Le metodiche di II livello per l identificazione di miscele anticorpali

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1 5 Users Meeting Milano, 15 novembre 2012 Le metodiche di II livello per l identificazione di miscele anticorpali Donatella Londero - UDINE

2 Anno 2012

3 Principale Obiettivo dell esercizio Valutare l identificazione di miscele di anticorpi (12E2, 12E3, 12E8, 12R9) Valutare l identificazione anticorpale quando un anticorpo non enzima-specifico è presente assieme ad un anticorpo clinicamente significativo (12R4) Valutare l identificazione di una miscela di anticorpi che includa un Ab a bassa significatività clinica diretto verso un antigene a bassa frequenza (12E5) Valutare l identificazione di una miscela di due anticorpi che non reagiscono con emazie trattate con enzimi (12R7)

4 Guidelines for pre-transfusion compatibility procedures in blood transfusion laboratories BCSH Identificazione degli Anticorpi Laboratori non registrati in un programma EQA per l identificazione di Ab dovrebbero inviare i campioni risulati positivi ad un test di screening ad un laboratorio registrato Deve esserci concordanza di risultati tra il test di screening e di identificazione La specificità di un anticorpo dovrebbe essere assegnata solo quando esso è reattivo con almeno due esempi di emazie test che presentano l'antigene e non reattivo con almeno due esempi di emazie test privi dell'antigene Un singolo pannello può non permettere l identificazione di alcune combinazioni anticorpali

5 Guidelines for pre-transfusion compatibility procedures in blood transfusion laboratories BSCH Risoluzione di problemi nell identificazione di Ab 6.4.1Tecniche aggiuntive possono essere d aiuto nell identificazione anticorpale (pannello enzimatico, eluizione, assorbimento) 6.4.3La determinazione del fenotipo è parte integrante dell identificazione di un anticorpo in pazienti che non siano stati recentemente trasfusi

6 AABB Technical Manual 15 ma edizione (2009) - Storia clinica del paziente - Metodo dell esclusione o cross out - Metodo di Fisher (3 emazie Ag+/ 3 emazie Ag-) - Valutazione della fase, T di incubazione, mezzi potenzianti - Fenotipo - Assorbimento - Eluizione

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8 Esercizio 12E2 Schedina Fase solida

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10 P1 Alloassorbimento con emazie Jkb+; ccee

11 P2 Alloassorbimento con emazie Jkb+; cceekk

12 Esercizio 12E2 RIASSUNTO DELL ESERCIZIO Paziente 1: Anti-E+Jkb Paziente 2: Anti-K+Jkb Paziente 3: Inerte Paziente 4: Inerte La maggior parte degli errori di identificazione in questo esercizio, sia in Italia che nel Regno Unito e Irlanda, potevano essere evitati con una sistematica esclusione di altri anticorpi clinicamente significativi potenzialmente o effettivamente mascherati dalle reazioni dovute all anti- Jkb.

13 Esercizio 12E2

14 Esercizio 12E

15 Esercizio 12E3 Identificazione in Liss/Coombs versus Enzima

16 P2 Alloassorbimento con emazie ccdee; Fy(a-b+)

17 Esercizio 12E3 RIASSUNTO DELL ESERCIZIO Paziente 1: Inerte Paziente 2: Anti-c+Fya Paziente 3: Anti-Fya Paziente 4: Inerte Tutti i laboratori italiani hanno correttamente identificato gli anticorpi presenti nella miscela del campione 2 e il singolo anti-fya presente nel campione 3. L utilizzo di una metodica di II livello (alloassorbimento) consente anche l esclusione di anticorpi la cui specificità è spesso associata (c,e).

18 Esercizio 12E3

19 Esercizio12R7

20 12R7 Fenotipo del paziente: Ccee;Ns;Lua+;kk;Le(a-b+);Fy(a-b+);Jk(a+b+)

21 12R7 Agglutinazione diretta a Temperatura ambiente

22 Esercizio12R7

23 5 Users Meeting Milano, 15 novembre 2012 La titolazione delle isoagglutinine anti-a e anti-b: metodiche, indicazioni e livelli critici

24 Esercizi Pilota per la titolazione di anti-a e anti-b 12ABO T1 (11/06/2012) Tre campioni di plasma di gruppo O per la titolazione degli anticorpi anti-a Globuli rossi A1 rr sospesi in soluzione modificata di Alsever (30%) Tecnica Standard Diamed Tecnica utilizzata di routine nel laboratorio (in house) DRT (IgM); IAT (IgG) Uso clinico 12ABO T2 (03/09/2012) Un campione di plasma di gruppo B e due campioni di plasma di gruppo O per la titolazione degli anticorpi anti-a Globuli rossi A1 rr sospesi in soluzione modificata di Alsever (30%) Tecnica Standard Diamed Tecnica utilizzata di routine nel laboratorio (in house) DRT (IgM); IAT (IgG) Uso clinico

25 Metodiche utilizzate DRT Standard Diluizione emazie allo 0.8-1% in CellStab o ID2; Diluizione scalare plasma in NaCl/PBS 50μl emazie + 50μl plasma in schedine NaCl Diamed T ambiente per 15 min Centrifugare 10 min DRT Grifols Diluizione emazie allo 0.8-1% in DG Sol; Diluizione scalare plasma in NaCl 50μl emazie + 50μl plasma in schedine Grifols Neutre T ambiente per 15 min Centrifugare 9 min

26 Metodiche utilizzate IAT Standard Diluizione emazie allo 0.8-1% in CellStab o ID2; Diluizione scalare plasma in NaCl/PBS 50μl emazie + 25μl plasma in schedine IgG Diamed 37 C per 15 min Centrifugare 10 min IAT Grifols Diluizione emazie allo 0.8-1% in DG Sol; Diluizione scalare plasma in NaCl 50μl emazie + 50μl plasma in schedine Grifols Liss 37 C per 15 min Centrifugare 9 min

27 Esercizi Pilota 12ABO T1 DRT In-house Grifols IAT In-house Grifols

28 Esercizi Pilota 12ABO T2 IAT In-house Grifols

29 Trapianto di CSE da sangue periferico Incompatibilità ABO maggiore o doppia Incompatibilità Prima del trapianto: titolo anti-a/anti-b sia IgM>1:256 IgG >1:256 = 1/2 procedure di plasmaexchange al termine del condizionamento Il giorno della raccolta: IgM<1:256 e IgG < 1:256 e volume RBC<15 ml = la sacca di CSE viene diluita con albumina al 5% IgM> 1:256 e/o IgG> 1:256 e volume RBC>15ml = la sacca di CSE viene diluita, anticoagulata e frazionata Incompatibilità ABO minore IgM>1:512 e IgG >1:512 = la sacca viene centrifugata, il plasma del donatore viene eliminato; CSE risospese, anticoagulate ed eventualmente frazionate IgM<1:512 e IgG <1:512 = la sacca viene diluita e anticoagulata

30 Trapianto di midollo Incompatibilità ABO maggiore o doppia Incompatibilità titolo antia/anti B sia IgM>1:32 IgG >1:64 = 1/ 2 procedure di plasmaexchange Ricontrollare il titolo dopo ciascuna procedura aferetica : Per valori di IgM>1:32 e di IgG >1:64 = processare il MO con separatore cellulare Per valori di IgM< 1:32 e di IgG< 1:64 = in base al contenuto di WBC totali processare il MO con filtrazione/anticoagulazione/centrifugazione o con separatore cellulare Questo ultimo procedimento si utilizza anche in caso di incompatibilità minore

31 Grazie per l attenzione