Impiego Per la misura quantitativa in vitro del testosterone nel siero e nel plasma umani (EDTA o eparina).

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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti Testosterone Testo Impiego Per la misura quantitativa in vitro del testosterone nel siero e nel plasma umani (EDTA o eparina). Compendio e spiegazione del dosaggio Il testosterone viene prodotto dalle ghiandole surrenali, dalla teca del follicolo ovarico e dalle cellule di Leydig del testicolo. Il 97% del testosterone in circolazione è legato a sieroproteine come globulina legante gli ormoni sessuali (SHBG) 1. Nell uomo, il testosterone stimola la maturazione dei genitali e dei caratteri sessuali secondari, e la relativa misura consente di valutare disfunzioni sessuali nei ragazzi e negli adulti 2. Nella donna i livelli di testosterone sono molto minori ed un livello elevato può essere sintomo, fra l altro, di sindrome ovarica policistica 3. I sintomi clinici dell eccesso di testosterone nella donna includono infertilità, amenorrea, obesità e irsutismo 4. Principi della procedura Il dosaggio del Testosterone VITROS viene eseguito utilizzando la confezione di reagenti testosteronici VITROS e i calibratori testosteronici per prodotti immunodiagnostici VITROS sul Sistema immunodiagnostico VITROS. Si utilizza una tecnica d immunodosaggio competitiva basata sulla competizione tra il testosterone presente nel campione e coniugato testosteronico marcato con perossidasi di rafano (HRP) per un numero limitato di siti leganti su anticorpo anti-testosterone di ratto biotinilato. Il complesso antigene-anticorpo viene catturato dalla streptavidina sui pozzetti, mentre i materiali non legati vengono rimossi mediante lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 5. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta prolungandone l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è indirettamente proporzionale alla concentrazione di testosterone presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Gli emoderivati contenuti nella presente confezione e nei calibratori per testosterone VITROS provengono da donatori umani i quali sono stati sottoposti a test individuali usando metodi approvati (immunodosaggio enzimatico) e risultati negativi per quanto concerne la presenza dell antigene di superficie dell epatite di tipo B, di anticorpi del virus dell immunodeficienza umana (HIV 1+2) e del virus dell epatite C (HCV). Trattare come materiale potenzialmente infettivo. Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, HCV, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS 6 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon Il reagenti contenente Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1095_IT 1

2 Testo ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, legante 2 ng biotina /pozzetto). 8,4 ml di reagente coniugato (HRP-testosterone, 60 ng/ml) in soluzione tampone con agente antimicrobico. 13,3 ml di reagente anticorpo biotinilato (biotina-anti-testosterone di ratto, legante 0,025 nmol di testosterone/ml) in soluzione tampone con agente antimicrobico e siero umano. NOTA: Contiene sieroalbumina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per testosterone (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti Le Confezioni di Reagenti per Prodotti Immunodiagnostici VITROS contengono reagenti liquidi omogenei che non devono essere agitati né mescolati prima di essere caricati sul Sistema. Come tutte le soluzioni per dosaggi immunologici a base di proteine, una manipolazione scorretta della confezione di reagente può provocare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente stesso. La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul Sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul Sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per testosterone vengono forniti pronti per l uso. Conservare i calibratori in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Dopo l apertura conservare per un massimo di 13 settimane a 2-8 C o di 13 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero o plasma (EDTA o eparina). Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni di siero o plasma possono essere conservati fino ad un massimo di 7 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 7. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il Sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il Sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. Se le Confezioni di Reagenti VITROS vengono capovolte o agitate, piccole quantità di schiuma sottile possono risultare impossibili da rilevare dal Sistema VITROS. Le Confezioni di Reagenti contenenti una schiuma sottile che non viene rilevata possono mostrare un bias positivo. Se dovete utilizzare una confezione di reagente che è stata capovolta o agitata prima che abbia avuto la possibilità di depositarsi, dovrete verificarne le prestazioni eseguendo campioni in duplicato ai fini del controllo qualità dopo aver caricato la confezione sul Sistema. La calibrazione è specifica per i singoli lotti. Le confezioni di reagenti e i calibratori corrispondenti sono identificabili dal numero di lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Manipolare i campioni, calibratori e controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul Sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Dopo l uso, devono essere tempestivamente riportati a 2-8 C. In alternativa è possible utilizzarne un aliquota sufficiente ad una singola determinazione. I calibratori possono essere aliquotati in altri contenitori resi identificabili mediante le etichette con codice a barre fornite nel kit. 2 Pubb. n. GEM1095_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura Testo Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I controlli testosterone VITROS contengono 3 idonei livelli di testosterone (bassi, medi, elevati). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente all esecuzione di una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell Operatore del Sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell Operatore del Sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è Testosterone. L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio è Testo. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori. I risultati possono essere espressi come nmol/l o ng/dl. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. Procedura Il dosaggio per testosterone VITROS richiede 25 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per testosterone VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per testosterone VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del Sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul Sistema a questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul Sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione riposiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il Sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con un range di parametri di che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice basso o elevato LO o HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1095_IT 3

4 Testo ISTRUZIONI PER L USO Limiti della procedura Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 8. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (33,9 mmol/l), emoglobina (2,5 g/l) o bilirubina (85,5 µmol/l) interferiscono con questo dosaggio in ragione di meno del 10%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. I campioni contenenti 10 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 10%. Risultati non accurati possono derivare da terapia steroidea o da condizioni fisiologiche che provocano cambiamenti nei livelli delle sieroproteine. Elevati livelli di testosterone possono essere ricondotti ad un difetto del metabolismo steroideo che si discosta dall asse ipotalamo-ipofisi-gonadi. Valori attesi I singoli laboratori sono tenuti a confermare la validità degli intervalli indicati per la popolazione servita. A titolo indicativo, i seguenti intervalli (2,5 e 97,5 percentili) sono stati determinati da un campione di 120 individui maschi normali, d età compresa fra i 20 e i 49 anni, e di 40 individui maschi normali di oltre 50 anni: fra 4,56 nmol/l e 28,2 nmol/l e fra 2,49 nmol/l e 21,6 nmol/l rispettivamente. Un intervallo fra 0,198 nmol/l e 2,67 nmol/l è stato ottenuto su un campione di 99 donne con ciclo mestruale normale. Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di calibrazione del dosaggio del Testosterone VITROS è 0-75 nmol di testosterone/l (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con i campioni misurati tramite diluizione isotopica -gascromatografia/spettrometria di massa, ID-GC/MS). Le concentrazioni di testosterone vengono espresse in nmol/l o ng/dl. La conversione da un unità all altra si effettua mediante la seguente formula: Risultato in ng testosterone/dl = risultato in nmol testosterone/l x 28,84 Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio testosterone VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 138 campioni di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato andava da 0,313-73,6 nmol/l con il dosaggio testosterone VITROS a 0,191-86,0 nmol/l con il dosaggio del commercio: Dosaggio Testosterone VITROS = 0,922 x X - 2,25 nmol/l, con coefficiente di correlazione di 0,962. Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5-T2 9 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati di ciascuno dei 3 sieri di controllo liofilizzati sono stati dosati in 2 differenti occasioni ogni giorno per almeno 20 giorni. L esperimento è stato eseguito usando 2 lotti di reagenti differenti su Sistemi differenti. I dati presentati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Concentrazione Intra-dosaggio Intracalibrazione Intralaboratorio tipica nmol/l DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 2,01 0,063 3,1 0,143 7,0 0,137 7,0 9,66 0,224 2,3 0,545 5,6 0,498 5,2 52,7 1,34 2,5 2,62 4,9 2,47 4,8 * Quadratica media Intra-dosaggio: Precisione fra un duplica e l altro, con media ottenuta su tutte le repliche. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione infra-replica, fra una replica e l altra e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. 4 Pubb. n. GEM1095_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia Testo Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. La sensibilità del dosaggio Testosterone VITROS è inferiore a 0,03 nmol/l. Specificità Cross-reagente Concentrazione analizzata % Cross-reattività Androstenedione Trasferimento 50% 0,5 5α-Diidrotestosterone Trasferimento 50% 0,6 5β-Diidrotestosterone Trasferimento 50% 0,3 11β-Idrossitestosterone Trasferimento 50% 6,2 11-Chetotestosterone Trasferimento 50% 10,0 19-Nortestosterone Trasferimento 50% 3,6 Mesterolone Trasferimento 50% 0,3 Cortisolo 10 µmol/l 0,008 Danazolo 10 µmol/l 0,007 DHEA-3-solfato 10 µmol/l 0,010 Estradiolo 10 µmol/l 0,010 Epitestosterone 10 µmol/l 0,011 17α-Metiltestosterone 10 µmol/l 0,075 Progesterone 10 µmol/l 0,034 Bibliografia 1. Whitley, RJ et al. In Burtis CA & Ashwood ER (eds), Tietz Textbook of Clinical Chemistry. WB Saunders Company, Philadelphia: (1994). 2. Wang C & Swerdloff RS, Baillière s Clin Endocrinol Metab 6: (1992) Evaluation of testicular function. 3. Anttila L et al. ACTA Obstet et Gynecol Scand 73: (1994) Serum testosterone, androstenedione and luteinizing hormone levels after short - term medroxyprogesterone acetate treatment in women with polycystic ovarian disease. 4. Wilke TJ & Utley DJ. Clin Chem 33: (1987) Total Testosterone, Free Androgen Index, Calculated Free Testosterone, and Free Testosterone by Analog RIA Compared in Hirsute Women and in Otherwise-Normal Women with Altered Binding of Sex-Hormone-Binding Globulin. 5. Summers et al. Clin Chem 41. S73 (1995) Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4- Hydroxy Acetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminesence. 6. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR. J Clin Immunoassay 11: ) Specimen Processing Separator Gels: An Update. 8. Levinson SS. J Clin Immunoassay 15: (1992) The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. 9. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Order Code EP5-T2 (1992) Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices-Second Edition. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1095_IT 5

6 Testo ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1095_IT Versione 1.0

7 ISTRUZIONI PER L USO Revisioni Testo Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1095/101.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1095_IT 7

8 Testo ISTRUZIONI PER L USO Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1095_IT Versione 1.0