TRIPLO TESSUTO (FEGATO, RENE, STOMACO)

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Beata Vecchio
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1 QUADRI FLUOROSCOPICI NELLE MALATTIE AUTOIMMUNI D ORGANOD Brunetta Porcelli Dipartimento di Medicina Interna, Scienze Endocrino-Metaboliche e Biochimica Università degli Studi di Siena IMMUNOFLUORESCENZA INDIRETTA Rappresenta a tutt oggi un metodo analitico di fondamentale importanza nella ricerca di autoanticorpi correlati alla presenza di patologie autoimmuni d organo Bassano del Grappa, 7 ottobre 2009 PRINCIPALI SUBSTRATI UTILIZZATI PER GLI AUTOANTICORPI ORGANO SPECIFICI Triplo tessuto (fegato, rene, stomaco) TRIPLO TESSUTO (FEGATO, RENE, STOMACO) LKS: LIVER-KIDNEY KIDNEY-STOMACH Terzo inferiore di esofago scimmia Altri substrati ISTOLOGIA DEL FEGATO.. Lobulo epatico ISTOLOGIA DEL RENE.. Dotticino biliare Fessura di Kiernan Vena Arteriola Dotticino biliare Dotticino biliare Vena Vena centrale del lobulo Trabecole Remak di E REAZIONE FLUORESCENTE E REAZIONE FLUORESCENTE

2 ISTOLOGIA DELLO STOMACO.. E REAZIONE FLUORESCENTE ANTICORPI ANTI-MUSCOLO LISCIO (ASMA) Autoantigeni: actina, tubulina, vimentina, desmina, citocheratine. Si riscontrano nel 70-85% delle EAI 1. La positività ASMA dovuta alla presenza di anticorpi diretti verso la forma filamentosa dell actina (F-actina) sembra essere quella maggiormente specifica per EAI. ASMA-V ASMA G Pattern di tipo glomerulare Stomaco Stomaco

3 ASMA T Stomaco ANTICORPI ANTI-LKM Autoantigeni: citocromo P4502D6/P4502C9/UDPglucorosiltransferasi. Sono diretti contro i microsomi del fegato e del rene. In base all antigene bersaglio sono classificati in tre tipi chiamati anti- LKM1, 2 e 3. Gli anti-lkm1, associati nel 90% dei casi alla EAI 2, ne rappresentano il marcatore caratteristico. : fluorescenza non uniforme ma marcata solo a livello dei tubuli prossimali Stomaco: le cellule parietali gastriche risultano negative Fegato: fluorescenza intensa, fine e omogenea degli epatociti ANTICORPI ANTI-CITOSOL EPATICO TIPO 1 (LC-1) Autoantigene: formiminotransferasiciclodeaminasi. Riscontrati in circa il 50% dei pazienti con EAI-2. Nella maggior parte dei casi sono in genere associati a LKM1 che nella maggior parte dei casi copre la positività all IFI dell LC-1.

4 Fegato Fegato: fluorescenza più intensa nella zona periportale e meno intensa nella zona centro-lobulare. Il rene e lo stomaco sono negativi. A B ANTICORPI ANTI- LKM E ANTI-LC1 Gli anticorpi anti- LKM mostrano una fluorescenza intensa, fine e omogenea degli epatociti (A). Gli anticorpi anti- LC1 mostrano una fluorescenza intensa nella zona periportale (B). La zona centrolobulare è scarsamente o per nulla colorata. ANTICORPI ANTI-MITOCONDRIO (AMA) Autoantigeni: localizzati sulla membrana mitocondriale, classificati in diversi tipi indicati con le sigle da M1 a M9. Solo gli anticorpi anti- M2, anti-m4, anti-m8 e anti- M9 sono specifici per PBC e tra questi solo gli anti-m2 hanno rilevanza diagnostica essendo presenti ad alto titolo in quasi tutti i pazienti. : fluorescenza citoplasmatica di aspetto granulare interessante tutte le cellule tubulari ma più intensa a livello dell epitelio dei tubuli renali distali (più piccoli e di forma regolare rispetto a quelli prossimali). Stomaco: fluorescenza diffusa interessante sia le cellule parietali che le principali ANTICORPI ANTI - MITOCONDRI E ANTI- LKM Fegato: Fluorescenza di aspetto granulare AMA: fluorescenza citoplasmatica di aspetto granulare interessante tutte le cellule tubulari ma più intensa a livello dell epitelio dei tubuli renali distali (A). LKM: fluorescenza non uniforme ma marcata solo a livello dei tubuli prossimali (B). Solo gli AMA sono in grado di colorare anche le cellule parietali e principali dello stomaco. (A).

5 ANTICORPI ANTI-CELLULE PARIETALI GASTRICHE (PCA) Autoantigene: H + /K + -ATPasi gastrica presente sulla membrana delle cellule parietali gastriche. La presenza di PCA è altamente indicativa di anemia perniciosa. Sono inoltre rilevati in circa il 90% dei pazienti affetti da gastrite cronica autoimmune Stomaco: omogenea e diffusa colorazione del citoplasma delle cellule parietali. I nuclei e le cellule principali sono completamente negativi. Il rene il fegato sono negativi. ANTICORPI ANTI-MITOCONDRI E ANTI-PCA TERZO INFERIORE DI ESOFAGO SCIMMIA ISTOLOGIA DELL ESOFAGO ESOFAGO AMA: fluorescenza diffusa interessante sia le cellule parietali che le principali PCA: omogenea e diffusa colorazione del citoplasma solo delle cellule parietali ANTICORPI ANTI-ENDOMISIO (EmA) Autoantigene: l enzima transglutaminasi. Sono anticorpi estremamente sensibili e specifici (95-100%) per la malattia celiaca. Pattern reticolare a nido d ape identificabile nella muscolaris mucosae. Ab: IgA

6 ALTRI SUBSTRATI ANTICORPI ANTI-CELLULE INSULARI PANCREATICHE (ICA) Autoantigeni: Pancreas (anticorpi anti-cellule insulari pancreatiche, ICA) Surrene (anticorpi anti-corticale del surrene, ACA) Ipofisi di scimmia o di babbuino (anticorpi antiipofisi, APA) Esofago e vescica di scimmia (anticorpi anti-cute) Nervo di scimmia (anticorpi anti-mag) Cellule Hep-2 (AMA, anti-gp210, anti-sp100, anticentromero, anti-f actina ) Cellule intestinali di ratto/fibroblasti (anti-f-actina) VSM47 (F-actina) HEK-239 (anticorpi anti-acquaporina-4, AQP-4) Neutrofili (P-ANCA) Substrato: Pancreas scimmia di Ab: Ab: IgAGM Pattern: Fluorescenza da omogenea a granulare nel citoplasma di tutte le cellule delle isole di Langerhans. Substrato: Surrene di scimmia Zona Reticolata Ab: Ab: IgAGM Zona Fascicolata Pattern: Fluorescenza da granulare a omogenea nel citoplasma delle cellule di tutti e tre gli strati della corteccia del surrene Zona Midollare Zona Glomerulare componenti citoplasmatiche delle isole di Langerhans. Presenti nell nell 80% dei pazienti con diabete di tipo 1 Marker predittivo. Alto titolo = Elevato rischio di malattia ANTICORPI ANTICORTICALE DEL SURRENE (ACA) Autoantigene principale: 21idrossilasi (21-OH). Specificità elevata per la diagnosi di MA autoimmune. Marker predittivo. ANTICORPI ANTIGLICORPOTEINA MIELINICA (ANTI-MAG) Antigeni: proteine della membrana della guaina mielinica. Sono associati prevalentemente a neuropatie demielinizzanti, croniche, lentamente progressive.

7 ANTICORPI ANTI-F ACTINA Substrato: Nervo Suralis di scimmia Pattern: Fluorescenza striata ASMA rappresentano un gruppo eterogeneo di anticorpi che possono riconoscere diversi antigeni nel citoscheletro: actina, tubulina, vimentina, desmina, citocheratine. La positività ASMA dovuta alla presenza di anticorpi diretti verso la forma filamentosa dell actina (Factina) sembra essere quella maggiormente specifica per EAI. Substrato:cellule embrionali di aorta di ratto VSM47 Ab: IgG

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