CK-MB. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti CK-MB

Transcript

1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti CK-MB CK-MB Impiego Per la misura in vitro delle quantità di CK-MB nel siero e plasma (EDTA o eparina) umani. Compendio e spiegazione del dosaggio La creatinachinasi (CK) è l enzima chiave dell energia del metabolismo nei muscoli che catalizza la fosforilizzazione reversibile della creatina. Questo enzima dimerico ha due subunità attive, M e B, che, associate, formano tre isoenzimi, CK-MM, CK-MB e CK-BB. CK-MM si trova soprattutto nel muscolo dello scheletro e la CK-BB nel cervello. La CK-MB si trova soprattutto nel muscolo cardiaco costituendo circa il 10-40% del CK del miocardio 1,2. La bassa concentrazione del CK-MB nel siero normale e nei tessuti non cardiaci è alla base del suo uso, ampiamente accettato, come indicatore diagnostico di un danno cardiaco. Una danno al miocardio causa un rilascio transitorio di CK-MB in circolo. Il CK-MB aumenta con un picco tra 12 e 24 ore, per poi ritornare a livelli normali entro ore 3-6. Questo caratteristico modello di andamento temporale ha un significato diagnostico per l AMI. Circa il 98% dei pazienti con AMI mostra elevati livelli di CK-MB nel siero, mentre solo il 3% dei pazienti non-ami mostra livelli anomali di CK-MB 6. Principi della procedura Il dosaggio VITROS CK-MB è eseguito utilizzando la confezione di reagenti VITROS CK-MB e i calibratori per CK-MB dei prodotti per Immunodiagnostici VITROS sul Sistema immunodiagnostico VITROS. E utilizzata una tecnica immunometrica che implica una reazione simultanea del CK-MB presente nel campione con un anticorpo biotilinato (monoclonale di ratto anti-ck- BB) e marcato con perossidasi da rafano (HRP)-e anticorpo coniugato (monoclonale di ratto anti-ck-mb). Il complesso di antigene ed anticorpo viene catturato dalla streptavidina nei pozzetti, mentre le sostanze non legate vengono eliminate tramite lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 7. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta prolungandone l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è direttamente proporzionale alla concentrazione di CK-MB presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale potenzialmente infettivo Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite di tipo B, HCV, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es.direttiva M29 del NCCLS 8 ). AVVERTENZA: Contiene Kathon Il reagente coniugato contenente del Kathon. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. R52/53: Nocivo per gli organismi acquatici, può provocare a lungo termine effetti negativi per l ambiente acquatico. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1300_IT 1

2 CK-MB ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, legante 3 ng biotina/pozzetto). 8,4 ml di reagente coniugato (HRP-monoclonale di ratto anti CK-MB legante 344,9 ng CK-MB/mL) in soluzione tamponata con agente antimicrobico. 8,4 ml di reagente anticorpo biotinilato (biotina monoclonale di ratto anti-ck-bb legante 344,9 ng CK-MB/mL) in soluzione tamponata con agente antimicrobico. NOTA: Contiene albumina da siero bovino, alfa e gamma globulina bovina e agente antimicrobico. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica, oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per CK-MB (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione B, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti Le Confezioni di Reagenti per Prodotti Immunodiagnostici VITROS contengono reagenti liquidi omogenei che non devono essere agitati né mescolati prima di essere caricati sul sistema. Come tutte le soluzioni per dosaggi immunologici a base di proteine, una manipolazione scorretta della confezione di reagente può provocare la formazione di schiuma sulla superficie del reagente stesso. La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per CK-MB VITROS vengono forniti liofilizzati. Conservare i calibratori integri a -20 C. Non usare oltre la data di scadenza. Ricostituire con 1 ml di acqua distillata. Dopo la ricostituzione conservare per un massimo di 4 settimane a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero e plasma (EDTA o eparina). Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni dovrebbero essere completamente separati da tutto il materiale cellulare. In caso contrario si potrebbero ottenere elevati falsi positivi. I campioni di siero o plasma possono essere conservati fino ad un massimo di 5 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare la conservazione dei campioni diluiti. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Un confronto eseguito tra valori ottenuti con il dosaggio VITROS CK-MB usando provette per siero, plasma eparina e plasma EDTA ha fornito le seguenti correlazioni: Plasma eparina = 0,7 x Siero Plasma EDTA = 0,6 x Siero Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 9. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura, evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. Se le Confezioni di Reagenti VITROS vengono capovolte o agitate, piccole quantità di schiuma sottile possono risultare impossibili da rilevare dal Sistema VITROS. Le Confezioni di Reagenti contenenti una schiuma sottile che non viene rilevata possono mostrare un bias negativo. Se dovete utilizzare una confezione di reagente che è stata capovolta o agitata prima che abbia avuto la possibilità di depositarsi, dovrete verificarne le prestazioni eseguendo campioni in duplicato ai fini del controllo qualità dopo aver caricato la confezione sul sistema. La calibrazione è specifica per i singoli lotti. Le confezioni di reagenti e i calibratori corrispondenti sono identificabili dal numero di lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. 2 Pubb. n. GEM1300_IT Versione 1.0

3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura CK-MB Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Eseguire il dosaggio dei campioni entro 2 ore dal momento del caricamento sul sistema. Manipolare i campioni, i calibratori e i controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. I calibratori e i controlli possono restare sul sistema per un massimo di 2 ore complessive, riportandoli tempestivamente a 2-8 C dopo l uso, oppure caricarne soltanto un quantitativo sufficiente ad una singola determinazione. Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I controlli cardiologi VITROS contengono 3 idonei livelli di CK-MB (bassi, medi, elevati). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente ad una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell operatore del sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è CK-MB, come pure l abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio. Se necessario è possibile riconfigurare questi nomi predefiniti. I risultati possono essere espressi come ng/ml o µg/l. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti, prima del dosaggio, fino a 1:5 con diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Evitare la conservazione dei campioni diluiti. Procedura Il dosaggio per CK-MB VITROS richiede 40 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per CK-MB VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per CK-MB VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema. A questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti al fine di immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Analizzare i calibratori analogamente ai campioni. Trasferire un aliquota di ogni calibratore nel contenitore del campione (tenendo conto del volume di riempimento minimo del contenitore), che può essere identificato tramite codice a barre con l etichetta fornita. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione rip osiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1300_IT 3

4 CK-MB ISTRUZIONI PER L USO Controllo di qualità Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con un range di parametri di che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Se un valore di controllo è fuori l intervallo specificato, i risultati dei test potrebbero non essere validi ed è consigliata una ricalibrazione. Per ulteriori informazioni, riferirsi al manuale dell operatore dei Sistemi VITROS per immunodiagnostica, Capitolo 5, Eseguire la calibrazione. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. Elevati livelli di CK-MB sono stati osservati in pazienti sofferenti di traumi muscolari scheletrici, di insufficienza renale e di varie patologie cardiache croniche, come pure dopo pesanti esercizi. I fattori che possono aiutare la diagnosi di infarto miocardico includono il modello di innalzamento e caduta dei livelli di CK-MB, come pure il rapporto tra concentrazione di CK-MB rispetto all atività totale del CK. Questi ed altri appropriati fattori clinici devono essere considerati quando vengono interpretati i risultati del test. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 10. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (34 mmol/l), emoglobina (5 g/l) o bilirubina (0,34 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio rispettivamente in ragione di meno del 5%, 10% e 10%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. I campioni contenenti 10 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 5%. Valori attesi Ogni laboratorio dovrebbe confermare la validità degli intervalli di rifermento rispetto alla popolazione afferente. A titolo di guida, sono stati effettuati studi sui seguenti pazienti. Il 97,5 percentile superiore di un pannello di 269 individui apparentemente sani e stato di 3,38 ng/ml su campioni di siero, 2,37 ng/ml su campioni di plasma eparina e 2,03 ng/ml su campioni di plasma EDTA. Il risultato medio proveniente da 107 pazienti ricoverati senza problemi cardiaci era di 1,04 ng/ml con un limite superiore (97,5 percentile) di 4,55 ng/ml (su campioni di siero). Il risultato medio proveniente da 59 pazienti cardiaci ricoverati che non hanno mai avuto infarti del miocardio era di 1,42 ng/ml con un limite superiore (97,5 percentile) di 5,31 ng/ml (su campioni di siero). E stata studiata la concentrazione di CK-MB su 19 pazienti con infarto miocardico confermato. Si sono analizzati un minimo di 2 campioni siero seriali per paziente, presi in un periodo di almeno 15 ore. La concentrazione media tutti i picchi dei campioni era di 81,4 ng CK-MB/mL, con un intervallo osservato di 12,8-176 ng CK-MB/mL. Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla L intervallo di calibrazione del dosaggio VITROS CK-MB è di ng CK-MB/mL (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con un altro dosaggio disponibile in commercio). Le concentrazioni di CK-MB sono espresse in ng/ml. Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio CK-MB VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 343 campioni di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato era di 0, ng/ml con il dosaggio CK-MB VITROS e di 0,4-331 ng/ml con il dosaggio del commercio: Dosaggio CK-MB VITROS = 1,07 x X - 3,22 (ng/ml), con coefficiente di correlazione di 0, Pubb. n. GEM1300_IT Versione 1.0

5 ISTRUZIONI PER L USO Bibliografia CK-MB Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5-T2 11 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati di ciascuno dei 3 sieri di controllo liofilizzati sono stati dosati in 2 differenti occasioni ogni giorno per 20 giorni. L esperimento è stato eseguito usando 2 lotti di reagenti differenti su 4 Sistemi differenti. I dati presentati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 1: Precisione Concentrazione tipica Giornaliera Intracalibrazione Intralaboratorio ng CK-MB/mL DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 1,32 0,028 2,1 0,096 7,0 0,103 7,8 15,9 0,174 1,1 0,869 5,5 0,864 5,5 62,7 0,726 1,2 4,12 6,4 4,22 6,7 * Quadratica media Giornaliera: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione intra-dosaggio, inter-dosaggio e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di almeno 5 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. Tipicamente, la sensibilità del dosaggio CK-MB VITROS è 0,3 ng/ml. Specificità I potenziali cross-reagenti sottoindicati hanno provocato interferenze inferiori al 5% nel dosaggio CK-MB VITROS (le concentrazioni effettive analizzate sono indicate fra parentesi): CK-MM (40 µg/ml), CK-BB (0,5 µg/ml). Bibliografia 1. Roberts R et al Am Heart J (1978) 2. Tsung S W Clin Chem (1976) 3. Galen R S et al JAMA (1975) 4. Herlitz J et al Clin Cardiology (1984) 5. Lott J A Human Pathology (1984) 6. Vaidya H C Clin Chem News (1988) 7. Summers M et al. Clin Chem 41. S73 (1995). 8. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved quideline. NCCLS Document M29-A (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA 19087; Calam RR. J Clin Immunoassay 11: (1988). 10. Levinson SS. J Clin Immunoasay 15: (1992) 11. National Committee for Clinical Laboratory Standards.Order Code EP5-T2.(1992). Versione 1.0 Pubb. n. GEM1300_IT 5

6 CK-MB ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli Glossario dei simboli Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1300/101.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1300_IT Versione 1.0