 2005 Gestione degli impianti e della qualità: 4 persone Manipolazione: 5 persone Corsi interni di qualità eseguiti dal 2005: 14 La formazione viene eseguita secondo piani annuali e documentata da check list / questionari ecc. Impianti e strumentazione MONITORAGGIO CONTINUO DEGLI AMBIENTI E DELLE APPARECCHIATURE UNITA TRATTAMENTO ARIA Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di: Temperatura Pressione Umidita Parametri meccanici UTA SERVER Report dati SISTEMA METASYS JOHNSON CONTROLS Incubatori, frigoriferi, congelatori, cappe a flusso Anti-incendio Monitoraggio, registrazione, archiviazione,rappresentazione di: Temperatura CO2 Efficienza di flusso Remotizzazione allarmi controllo accessi Centralina presidiata 24h/24 16

17 Documentazione della struttura e degli impianti Qualità dell aria Documenti dell impianto meccanico Strumentazione di laboratorio: Istallazione, Manutenzione ordinaria e straordinaria, manuali, contratti ecc Controllo della qualità dell aria nel locali di produzione 1. Particellare Eseguiti da una ditta esterna certificata Convalida ambientale iniziale: Verifica estesa del numero di particelle in tutti i locali della zona protetta (spogliatoi, corridoi, magazzino, locali filtro, locali di manipolazione), analisi dei punti più critici Riconvalida semestrale dei locali 17

18 Qualità dell aria nei laboratori di produzione: Analisi delle particelle/m 3 Limiti di accettabilità per le particelle(eu GMP Annex 1, rev. 2008) Grado A: Sotto cappa dove il prodotto viene in contatto con l ambiente (apertura fiasche) Grado C: Il laboratorio di processazione Monitoraggio Microbiologico Convalida iniziale dei locali di processazione Riconvalide mensili/ annuali Convalida delle procedura di pulizia 18

19 Procedure per il Programma Trapianto 1 Manuale della Qualità + SOP aziendali 1 Procedura specifica per la manipolazione delle cellule staminali 17 SOPs per la gestione della struttura e della strumentazione 22 SOPs per la gestione dei processi (manipolazione, congelamento e controlli di qualità sul prodotto) 10 SOPs per la gestione della Qualità (gestione procedure, formazione, non conformità ecc) Tutti gli aspetti del sistema di qualità sono documentati SOPs Convalide Fogli di lavoro Controlli ambientali Reclami Formazione del personale Autoispezioni Non conformità Eventi Avversi Pulizie 19

20 Attività N di processazioni CSE da pazienti autologhi CSE allogeniche da donatore familiare CSE allogeniche da donatore non familiare da sangue periferico (MUD) Espianti midollo osseo CSE allogeniche da cordone ombelic. Linfocitoaferesi da donatore sano Totali Test di sterilità eseguito su tutti i prodotti al termine della manipolazione Bactalert eseguito dalla USC Microbiologia e Virologia Anno N aferesi N positivi % % % % % Totale % % contaminazione 20

21 3. Utilizzo di etichette secondo ISBT 128 Laboratorio di Terapia Cellulare G.Lanzani USC Ematologia, Ospedali Riuniti di Bergamo Alessandro Rambaldi Martino Introna Josée Golay Gianmaria Borleri Chiara Capelli Alice Pievani Elisa Gotti Luca Bologna Ariel Amaru Elisabetta Traini Microbiologia OORRBG Ufficio Tecnico OORRBG Ufficio Qualità OORRBG Uffici Amministrativi OORRBG Ufficio Ambientale OORRBG/Impresa pulizie Direttore USC Ematologia Qualified Person DT e RRP Quality Control e RRCQ Operator Production Operator Production Operator Production Operator Production Operator Quality Control PhD, Ricerca e sviluppo Operatore di supporto gestionale Ricerca donatori: E. Oldani Gestione software: F. Delaini Gestione GCP: ML Ferrari Associazione Italiana Contro le Leucemie Linfomi e Mielomi ONLUS sezione PAOLO BELLI 21

22 Hematology-BMT unit A. Grassi A. Algarotti C. Micò E. Todisco PI: Prof A. Rambaldi The nurses Hematology Bolzano Prof S. Cortelazzo I. Cavattoni S. Deola The clinical trial unit E. Oldani F. Delaini M. L. Ferrari M. Magri A. Carobbio Hematology Monza Prof A. Biondi E. Biagi A. Balduzzi G. Gaipa The Cell Therapy G. Lanzani J. Golay RAQ G. Borleri C. Capelli A. Pievani E. Gotti L. Bologna A. Amaru E. Traini M. Introna QP and Scientific Director 22