Barbara Vivaldi & Enrico Alesso
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1 RISULTATI DEI LABORATORI ITALIANI PARTECIPANTI A EUPT-CF9 SU FARINA DI MAIS ED ATTIVITÀ ANALITICA DI NRL-CF Barbara Vivaldi & Enrico Alesso N.R.L. for pesticides in cereals and feed Workshop 2016 LNR AO/CF/FV/SRM e Lab. Ufficiali per l analisi dei residui di antiparassitari in alimenti Roma - Istituto Superiore di Sanità 03 marzo 2016
2 OUTLINE DELLA PRESENTAZIONE: RISULTATI ITALIANI EUPT CF09 ANNUNCIO EUPT CF10 ATTIVITÀ ANALITICA DEL NRL - CF
3 EUPT CF09 FARINA DI MAIS PRIMO EUPT EFFETTUATO SU MATRICE MAIS!
4 PARTECIPAZIONE: SITUAZIONE GLOBALE 147 Lab. EU + EFTA 16 lab. da paesi terzi ma 3 non hanno inviato risultati 2 non hanno ricevuto il materiale
5 E SITUAZIONE ITALIANA 9 A.R.P.A. PUGLIA (dip. Bari) LAZIO (sez. Rieti e sez. di Roma) LIGURIA (sez. La Spezia) PIEMONTE (Polo Alimenti di La Loggia) VENETO (Lab. Pordenone) EMILIA ROMAGNA (dip. Ferrara) VALLE D AOSTA BASILICATA (dip. Potenza) 7 II.ZZ.SS. PIEMONTE LIGURIA E VALLE D AOSTA (NRL) PUGLIA BASILICATA ABRUZZO MOLISE ABRUZZO MOLISE LAZIO TOSCANA UMBRIA MARCHE VENEZIE LOMBARDIA EMILIA ROMAGNA 3 A.S.L BERGAMO (Lab. Sanità Pubblica) FIRENZE (Lab. Sanità Pubblica) MILANO (Lab. Prevenzione prov. MI) 2 A.P.P.A. BOLZANO - TRENTO 1 I.S.S. REPARTO ANTIPARASSITARI TOTALE PARTECIPANTI: 22 LABORATORI
6 CALENDARIO EUPT
7 TARGET PESTICIDE LIST 117 PESTICIDI 2 ELIMINATI DA EUPT- CF8 (captan, chlorotalonil) 8 NUOVI (diniconazole, ethirimol, fluopyram, isocarbophos, mandipropamid, metolachlor, spiromesifen, terbuthylazine) MRRL = 0,01 mg/kg
8 MATRICE FARINA DI MAIS Varietà di mais ad uso zootecnico Coltivato in Danimarca (2014) e trattato in campo con formulazioni commerciali
9 MATRICE FARINA DI MAIS Pannocchie di mais ricoperte di foglie analisi preliminare NO RESIDUI! Mais fortificato in laboratorio con 4 pesticidi applicati in campo + 14 standard Esclusi 8 principi attivi utilizzati nel trattamento: non inclusi in MACP già testati in precedenti PTs
10 TEST DI OMOGENEITÀ Condotto in accordo con Internation Harmonized Protocols pubblicati da IUPAC, ISO e AOAC
11 TEST DI STABILITÀ In accordo con ISO ANNEX B - due modalità: 1 caso: T = -18 C in tre giorni (21/04 05/05 19/05)
12 TEST DI STABILITÀ 2 caso: 4 settimane a T ambiente Degradazione di spiromesifen e test fallito per: carbendazim, fluopyram, lindane, metribuzin, pendimethalin e triticonazole! PERCHÉ
13 Incremento segnale nella regione degli acidi grassi curve di calibrazione ottenute con mais conservato a T = -18 C DIFFERENZA NEI COMPOSTI CO-ESTRATTI È LA CAUSA PIÙ PROBABILE DEL FALLIMENTO DEL TEST! Richiesto ai lab. di conservare il materiale a -18 C
14 DISTRIBUZIONE DEI CAMPIONI ED INVIO DEI RISULTATI 125 g di test-material e 125 di blank sono stati inviati, congelati, in scatole di PS, il 20 aprile. La > parte dei lab. ha ricevuto i campioni entro il 22 aprile accettazione tramite web-site entro 24 ore. Invio dei risultati entro le del 19 maggio attraverso piattaforma web
15 VALORI ASSEGNATI E CALCOLO INCERTEZZA Valore assegnato: algoritmo A descritto in ISO 13528: solo valori di lab. EU ed EFTA lab. hanno aggiunto H 2 O oppure usano ASE Incertezza del valore assegnato: x i = 1,25 * (s/ n) dove: s = deviazione standard robusta n = numero dei risultati Dev. std. del valore assegnato: fit-for-purpose RSD 25%
16 VALORI ASSEGNATI Per ogni pesticida/lab. è stato calcolato uno z-score: z i = (x i μ i ) / FFP-RSD x i = valore riportato dal lab. μ i = valore assegnato FFP-RSD = 25% di μ i
17 RISULTATI In totale, 147 lab., da 30 paesi EU ed EFTA hanno partecipato al PT. In Italia 19 lab. su 22 partecipanti hanno inviato risultati. FALSI POSITIVI (FP) LAB. ITALIANI: 0 FP! α e β-hch: errata attribuzione segnale lindano? Thiametoxam: definizione residuo di clothianidin?
18 FALSI NEGATIVI (FN) 42 risultati giudicati FN 2% del totale. Circa il 20% dei partecipanti (27 lab.) ha riportato FN. Trend in linea con i passati EUPT-CF. No FN per: carbendazim, pendimethalin, terbuthylazine e thiacloprid. Tra i lab. italiani 10 risulati FN. riportati da 5 diversi lab. Lab. FN Pesticidi Chlorfenvinphos; λ-cyhalothrin λ-cyhalothrin Azoxystrobin; Propiconazole Azoxystrobin; Epoxiconazole; λ-cyhalothrin; Triticonazole Metolachlor
19 RISULTATI Azoxystrobin, chlorpyrifos-methyl, λ-cyhalothrin, pendimethalin e propiconazole vengono determinati dalla > parte dei lab. italiani (95%) Gli analiti meno ricercati sono: spiromesifen (5), fluopyram (6), isocarbophos (7): TUTTI ANALITI INTRODOTTI PER LA PRIMVA VOLTA IN PT performance molto buone a concentrazioni <0,1 mg/kg (0 FN e 0 questionable ) 0,072 mg/kg 0,092 mg/kg 0,081 mg/kg
20 AZOXYSTROBIN Analizzata da 18 lab. italiani su 19 che hanno riportato risultati 2 FN e 1 risultato questionable A livello globale analizzata da 127 lab. con 4 FN 0,050 mg/kg Il lab.354 che ha riportato FN dichiara di non aggiungere H 2 O
21 λ - CYHALOTHRIN Analizzata da 18 lab. italiani su 19 che hanno riportato risultati 3 FN e 1 risultato questionable A livello globale analizzata da 129 lab. con 6 FN 0,088 mg/kg
22 CARBENDAZIM Pesticida caratterizzato dalla concentrazione maggiore: v.a. 0,452 mg/kg Problemi di sovrastima probabilmente legati ala preparazione delle soluzioni standard (bassa solubilità) max 0,135 mg/ml EtOAc
23 CARBENDAZIM - ITALIA Situazione italiana più incoraggiante: analizzato da 11 lab. su 19 che hanno riportato risultati con 0 FN e solo 1 risultato questionable 0,0452 mg/kg
24 LINDANE Isomero γ dell HCH. Importante anche per i lab. che analizzano principalmente alimenti ad uso zootecnico (Dir. 2006/77/EC) Analizzato da 15 lab. su che hanno inviato risultati con ottime perfomance: 100% risultati accettabili! 0,070 mg/kg
25 TRITICONAZOLE Unico analita per cui, in questo PT, si è dimostrata l importanza di aggiungere H 2 O prima dell estrazione analiti non incurred ma addizionati in laboratorio. Tendenzialmente chi non aggiunge H 2 O si colloca nella regione dei FN. In Italia 11 risultati di cui 1 FN ma non ha fornito informazioni circa il metodo (Lab. 372)
26 Qn-RSD vs. FFP-RSD La deviazione std. relativa robusta è buona per tutti gli analiti e si assesta a valori inferiori al 25% per tutti gli analiti, fatta eccezione per il carbendazim, dove la dispersione dei risultati attorno al valore assegnato, ne provoca un incremento a valori intorno al 28%. Il range comprende valori dal 16 al 28%.
27 CLASSIFICAZIONE LABORATORI Per essere classificati in cat. A i lab. devono quantificare almeno il 90% dei residui presenti nel campione ( 16 pesticidi) e non riportare nessun FP. Per i lab. in categoria A viene calcolato il parametro AZ 2 : somma pesata degli z-score. Tra i lab. italiani partecipanti 5 sono stati classificati in cat. A e questo denota un notevole miglioramento delle performance rispetto al PT precedente.
28 CLASSIFICAZIONE LABORATORI Lab. Risultati FN FP AZ 2 Perform ,2 Good ,1 Good ,2 Good ,6 Good ,1 Good
29 EUPT-CF9 CONCLUSIONI EUPT caratterizzato da un ottima partecipazione a livello globale e nazionale. In Italia 22 laboratori hanno partecipato, un elevato numero secondo solo alla Germania (23). Buone le performance dei laboratori italiani anche se lo scopo dei laboratori ufficiali deve aumentare per poter incrementare la percentuale di lab. in categoria A. Le buone performance sono state riconosciute dall assegnazione del premio Arne Anderrson al lab. APPA di Bolzano in quanto lab. che ha ragiunto le migliori perfomance in tutta l UE negli ultimi due PT di settore
30 EUPT-CF EUPT che avrà come oggetto la matrice segale. Annunciato nel dicembre Registrazione aperta dall 11/01/2016 al 01/02/2016 tramite piattaforma web sviluppata da EURL di settore. Invito alla partecipazione diffuso da NRL-CF Italia tramite mail inviata in data 11/01/2016. Nuova classificazione cat. A/B: no FP, no FN, almeno 90% dei pesticidi nella target list, almeno 90% dei pesticidi contaminanti il campione.
31 EUPT-CF I campioni (125 g circa di test-material g circa di blank) verranno spediti ai lab. partecipanti il 7 marzo 2016 (accettazione entro le 24 ore). Invio dei risultati entro le ore del 11 aprile Target pesticide list contiene 17 nuovi pesticidi (!)rispetto all EUPT-CF9: acetamiprid, aldrin, biphenyl, bromuconazole, buprofezin, chlorantraniliprole, cymoxanil, dieldrin, famoxadone, flutolanil, methamidophos, pencycuron, propamocarb, τ-fluvalinate, tefluthrin, tetraconazole, tetramethrin. 134 pesticidi in totale nella target pesticide list: per Cat. A 121 pesticidi! 7 analiti da analizzare su base volontaria (di rilevanza per chi analizza feed ex. Dir. 2006/77/EC non considerati per classificazione A/B): cis-chlordane, trans-chlordane, oxychlordane, endrin, heptachlor, heptachlor-endo-epoxid, heptachlor-exo-epoxid.
32 ATTIVITÀ ANALITICA NRL CF 1) Metodo validato ed accreditato per l analisi quantitativa di residui di pesticidi organoclorurati in alimenti ad uso zootecnico. Metodo validato nel 2013 per soddisfare alle esigenze del cap. V del PNAA che richiede l analisi dei pesticidi OC in accordo con Dir. 2006/77/EC Validazione in accordo con: Document Nº SANCO/12495/2011 Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed
33 PESTICIDI OC IN ALIMENTI ZOOTECNICI 1) Campione omogeneizzato in trituratore a lame in acciaio 2) 4 grammi di campione estratti in ASE 200 (esano/acetone) 3) Estratto a secco e ripreso con f.m. per GPC (cicloesano/dcm) 1 ml iniettato in colonna di 2,5 cm di i.d. (BioBeads SX-3)
34 4) Seconda purificazione SPE Florisil (1g/6 ml) Eluizione: 2 * 4 ml CH3CN 5) Campione purificato evaporazione flusso di N2. 6) Ripresa del residuo: 200 µl cicloesano 7) Analisi GC-MS (single stage quadrupole) SIM MODE
35 2) METODICA SweEt IN FASE DI VALIDAZIONE PRESSO LNR 1) Macinare il campione in modo da ottenere una granulometria 1mm 2) Pesare 5 g di campione e aggiungere TPP (IS) e 10 ml di acqua fredda vortex 3) Aggiungere 10 ml di EtoAc 1% CH 3 COOH agitare vigorosamente 5) Sonicare per 20 minuti a T = 30 C 4) Aggiungere 10 g di Na 2 SO 4 6) Centrifugare a 3000 rpm per 10 minuti 7) Diluire 1:1 con EtoAc, filtrare ed iniettare in GC-MS/MS ed HPLC-MS/MS
36 METODO IN FASE DI VALIDAZIONE MEDIANTE APPROCCIO LINEA GUIDA SANTE 11945/2015 CIRCA 200 ANALITI IN GC-MS/MS ED IN HPLC-MS/MS VALIDAZIONE INIZIALE SU CEREALI E DERIVATI SUCCESSIVA ESTENSIONE DEL METODO A: LEGUMI SECCHI MANGIMI A BASE CEREALICOLA, A BASE DI LEGUMINOSE E MANGIMI PER PESCI.
37 GRAZIE PER L ATTENZIONE
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