Le Tecniche di P.M.A. Giovanni Bracchitta

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Norma Biondi
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1 Le Tecniche di P.M.A. Giovanni Bracchitta

2 Le Tecniche di PMA Sono metodiche che consentono di selezionare gameti maschili e/o femminili al fine di riuscire ad avere un successo procreativo nei casi in cui per impedimenti organici o funzionali è stato impossibile ottenere una gravidanza per via naturale

3 Epidemiologia L infertilità di coppia rappresenta un importante problema medico e sociale, interessando circa il % delle coppie in età fertile nei paesi industrializzati. Almeno la metà delle cause di infertilità di coppia è da ricercare nel maschio (34,3%) ISS 3 3 report 2007

4 Urologo-Andrologo Oggi non è più colui che sa interpretare uno spermiocitogramma, ma è uno specialista che spazia dalla medicina interna all endocrinologia, dalla microbiologia alla biologia molecolare e alla genetica Per essere in grado di Gestire al meglio il maschio infertile e determinare l utilità o meno dell applicazione delle Tecniche di P.M.A, la loro tempistica ed il livello di tecnologia necessario per arrivare al concepimento

6 Liquido Seminale e Fertilità I valori di riferimento derivano dai risultati di numerosi studi prospettici trasversali sulla qualità del seme e sulla fertilità. Sono stati ottenuti da una selezione diretta e retrospettiva di uomini fertili definiti come uomini le cui partner hanno concepito entro 12 mesi dalla sospensione di metodi contraccettivi

7 Liquido Seminale e Fertilità

8 Liquido Seminale e Fertilità

9 Liquido Seminale e Fertilità

10 Liquido Seminale e Fertilità Gruppi di campioni di 400/1900 Unità provenienti da otto paesi di tre Continenti

11 Liquido Seminale e Fertilità

12 Liquido Seminale e Fertilità

13 Quadri Seminali OLIGOSPERMIA MODERATA > 5 MILIONI SPZ MP/ ml

14 Quadri Seminali OLIGOSPERMIA SEVERA 2 MILIONI SPZ MP/ml 5 Dopo Trattamento 4 % F.N.

15 Dopo Trattamento < 1 mil/ml spz % < 2 mil/ml spz < 5 mil/ml spz 12,8 5.3% 4 % F.N.

16 Quadri Seminali OLIGOSPERMIA SEVERA 0,5 MILIONI SPZ MP/ ml 1 Dopo Trattamento 4 % F.N.

17 Quadri Seminali OLIGOSPERMIA SEVERA < 1 MILIONI SPZ MP Totali Dopo Trattamento 4 % F.N.

18 Esami Genetici Tutti i pazienti con < 10 milioni/ml di spz Cariotipo Pazienti con > 10 milioni/ml di spz, ma anamnesi positiva per infertilità aborti ricorrenti Microdel Y CFTR Tutti i pazienti con < 5 milioni /ml di spz Pazienti con infertilità idiopatica con < 10 milioni /ml di spz Pazienti con azoospermia ostruttiva da agenesia bilaterale dei deferenti

19 I.M.S.I Osservazione ad alto ingrandimento: X/13.000X dei vacuoli nucleari degli spermatozoi

20 Nuovo Concetto Il potenziale di fertilità degli spermatozoi ed il normale sviluppo dell embrione dipendono fondamentalmente dalla funzionalità e dall integrità delle differenti strutture spermatiche DNA Nucleare

21 DNA Nucleare Funzionalità Mitocondriale Aneuploidie

22 Alterazione di Funzione Alterazioni Ormonali Alterazioni Fattori di Crescita Azione di Citochine Azione di Ligandi Agenti lesivi specifici Specie Reattive dell ossigeno Induttori

23 FAS-R (APO1) (CD45) TNF-R 1 (stim da FAS e TNF) TNF-R 2 Questo processo richiede energia ed un organizzazione cellulare non troppo danneggiata

24 Significato dell Apoptosi Mantenere il n di cellule germinali dentro la capacità di supporto delle cellule del Sertoli. Eliminare dall organismo cellule con attività compromessa Eliminare Cellule sottoposte a Stress Ossidativi

25 Studio Funzionale Studio funzionale dello spermatozoo Test Oggetto di Valutazione Significato Clinico Annesina 5 JC-1 Esternalizzazione Fosfatidil serina Potenziale di membrana mitocondriale Apoptosi in fase iniziale Apoptosi in fase iniziale Arancio Acridina Integrità cromatinica Stress ossidativo e alterazione dei meccanismi riparativi del DNA TUNEL Frammentazione del DNA Necrosi e apoptosi in fase avanzata Anilina Protamminazione del DNA Alterazione dei processi di maturazione nucleare Condenzazione Condensazione nucleare Alterazione dei processi di condensazione FISH Aneuploidie Spermatiche Alterazione del numero dei cromosomi spermatici

26 La Nostra Esperienza Sperm Chromatin Dispersion Test (HALO Test) Il protocollo si basa sul test della dispersione cromatinica (SCD, Sperm Chromatin Dispersion; Gli spermatozoi con DNA frammentato, dopo trattamento denaturante, non sviluppano aloni di dispersione della cromatina, al contrario gli spermatozoi con DNA intatto sviluppano un alone (di dimensione grande o media) di dispersione della cromatina. Fernandez et al; J Androl 24: 59-66; Fertil Steril 84: , 2005

27 Spz. con DNA Intatto Spz. con DNA frammentato

28 Risultati del Test e Valore Soglia (SCSA): Valori 30% sono risultati non compatibili con uno stato di buona fertilità Valori 15% sono risultati compatibili con uno stato di buona fertilità Bibliografia : Donald P Evenson et al. Utility of the sperm crhomatin structure assay..., Human Reproduction, vol 14 no.4, pp , Donald P Evenson et al. Sperm Crhomatin Structure Assay : Its clinical use for detecting Sperm DNA fragmentation..., Journal of Andrology, vol 23, No1, January/February Jose Luis Fernandez et al., The Sperm Chromatin Dispersion Test, Journal of Andrology, Vol 24, No. 1, January/February Kazim R. Khohan et al, Comparison of Chromatin Assays for DNA fragmentation Evaluation in Human Sperm;, Journal of Andrology, Vol 27, No. 1, January/February 2006.

29 Cod Età Anamnesi Chimico Fisiche Spz mil/ml prog. % mob tot % Vitalità % Framm % Note ICSI Fumo 20 sig/die + esp a radiazioni + temp elevate Prog AIH LS Eiac Retrograda Viscosità aumentata ICSI Fumo 20 sig/die LS AIH Prostatite LS Fumo 15 sig/die AIH Fumo 35sig/die LS Prostatite Viscosità aumentata LS ICSI Spergin Q10 Viscosità aumentata AIH Viscosità aumentata Prog ICSI 41 Esposizione a sost chimiche AIH AIH Prog ICSI Prog ICSI Stim con FSH + SperginQ AIH AIH Prostatite Prog AIH Fumo 25 sig/die ICSI Fumo AIH ICSI Fastidio testicolare LS Prostatite AIH Viscosità aumentata ICSI Viscosità aumentata ICSI Varicocele II + Prostatovesciculite LS 65 Congestione irritativa prostatica LS Preostatovesciculoepididimite ICSI Disuria Viscosità aumentata 4, ICSI ICSI Varicocele III Prog ICSI LS

30 Periodo Agosto Ottobre 2011 Eseguiti N 35 Test di Frammentazione Risultati SCD Test < 30% SCD Test 30% Totale N pazienti Pazienti con SCD Test 30% Storia riproduttiva N 5 Pz. Fallimenti in cicli ICSI precedenti Anamnesi N 2 Pz. N 2 Pz. N 1 Pz Prostatovesciculoepididimite Varicocele Congestione irritativa prostatica

31 Conclusioni Prima di impostare protocolli terapeutici per l applicazione di tecniche di PMA è fondamentale un corretto approccio Diagnostico/Terapeutico Per giungere ad ottenere il maggior numero di spermatozoi mobili, normoconformati e possibilmente dotati di buona capacità fecondante

32 Conclusioni

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