Il pezzo operatorio: conservazione perfetta per una diagnosi ottimale: dalla sala riduzione al vetrino. A. Marazzi L. Annaratone

Transcript

1 + Il pezzo operatorio: conservazione perfetta per una diagnosi ottimale: dalla sala riduzione al vetrino A. Marazzi L. Annaratone

2 + Dalla sala chirurgica all AP Trasferimento del pezzo chirurgico, conservato sottovuoto, accettazione e conservazione a 4 C fino alla riduzione

3 + Tracciabilità del pezzo operatorio in AP Monitoraggio delle fasi di lavorazione dalla sala riduzioni fino alla consegna dei preparati al patologo Tesserino Operatore

4 + Tracciabilità del pezzo operatorio in AP Codici etichette Codice su RICHIESTA Codice su contenitore: tappo e BARATTOLO!!!

5 + IMPORTANZA della FASE DI RIDUZIONE del pezzo chirurgico Sala Chirurgica Anatomia Patologica Riduzione Cruciale per: perfetta fissazione; valutazione dei margini chirurgici; tumor staging. Biobanking Deve essere effettuata rapidamente, non oltre 1h dall intervento, se il tessuto giunge in AP: fresco a temperatura ambiente oppure in formalina a temperatura ambiente

6 + RIDUZIONE del pezzo chirurgico INTERVENTO CHIRURGICO TESSUTO CONSERVAZIONE SOTTOVUOTO ABBASSAMENTO DELLA TEMPERATURA, CONSERVAZIONE E TRASPORTO A 4 C RIDUZIONE TISSUE BANKING (-80 C) FISSAZIONE IN FORMALINA INCLUSIONE IN PARAFFINA ANALISI DI ESPRESSIONE GENICA

7 + STANDARDIZZAZIONE della RIDUZIONE Sistema Macropath in sala riduzioni

8 + Sistema Macropath al microscopio

9 + Superior Lateral Max dimension Medial Lateral radial block Inferior Valutazione dei MARGINI. Riduzione del pezzo. Ancoraggio dei livelli a supporto di carta FISSAZIONE

10 + L immersione di un grosso pezzo chirurgico in formalina NON permette la fissazione del tessuto: 1 mm 1 mm 1 mm

11 + Tempo di penetrazione della formalina mm tempo 5 mm di spessore Tempo di fissazione: circa 3 ore

12 + <5mm <5mm <5mm <5mm <5mm <5mm <5mm <5mm h Penetrazione della formalina e fissazione del tessuto sono completate

13 + Importanza della FISSAZIONE Fissazione Perfetta fissazione necessaria per ottenere una perfetta istologia

14 + PROCEDURE PRE-ANALITICHE IN ANATOMIA PATOLOGICA 72 Anatomia Patologica Fissazione VARIABILE TEMPO (ORE) VARIABILE TEMPERATURA ( C)

15 + TEMPO DI FISSAZIONE Dopo la riduzione del tessuto in sezioni dello spessore di circa 5 mm, 24 ore di fissazione in formalina a temperatura ambiente sono adeguate per una buona istologia RNA può essere alterato

16 + INNOVAZIONE Formalina a 4 C per 24h 95% etanolo a 4 C per 2h

17 + Colon cancer Fissazione tradizionale Fissazione a 4 C

18 + Breast cancer Fissazione tradizionale Fissazione a 4 C

19 + La fissazione a freddo: - permette di ottenere frammenti di RNA fino a 660 bp - presenta caratteristiche istologiche ed immunoistochimiche comparabili con quelle della fissazione tradizionale

20 + Valutazione della conservazione dell RNA dopo 2 ANNI, in tessuti fissati con il protocollo di Cold-Fixation: MW A- 0 A- 2 B- 0 B- 2 C- 0 C- 2 CTRL+ CTRL - RT-PCR per valutare l espressione di CK-20 in casi di carcinoma del colon (500bp). Campioni: A- 0 RNA estratto nell anno 2010 A- 2 RNA estratto nell anno 2012 B- 0 RNA estratto nell anno 2010 B- 2 RNA estratto nell anno 2012 C- 0 RNA estratto nell anno 2010 C- 2 RNA estratto nell anno 2012

21 + PROCEDURE PRE-ANALITICHE IN ANATOMIA PATOLOGICA Riduzione Inclusione in paraffina Taglio

22 + Tracciabilità: riduzione del pezzo

23 + Tracciabilità: riduzione del pezzo

24 + Inclusione del tessuto campionato Centralina di inclusione

25 + Inclusione del tessuto campionato

26 + Inclusione del tessuto campionato

27 + Taglio del campione per istologia

28 + Taglio del campione per istologia Importanza dello spessore della sezione istologica

29 + Taglio del campione per istologia Bagnetto per la raccolta delle sezioni istologiche

30 + Taglio del campione per istologia

31 + La colorazione del tessuto Coloratore automatico

32 + La colorazione del tessuto

33 + Consegna dei preparati al patologo Creazione del caso ed assegnazione al patologo

34 + Comunicazione tra patologo e tecnico di laboratorio