Marcello Chiarotti, Sabina Strano Rossi. Istituto di Medicina Legale, Università Cattolica del S. Cuore, Roma

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1 APPLICAZIONE DI STANDARD MINIMI DI QUALITÀ DELLE PROCEDURE DIAGNOSTICHE IN TOSSICOLOGIA FORENSE Marcello Chiarotti, Sabina Strano Rossi Istituto di Medicina Legale, Università Cattolica del S. Cuore, Roma 07/11/2012 Torimo, ottobre novembre

2 QUALITA Garanzia della bontà del prodotto attraverso il controllo di tutte le fasi di lavorazione Dato analitico: dal prelievo del campione al rapporto di prova 2

3 Prelievo campione Processo analitico screening pretrattamento Fase strumentale - conferma Referto

4 Workplace Drug Testing: Aumento del numero delle strutture coinvolte nella domanda di diagnostica di laboratorio Esigenza di standardizzazione dei processi analitici per uniformare la qualità e l attendibilità del dato

5 Gestione del sistema Tracciabilità di ogni fase del processo Standardizzazione Assicurazione della qualità del dato analitico Sistema di qualità

6 STANDARD INTERNAZIONALI PUBBLICATI DALL INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) ISO 9001:2008 sistemi di gestione per la qualità ISO 17025:2005 requisiti generali per la competenza nei laboratori di prova e di calibrazione ISO particolari requisiti per la qualità e la competenza dei laboratori clinici

7 CERTIFICAZIONE ISO 9001 conformità del sistema qualità : Procedura attraverso la quale una parte terza concede assicurazione scritta (certificazione) che un prodotto, un processo o un servizio è conforme a specifici requisiti soddisfa automaticamente i requisiti ISO 9001 conformità ai requisiti ISO 9001 dimostra unicamente la conformità del sistema qualità, non la competenza nello svolgere le analisi ACCREDITAMENTO ISO (ACCREDIA) Procedura attraverso la quale un organismo autorevole concede il riconoscimento formale che un organismo o una persona è competente a svolgere specifici compiti

8 UNI CEI EN ISO IEC Requisiti generali per la competenza dei laboratori di prova e taratura Requisiti Gestionali L organizzazione del laboratorio Il sistema qualità Il controllo della documentazione Approvvigionamento Servizi al cliente Reclami Gestione delle attività/prodotti non conformi Miglioramento Verifiche ispettive interne 07/11/2012 8

9 UNI CEI EN ISO IEC Requisiti generali per la competenza dei laboratori di prova e taratura Requisiti Tecnici Il personale Il luogo di lavoro e le condizioni ambientali Apparecchiature Riferibilità delle misure (taratura) Campionamento Manipolazione degli oggetti da sottoporre a prova o taratura Metodi di prova e validazione dei metodi 07/11/2012 9

10 Requisiti del metodo Deve essere adatto allo scopo (e soddisfare le esigenze del cliente) Definire il campo di applicazione Idonea sensibilità Ricerca dei giusti indicatori

11 Validazione dei metodi Limite di determinazione e di quantificazione Specificità Ripetibilità Accuratezza Linearità Trascinamento Incertezza di misura

12 Incertezza di Misura Parametro associato al risultato di una misurazione che caratterizza la dispersione dei dati ragionevolmente attribuibili al risultato Risultato: Valore medio ± incertezza unità di misura 10 ± 0.2 ng/ml 07/11/

13 INCERTEZZA Considerare le fonti di incertezza Calcolare l incertezza composta Definire il grado di confidenza K che si vuole dare al risultato (la probabilità con cui il valore si avvicina al valore vero) Sottrarre l incertezza espansa 07/11/

14 Es. THC-COOH cut off 15 ng/ml Media concentrazioni = 25 ng/ml Incertezza calcolata = 1 ng/ml 25-2=23 >15 positivo Media concentrazioni = 16 ng/ml Incertezza calcolata = 1 ng/ml 16-2=14 <15 NEGATIVO Presenza di THC-COOH in concentrazione < cut-off 07/11/

15 Quali parametri utilizzare nella pratica per validare un metodo? 07/11/

16 con la conformità allo standard ISO 9001 ed ancor più con il riferimento allo standard ISO Affidabilità analitica migliorata Tracciabilità di tutte le fasi Organizzazione e razionalizzazione delle risorse Clima migliorato per aumentata percezione della qualità globale/ coinvolgimento operatori Motivazione al miglioramento 07/11/

17 MA NON E SUFFICIENTE La certificazione / accreditamento non entra nello specifico delle singole discipline non può quindi nel settore della tossicologia forense, denso di specificità culturali e tecnico-operative, essere da sola garanzia della correttezza di un dato analitico che proviene da valutazioni preliminari quali la Scelta del campione da analizzare e necessita delle conoscenze specifiche nel settore per dare una Corretta interpretazione del dato analitico 07/11/

18 TEMPI DI RILEVABILITÀ DELLE SOSTANZE URINA SANGUE - saliva CAPELLI mesi TEMPO (GIORNI) 07/11/

19 SCELTA DEL CAMPIONE DA ANALIZZARE DIPENDE DALLA FINALITA DELL ACCERTAMENTO Determinazione dell attualità d uso della sostanza sangue, saliva Determinazione dello stato di assuntore abituale/cronico urina, matrici cheratiniche Determinazione di comportamenti d abuso pregressi capelli 07/11/

20 . necessità di integrare i contenuti dello standard con aspetti più caratterizzanti dell analisi tossicologico forense, dalla scelta del campione biologico da analizzare alla interpretazione e refertazione dei risultati analitici 07/11/

21 INTERPRETAZIONE POSITIVITÀ PER MORFINA - URINE Presenza di morfina + O-6-monoacetilmorfina (Acetilcodeina) Morfina + Codeina >> assunzione di EROINA assunzione di CODEINA 07/11/

22 POSITIVITA PER AMFETAMINA/METAMFETAMINA Selegiline Famprofazone amfetamina/metamfetamina metamfetamina L-metamfetamina Parent drug famprofazone amfetamina/metamfetamina norselegiline Levo- Levo- 07/11/

23 LINEE GUIDA SAMHSA: Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs EWDT: European Laboratory Guidelines for Legally Defensible Workplace Drug Testing urine capelli fluido orale SOHT: Recommendations for Hair Testing in Forensic Cases SOFT/AAFT Forensic Toxicology Laboratory Guidelines Linee guida per i laboratori di analisi delle droghe d abuso con finalità tossicologico-forensi e medicolegali Commissione Qualità del GTFI 07/11/

24 AMBITO SPORTIVO Analisi antidoping (analisi tossicologico-forensi in ambito antidoping) coordinate dalla WADA Accreditamento obbligatorio ISO Accreditamento obbligatorio WADA Documenti tecnici prescrittivi per tutte le fasi operative 07/11/

25 STANDARDIZZAZIONE Per garantire l uniformità di trattamento (ad atleti di qualunque livello in qualsiasi parte del mondo) Vengono stabiliti requisiti minimi da raggiungere /rispettare 07/11/

26 REQUISITI MINIMI LABORATORIO Locali Strumentazioni Metodi analitici PERSONALE Formazione Aggiornamento continuo 07/11/

27 TECHNICAL DOCUMENTS Criteri di identificazione per dare una positività Criteri e limiti per i dati quantitativi Armonizzazione del metodo per EPO ed analoghi 19-Nor-steroidi Guida per la valutazione del rapporto T/E e del profilo steroidi endogeni Blood analytical requirements Catena di custodia del laboratorio e stesura del rapporto di analisi e della documentazione a supporto 07/11/

28 METODI ANALITICI MRPL (Minimum Required Performance Levels) NON sono dei CUT-OFFs! 07/11/

29 Minimum Required Performance Levels Limiti minimi di sensibilità 07/11/

30 METODI ANALITICI Criteri per un risultato di positività Maximum Tolerance windows for Relative Ion Intensities to Ensure Appropiate Uncertainty in Identification 07/11/

31 CRITERI DI IDENTIFICAZIONE Relative Abundance (% of base peak) EI-GC/MS CI-GC/MS; GC/MS n ; LC/MS; LC/MS n > 50% 10% (absolute) 25% to 50% 20% (relative) 5 to < 25% 5 % (absolute) < 5 50 % (absolute) s/n>3 per almeno 3 ioni GC RT < 1% o ± 0.2 minuti; LC RT < 2% o ±0.4 minuti 07/11/

32 CUT-OFFs e DECISION LIMITS FOR THE CONFIRMATORY QUANTIFICATION OF THRESHOLD SUBSTANCES Viene stabilita la massima incertezza di un metodo quantitativo dai risultati dei VEQ di tutti i laboratori e ci si aspetta che tutti i laboratori abbiano metodi quantitativi con un incertezza combinata non superiore a quella media 07/11/

33 DL 07/11/

34 SEQUENZA TIPICA DI INIEZIONE Bianco Campione da confermare Bianco Urina con aggiunto lo standard della sostanza/e da confermare 07/11/

35 COME GARANTIRE IL RISPETTO DELLE REGOLE? Proficiency testing obbligatori (a punti) Campioni civetta Mantenimento accreditamento Evidenza azioni correttive Ispezioni 07/11/

36 International Standard for Testing Istruzioni al medico prelevatore su come effettuare i controlli un controllo a sorpresa deve essere realmente a sorpresa Controllo visivo durante il prelievo, controllo di eventuale manomissione/adulterazione del campione Osservazione catena di custodia 07/11/

37 ALTRE PRESCRIZIONI Partecipazione ad Educational Studies Adesione ad un codice etico Scambio di informazioni (sharing of knowledge) 07/11/

38 ARMONIZZAZIONE TRA PARI Uniformare gli standard di qualità dei laboratori aderenti con regole condivise Mantenere una costante informazione sulle nuove tecniche analitiche Scambio culturale (nuove sostanze da ricercare) Definire criteri scientificamente validi per la ricerca delle sostanze di interesse Stesura di documenti prescrittivi per la validazione di metodi specifici per il settore 07/11/

39 Organizzare proficiency tests Organizzare educational studies su nuove sostanze e produrre reference materials. Creare un organismo forte che abbia voce in capitolo sugli aspetti che riguardano la tossicologia forense, al fine di poter eventualmente dialogare con l organismo accreditante italiano e formare degli auditor specializzati in questo settore. 07/11/

40 QUALE ORGANISMO PUÒ ENTRARE NEL MERITO SPECIFICO? Il GTFI ha le competenze necessarie per integrare le norme generali con linee guida, anche cogenti, riguardanti gli aspetti più caratterizzanti dell analisi tossicologico forense, dalla scelta del campione biologico da analizzare, ai criteri di positività e MRPL da adottare, alla interpretazione e refertazione dei risultati analitici 07/11/

41 QUALE ORGANISMO PUÒ SORVEGLIARE? Ente governativo super partes che fornisca un accreditamento specifico garantisca l adozione di standard minimi di qualità verifichi la conformità alle linee guida specifiche del settore organizzi proficiency testing obbligatori anche su matrici alternative (capelli/saliva) ISS? DPA? 07/11/

42 CERTIFICAZIONE/ACCREDITAMENTO (O COMUNQUE OPERARE IN CONFORMITÀ ALLE NORME) Affidabilità dei risultati analitici Organizzazione e ottimizzazione delle risorse Tracciabilità di tutte le fasi Miglioramento della qualità del lavoro, quindi del prodotto finale (referto) 07/11/

43 GRAZIE PER L ATTENZIONE! 07/11/