Resoconto attività anno 2009 e programma 2010

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1 LABORATORIO NAZIONALE DI RIFERIMENTO (LNR) PER IL CONTROLLO DELLA CONTAMINAZIONE VIRALE DEI MOLLUSCHI BIVALVI LABORATORIO ACCREDITATO SINAL: N 0665 Responsabile: Dr.ssa Luciana Croci Resoconto attività anno 2009 e programma 2010 ATTIVITÀ SVOLTA NELL ANNO ATTIVITÀ E COLLABORAZIONI INTERNAZIONALI 1.1 Collaborazione con il Laboratorio Comunitario di Riferimento (CEFAS/Weymouth) Partecipazioni a Commissioni e gruppi di studio internazionali 1.3 Partecipazione a saggi comparativi in circuiti internazionali 1.4 Partecipazione a progetti europei 2. ATTIVITÀ SVOLTA A LIVELLO NAZIONALE 2.1 Diagnostica 2.2 Fornitura di materiale di riferimento 2.3 Distribuzione di protocolli operativi 2.4 Organizzazione di Saggi comparativi 2.5 Aggiornamento e formazione professionale 2.6 Attività didattica corsi 2.7 Partecipazioni a Commissioni e gruppi di studio 3. ATTIVITÀ DI RICERCA 3.1 Descrizione 3.2 Pubblicazioni 3.3 Partecipazioni a Convegni PROGRAMMAZIONE ATTIVITA Consuntivo spese 2009 pag. 1 di 14

2 Attività svolta nell anno ATTIVITÀ E COLLABORAZIONI INTERNAZIONALI 1.1 Collaborazione con il Laboratorio Comunitario di Riferimento (CEFAS/Weymouth). Partecipazione al 8th Workshop of European National Reference Laboratories for monitoring bacteriological and viral contamination of bivalve molluscs organizzato dal CEFAS (UK), Laboratorio Comunitario di Riferimento (CRL) e tenutosi Palma de Majorca nei giorni maggio 2009 Le risoluzioni derivanti dalla discussione sono riportate nel sito Web ( Partecipazioni a Commissioni e gruppi di studio internazionali - Gruppo CEN/TC 275/WG6/TAG3 PCR for the detection of foodborne pathogens in food Roma 2-3 marzo 2009 ( L.Croci, E. Suffredini, F. Anniballi, D.De Medici) - Gruppo CEN/TC 275/WG6/TAG3 PCR for the detection of foodborne pathogens in food Rethimno (Creta) ottobre (E Suffredini) 1.3 Partecipazione a saggi comparativi in circuiti internazionali Determinazione di Escherichia coli e salmonelle nei molluschi, mediante metodica MPN, 2 distribuzioni da 2 campioni ciascuna effettuate da Health Protection Agency - Food EQA Scheme, saggi svolti a marzo e novembre. Determinazione di vibrioni (Vibrio cholerae e Vibrio parahaemolyticus) in molluschi bivalvi, 2 distribuzioni da 2 campioni ciascuna effettuate da Health Protection Agency - Food EQA Scheme, saggi svolti a marzo e novembre. Identificazione a caratterizzazione di patogenicità di isolati di Vibrio parahaemolyticus (ricerca dei geni tdh e trh) mediante PCR, 1 distribuzione inclusiva di 4 campioni effettuata dal CEFAS, saggi svolti a marzo. 1.4 Partecipazione a progetti europei - Progetto europeo BASELINE, VII Framework, iniziato a luglio 2009 Primo incontro per l avvio del progetto si è svolto nei giorni agosto 2009 a Bologna pag. 2 di 14

3 2. ATTIVITÀ SVOLTA A LIVELLO NAZIONALE 2.1 Diagnostica Accreditamento In applicazione della legislazione vigente ed al fine di fornire prestazioni e risultati di laboratorio qualificati e riconosciuti in ambito nazionale ed internazionale, questo LNR ha definito ed applica una politica della qualità conforme alla norma UNI CEI EN ISO/IEC ed ha conseguito l accreditamento con n da parte del SINAL (Sistema Nazionale Accreditamento Laboratori) per le seguenti prove: - Metodo orizzontale per la numerazione di E.coli B-glucuronidasi positivo (ISO/TS :2005) - Metodo orizzontale per la ricerca della salmonella (ISO 6579:2002/Cor.1:2004) Nel 2009 è stata richiesta l estensione dell accreditamento per la seguente prova: - Metodo per la ricerca di epatite A e Norovirus in alimenti mediante Real Time PCR La visita ispettiva del SINAL si è svolta in data dicembre 2009, il LNR è in attesa di accreditamento formale Presentazione dei Servizi Viene eseguita a titolo gratuito attività diagnostica su richiesta di strutture del SSN e altri laboratori pubblici (IZS, ARPA, Università ecc.), su materiali derivanti da attività di sorveglianza e controllo su alimenti e ambiente. Tali attività vengono eseguite secondo apposite Procedure Operative Standard (POS) e comprendono: - determinazione di virus enterici (HAV, Norovirus ed altri) in prodotti ittici mediante Real Time PCR - conferma della presenza di virus in campioni analizzati da altri laboratori del SSN - caratterizzazione dei virus evidenziati mediante amplificazione con PCR convenzionale e sequenziamento di regioni variabili adatte all identificazione genotipica (i.e. gene della polimerasi per i NoV e regione VP1/2A per HAV) e confronto con il database europeo REMEDIS. - Identificazione, caratterizzazione molecolare ed evidenziazione dei caratteri di patogenicità di ceppi di vibrioni patogeni (V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. vunificus ed altri) mediante protocolli specifici di PCR convenzionale, ERIC PCR e PFGE pag. 3 di 14

4 Attività diagnostica svolta Nel corso del 2009 sono state effettuate: Analisi Metodo N. richieste N. aliquote analizzate Tipologia di campioni esaminati Ricerca salmonella UNI EN ISO n.1 polpi congelati n.1 filetti pangasio congelati Ricerca di Norovirus Real Time PCR 2 41 n. 1 molluschi bivalvi GGI e GGII Ricerca di HAV Ricerca di Vibrio parahaemolyticus tossigeno Real Time PCR ed eventuale conferma infettività su colture cellulari FDA modificato ed Fornitura di materiale di riferimento Sono stati forniti i seguenti materiali di riferimento a: IZS della Sardegna, sez. di Sassari HAV ceppo HM175/18f, clone citopatico B (ATCC VR-1402) n. 1 mitili 6 41 n.1 vongole n.1 mitili n.3 telline n.1 mitili 1 5 n. 1 filetti pangasio congelati Università di Bologna sez. di Cesenatico HAV ceppo HM175/18f, clone citopatico B (ATCC VR-1402) Controlli positivi per la ricerca dei NoV sotto forma di sospensioni fecali contenenti virus di genogruppo II IZS della Liguria, Piemonte e Valle d Aosta, sez. di La Spezia Controlli positivi per la ricerca dei NoV sotto forma di sospensioni fecali contenenti virus di genogruppo II 2.3 Distribuzione di protocolli operativi Su richiesta del Ministero del Lavoro, della Salute e delle Politiche Sociali (lettera del 3 agosto 2009) è stato elaborato e distribuito a tutti i Laboratori periferici che svolgono controlli ufficiali sui molluschi eduli lamellibranchi il seguente protocollo sperimentale: - Determinazione qualitativa di Norovirus (GI e GII) ed epatite A (HAV) in molluschi bivalvi mediante Real Time PCR pag. 4 di 14

5 2.4 Organizzazione di Saggi comparativi In questo periodo sono stati svolti stages presso questo LNR per l acquisizione delle metodica di Real Time PCR per la determinazione di virus enterici (NoV ed HAV) distribuita per il personale dei Laboratori che ne hanno fatto richiesta (vedi punto 2.6.) Quando i laboratori del SSN avranno acquisito la metodica e saranno pronti per l utilizzo, si provvederà all organizzazione di ring tests. 2.5 Aggiornamento e formazione professionale Training rivolti al personale del SSN Acquisizione di tecniche per la determinazione di virus enterici mediante Real Time PCR: Caterina Salzano (IZS Mezzogiorno) Rosita Annarummo (Università di Napoli Federico II) Sara Ciulli (Università di Bologna) Antonella Canu (IZS Sardegna) Caterina Fattaccio (IZS Sardegna) Ospitalità a studiosi Sono stati ospitati presso la struttura del LNR: Carmen Lopez Joven (IRTA research aquaculture institute Tarragona Spagna) per lo studio e la caratterizzazione di vibrioni patogeni di diversa origine geografica dr. Iole Ventrone (Università Federico II di Napoli) per l esecuzione di saggi finalizzati alla ricerca mediante real-time PCR dei virus enterici (HAV, NoV, etc.) nei molluschi 2.6 Attività didattica corsi Università di Napoli Scuola di Specializzazione Virus enterici trasmessi da alimenti 26 e 27 gennaio 2009 (L Croci ) Università di Napoli Scuola di Specializzazione Virus enterici trasmessi da alimenti 6 giugno 2009 (E. Suffredini) Lezione sul tema Introduzione alla Microbiologia degli Alimenti corso di Microbiologia, Laurea in Scienze Biologiche, a.a Università di Roma La Sapienza, Roma, 30 novembre (E. Suffredini) Lezione sul tema Problemi igienici legati alla presenza di Vibrionaceae nei prodotti della pesca Laurea Specialistica in Scienze della Nutrizione Umana a.a Università di Roma Tor Vergata, Roma, 5 febbraio (E. Suffredini) Laurea Specialistica in Scienze della Nutrizione Umana a.a Università di Roma Tor Vergata, Roma. Lezioni sul tema Tossine algali, 27 marzo (L.Cozzi) pag. 5 di 14

6 Corso di alta formazione in Sicurezza e qualità degli alimenti e delle bevande: valutazione, gestione e comunicazione del rischio A.A.2008/2009 V Modulo La qualità ed i controlli di qualità:autocontrollo, certificazione ed accreditamento. Lezione L assicurazione di qualità nel laboratorio di microbiologia degli alimenti: norma UNI CEI EN ISO/IEC Università La Sapienza 9 luglio 2009 (L.Croci) Master di I livello Sicurezza Alimentare: Sistemi di gestione, tecnologie produttive e strumenti di controllo Modulo:Tecnologie di produzione nel settore alimentare produzione primaria. Lezione I molluschi bivalvi Frosinone 7 luglio 2009 (L.Croci) Modulo: Contaminanti biologici, attività di campionamento ed analisi in campo microbiologico. Lezione Piani di campionamento e controllo Frosinone 19 novembre 2009 (L.Croci) Modulo: Analisi dei pericoli e gestione dei rischi da contaminanti chimici,fisici e biologici ( corrette prassi igieniche, programmi prerequisito e sistema HACCP). Lezione Corrette prassi igieniche e HACCP nella filiera dei molluschi Frosinone 10 dicembre (L.Croci) 2.7 Partecipazione a Commissioni e gruppi di lavoro Partecipazione a: - Commissione Codex Pesci e prodotti della pesca Ministero dell Agricoltura, Roma 21 settembre 2009 (L. Croci, L. Cozzi) - FVO general mission (DG SANCO/815/2009) Riunioni presso il Ministero della Salute, 20 e 23 aprile 2009 (Croci) - Valutazione Manuali buona prassi igienica (Vongola e molluschicoltura)- riunioni presso Ministero della Salute 21 maggio, 6 ottobre, 5 novembre 2009 (L. Croci) - Codex Alimentarious Gruppo Igiene 29 Ottobre 2009 (Croci) - Codex Alimentarious - Gruppo di Lavoro sul Pesci e prodotti della pesca 21 settembre (L. Croci) - Riunione Annuale dei Laboratori Regionali incaricati del controllo delle Biotossine Marine. Ministero della Salute,15 dicembre (L. Cozzi) 3. ATTIVITÀ DI RICERCA 3.1 Descrizione Il LNR sviluppa, promuove e coordina attività di ricerca relative alle problematiche microbiologiche dei prodotti della pesca, partecipando a progetti sia a livello europeo che nazionale. In particolare: - studi sull influenza di diversi fattori ambientali e di processi tecnologici di produzione degli alimenti sul comportamento e la sopravvivenza di diversi microrganismi patogeni, quali salmonella, vibrioni virus enterici ed altri. pag. 6 di 14

7 - Sviluppo di metodologie avanzate (biosensori, PCR classica, Real time PCR) per la determinazione di patogeni emergenti e ri-emergenti nei prodotti della pesca - Studi sulla prevalenza della contaminazione virale in molluschi di produzione nazionale. - Caratterizzazione molecolare (mediante sequenziamento, PFGE, ERIC, PCR ecc.) ed analisi filogenetica di diversi patogeni. Nel corso del 2009 sono stati ultimati gli studi per la messa a punto di un metodo di colony hybridization per la determinazione quali-quantitativa di V. parahaemolyticus, che mediante l utilizzo di sonde molecolari specifiche per i geni di patogenicità (tdh e trh) e per sequenze geniche specie-specifiche (toxr), consente la numerazione simultanea di tale microrganismo totale e patogeno. Il metodo è attualmente al vaglio del gruppo CEN/TC 275/WG6/TAG3 PCR for the detection of foodborne pathogens in food al fine di essere inserito tra i metodi ISO di riferimento. E stato inoltre portato a termine uno studio in collaborazione con la Food and Drug Administration (dr. Angelo De Paola) e con numerosi partner europei (CEFAS UK, IFREMER Francia, Università di Santiago de Compostela Spagna) ed extra-europei (FDA USA, CFIA Canada, JNIHS Giappone, KVAFSU India, SARDI Australia, INTA Chile, ERS CSC Nuova Zelanda) per la definizione della performance dei protocolli di PCR per la ricerca, identificazione e caratterizzazione di V. parahaemolyticus adottati in ambito internazionale. In collaborazione con l istituto IRTA (Institute for Food and Agricultural Research and Technology) di Terragona, Spagna è stato intrapreso uno studio finalizzato alla caratterizzazione di patogenicità e alla caratterizzazione genetica di ceppi di V. parahaemolyticus e V. vulnificus isolati da prodotti ittici di origine spagnola ed italiana. Per quanto riguarda la problematica relativa alla presenza di virus enterici nei molluschi bivalvi,in collaborazione con l Università di Napoli Federico II, è stato intrapreso uno studio finanziato dalla Regione Campania per formulare un quadro conoscitivo dello status microbiologico delle aree di produzione del Litorale Domizio, del Golfo di Napoli e di quello di Salerno. A tale scopo è stato messo in atto un piano di campionamento con prelievi settimanali nella diverse aree, corredato di rilevazioni dei parametri ambientali e fisico-chimici nelle aree di produzione (temperatura delle acque, ph, salinità, correnti, piovosità) e di indagini analitiche rispetto alla contaminazione batteriologica e virale (HAV, NoV, enterovirus). Complessivamente nel periodo in oggetto sono stati effettuati 85 campionamenti, rilevando la presenza di NoV in circa il 30% dei casi. Contemporaneamente è stata verificata la capacità di due metodi di Real Time PCR, il primo derivante dal protocollo sperimentale proposto dal gruppo di studio europeo CEN/TC 275/WG6/TAG4 Detection of viruses in food e l altro un kit commerciale proposto dalla Argene, di rilevare differenti varianti genotipiche dei NoV A tale scopo è stato utilizzato il Norovirus Reference Panel (NRP), cortesemente messo a disposizione dall Istituto Nazionale per la Sanità Pubblica e l Ambiente olandese (RIVM, Rijksinstituut voor Volksgezondheit en Milieu). Il Norovirus Reference Panel include i tre genogruppi (RNA sintetico) che hanno tropismo per l uomo (GI, GII e GIV) con diversi genotipi ( tab.6); i risultati della prova sono riportati nella tabella 7. pag. 7 di 14

8 Tab. 6 Norovirus Reference Panel (NRP) Tab. 7. Risultati ottenuti con i due metodi di Real Time PCR in esame su Norovirus Reference Panel Norovirus Reference Panel (NRP) GGI Real Time PCR (Ct) Kit commerciale (Ct) GGII Real Time PCR (Ct) Kit commerciale (Ct) GI.1 20,39 31,04 GII.1 12,77 14,97 GI.2 W 17,09 - GII.2 12,04 34,11 GI.2 S 16,75 - GII.3 14,14 - GI.3 15,77 - GII.4 12,46 14,19 GI.4 15,08 - GII.6 13,31 33,23 GI.5 33,60 - GII.7 17,76 15,77 GI.6 17,11 - GII.10 11,16 13,56 GI.7 12,60 - GIIb 11,17 13,01 GI ,84 - GIIc 12,67 14,81 GIV 33,19 29,23 GIV 26,44 29,23 I risultati ottenuti dimostrano la minore efficacia del kit commerciale nell evidenziare NoV GI, mentre entrambi i metodi sono stati in grado di rilevare il NoV G IV. Essendo però le suddette prove effettuate su RNA sintetico si è ritenuto necessario confermare il risultato analizzando campioni naturalmente contaminati. A tale scopo sono stati utilizzati 85 campioni di mitili provenienti da diverse aree di allevamento della regione Campania. Di questi 31 campioni sono risultati positivi per presenza di NoV (tab 8) entrambi i metodi utilizzati hanno mostrato una capacità equivalente di evidenziare i virus presenti, soltanto nel 5,8% dei casi si sono avuti risultati discordanti, la differenza non è risultata statisticamente significativa (test di MacNemar). Dieci dei campioni analizzati sono risultati contaminati sia da NoV GI che GII, essendo i due genotipi sempre contemporaneamente presenti non è stato possibile valutare eventuali differenze tra i due metodi nell individuare NoV GI su campioni naturalmente contaminati. pag. 8 di 14

9 Occorre comunque sottolineare che il metodo basato sull applicazione di un kit commerciale, a fronte di una maggiore praticità e sensibilità, presenta tuttavia limitazioni per lo più riferibili alla necessità intrinseca al metodo stesso di intervento manuale dell operatore, che minimizza quindi quelle garanzie di oggettività per lo più caratterizzanti i metodi molecolari. Tab 8. Campioni di molluschi analizzati mediante i due metodi di Real Time PCR e risultati positivi per presenza di NoV GI e GII Commercial Kit CEN Real Time PCR Samples Area N. NoV GI+GII NoV GI NoV GII Pos/neg pos/neg Ct±DS pos/neg Ct±DS 6 Depuration centre ,65±1, ,64±0,26 7 B ,89±1, ,92±0,29 8 B ,72±1, ,45±0,47 9 B ,63±0, ,58±0,13 10 B ,59±0, ,29±0,27 11 A ,69±1, ,15±0,31 12 A ,32±1, ,03±0,41 13 A ,64±0, ,22±0,60 14 A ,10±0, ,83±0,39 16 A , ,40±1,65 25 A ,00-45,00 29 A , ,46±0,12 35 B , ,80±0,57 36 B , ,42±0,75 37 B , ,45±2,49 45 B , ,02± n.d. 47 B ,66 n.d. + 32,06±0,96 48 B , ,52±0,52 49 B ,00-45,00 54 B , ,15 n.d. 55 B , ,28 n.d. 56 B , ,30±0,23 57 B , ,64±0,60 58 B , ,29±1,08 59 B , ,61±0,55 60 B , ,50±0,67 61 B , ,99±0,55 62 B , ,71±0,23 63 B , ,17±0,40 64 B , ,25±0,88 65 B , ,89±0,40 pag. 9 di 14

10 3.2 Pubblicazioni G. Volpe, E. Cotroneo, D. Moscone, L.Croci, L. Cozzi, G. Ciccaglioni, G.Palleschi A bienzyme electrochemical probe for flow injection analysis of okadaic acid based on PP2A inhibition. An optimisation study. Analytical Biochemistry, 385: M. Miraglia, H.J.P. Marvin, G.A. Kleter, P. Battilani, C. Brera, E. Coni, F. Cubadda, L. Croci, B. De Santis, S. Dekkers, L. Filippi, R.A. Hutjes My. Noordam, M. Pisante, G. Piva, A. Prandini, L. Toti, G. van den Born, A. Vespermann Climate Change and Food Safety: an Emerging Issue with special focus on Europe. Food and Chemical Toxicology 47: A Dalmasso, F. La Neve, E.Suffredini, L.Croci, L.Serracca, M.T.Botero, T.Civera Development of a PCR assay targeting the rpoa gene for the screening of Vibrio genus. Food Anal. Meth. 2: S.Di Pasquale, M. Paniconi, D. De Medici, E. Suffredini and L.Croci Duplex Real Time PCR for the detection of hepatitis A virus in shellfish using Feline Calicivirus as A process control. J.Virol. Meth. 163: S. Montieri, E.Suffredini, M. Ciccozzi and L. Croci Phylogenetic and evolutionary analysis of Vibrio parahaemolyticus and Vibrio alginolyticus isolates on the basis of toxr gene sequence. Res Microb. (in press) 3.3 Partecipazioni a Convegni (Relazioni e Poster) Relazioni: M.N. Losio, L. Croci et al. Tipizzazione di Norovirus in matrici alimentari. Convegno Norovirus: un virus emergente organizzato da A.O. Polo Universitario L.Sacco Milano L.Croci, E. Suffredini et al. Evaluation of NoV contamination of mussels from Campania region using two Real Time PCR methods. 8th Workshop of NRLs for bacteriological and viral contamination of bivalve molluscs Palma de Majorca 12th-14th May 2007 L. Croci, M. N. Losio, G. Arcangeli, T. Pepe, E.Pavoni, C. Magnabosco, I. Ventrone, E. Suffredini Survey of enteric viruses presence in seafood products in Italy ( ). Conference Handbook of 7th International Conference on Molluscan Shellfish Safety. Nantes June 2009 Pepe T., Ventrone I., Suffredini E., Ceruso M., Croci L., Anastasio A. Applicazione di un protocollo one-step real-time RT-PCR per la ricerca di Norovirus in molluschi bivalvi raccolti e commercializzati nella regione Campania. XIX Convegno AIVI, Perugia, 24, 25, 26 Giugno 2009 pag. 10 di 14

11 L.Croci Patogeni indigeni delle acque: i vibrioni. 37 Congresso Nazionale della Società Italiana di Microbiologia. Torino ottobre. Poster Elisabetta Suffredini, Loredana Cozzi; Luciana Croci Colony hybridization method for the simultaneous enumeration of total and pathogenic V.parahaemolyticus in shellfish. Conference Handbook of 7th International Conference on Molluscan Shellfish Safety June Nantes Angelo De Paola, Viviana Cachicas, Angela Cornelius, Luciana Croci, Romilio Espejo, DominiqueHervio-Heath, Indrani Karunasager, Yukiko Kudo, Jeffery Krantz, Jennifer Liu, Tom Madigan, Jamie Martinez-Urtaza, Rachel Rangdale, Elisabetta Suffredini and Jessica L. Jones Evaluation of International PCR Method Performance for Detection of Vibrio parahaemolyticus. Conference Handbook of 7th International Conference on Molluscan Shellfish Safety June Nantes Loredana Cozzi, Gianni Ciccaglioni, Elisabetta Suffredini, Luciana Croci Direct plate hybridization method for enumeration of.v. parahaemolyticus and V. vulnificus in experimentally contaminated mussels during depuration treatment Conference Handbook of 7th International Conference on Molluscan Shellfish Safety June Nantes L.Lanni, L.Agazzi, E.Suffredini, G. Migliore, S.Amiti, F.Di Giambernardino, M.Cortese, L. Alessandrini, L.Croci. An integrated strategy for the classification of Donax spp. Harvesting area in Lazio Region to control the bacterial and viral contamination. Conference Handbook of 7th International Conference on Molluscan Shellfish Safety. Nantes June 2009 E. Suffredini, L.Cozzi, L.Croci. Enumeration of total and pathogenic V.parahaemolyticus in shellfish by colony hybridization. Panhellenic Scientific Congress on Biotechnology and Food Technology.Creta ottobre 2009 Lopez-Joven C., RoqueA., Suffredini E., Cozzi L. and Croci L. Molecular characterization of pathogenic Vibrio strains from different sources VIBRIO The third Conference on the Biology of Vibrios. Rio de Janeiro (Brazil) 4-6 November 2009 L.Croci, L. Cozzi, E. Suffredini, S. Marcheggiani, C. Puccinelli, L. Mancini, FA Aulicino Marine emerging pathogens: need and tool ISS 9-11 dicembre 2009 pag. 11 di 14

12 PREVISIONE DI ATTIVITA PER L ANNO 2010 Attività a livello Comunitario Per il 2010 si prevede di mantenere gli stessi standard di attività dell anno precedente descritti nel presente documento. Si prevede quanto di seguito riportato nei vari settori di attività: Eventi Organizzazione, in collaborazione con il LNR per le contaminazioni batteriologice dei molluschi di Ancona, di una riunione con i rappresentanti dei Laboratori del SSN che effettuano controlli ufficiali e attività di classificazione delle aree di produzione dei molluschi bivalvi con la partecipazione del Ministero della Salute, da tenersi ad Ancona il giorno 9 febbraio 2010 Partecipazione al 8th Workshop of European National Reference Laboratories for monitoring bacteriological and viral contamination of bivalve molluscs che si terrà ad Ancona nei giorni maggio 2010 Organizzazione di saggi comparativi Verranno avviate attività, quali produzione di controlli positivi mediante plasmidi, standardizzazione di sospensioni virali, al fine di organizzare saggi comparativi con la partecipazione dei laboratori del SSN che effettuano la determinazione di virus enterici sui prodotti della pesca mediante Real Time PCR. Formazione Si manterrà la disponibilità per l effettuazione di training pratici per operatori del SSN interessati al rilevamento di virus enterici (HAV e Norovirus) e vibrioni patogeni in prodotti della pesca mediante metodi di biologia molecolare. Consulenza Questo LNR si farà carico di collaborare con il Ministero della Salute o altri Laboratori del SSN, sia per svolgere indagini relativamente a problemi che possono emergere in futuro sul territorio nazionale relativi al settore di interesse sia per avviare studi per la valutazione della prevalenza di virus enterici e vibrioni patogeni nei molluschi di origine italiana, come richiesto anche a livello comunitario pag. 12 di 14

13 Consuntivo spese 2009 Le spese sostenute per supportare l attività del LNR hanno riguardato l estensione dell accreditamento, il personale, i materiali di consumo e l ammortamento delle attrezzature per tali attività. Il dettaglio delle spese è riportato nelle tabelle 1 e 2. Per quanto riguarda i Ricavi, LNR esegue a titolo gratuito le prestazioni diagnostiche richieste da strutture del SSN e altri laboratori pubblici (Università, ARPA). A titolo gratuito sono anche la fornitura di materiali di riferimento. Mentre l attività di revisione e ripetizione di analisi e regolamentata prevede il pagamento di una tariffa da parte delle Ditte interessate, che viene gestito a livello centrale dagli uffici amministrativi dell ISS. I fondi necessari a condurre questa attività derivano dal finanziamento istituzionale del Dipartimento di Sanità Pubblica Veterinaria e Sicurezza Alimentare dell Istituto Superiore di Sanità e da fondi ottenuti da progetti di ricerca nazionali e comunitari su tematiche affini a tali attività. Tabella 1. Personale impiegato nelle attività istituzionali del LNR Personale (Nominativo) Qualifica Tipologia di contratto Attività svolta Costo medio annuo % utilizzo Costo Croci Luciana Primo Dipendente Dirigente Ricercatore Cozzi Loredana Ricercatore Tempo Determinato Gestione pratiche; analisi batteriologiche (metodi colturali e molecolari); colture cellulari Suffredini Elisabetta Ciccaglioni Gianni Claribel Santana CTER Ricercatore Tempo Determinato Co.co.co/Te mpo determinato Biologa molecolare: analisi batteriologiche e virali Referente per la qualità; analisi batteriologiche OPTER Co.co.co Lavaggio e sterilizzazione vetreria Totale spese personale: pag. 13 di 14

14 Tabella 2. Ammortamento attrezzature, materiali di consumo, spese per ring test, accreditamento Voce Costo Ammortamento attrezzature Contratti manutenzione Terreni microbiologia 2000 Reagenti biologia molecolare 5000 Partecipazione ring test/ Accreditamento Totale spese: pag. 14 di 14