PREALBUMINA (Ref. NPP19L)

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1 PREALBUMINA (Ref. NPP19L) REAGENTE PER LA DETERMINAZIONE QUANTITATIVA DELLA PREALBUMINA UMANA NEL SIERO CON METODO NEFELOMETRICO PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO APPLICAZIONI CLINICHE La Prealbumina è una proteina sintetizzata nel fegato ed ha la funzione di trasporto della tiroxina e del retinolo (vitamina A). Le variazioni di concentrazione della Prealbumina sono indice della capacità protidosintetica del fegato. Essa diminuisce in molte malattie che comportano un deficit proteico e solitamente aumenta nella sindrome nefrosica ed al termine della gravidanza. Generalmente, nel corso dell epatite virale, si osserva un precocissimo abbassamento dei valori di Prealbumina nel sangue. PRINCIPIO DEL METODO Le proteine contenute nel siero formano degli immunocomplessi reagendo con gli anticorpi specifici. Sfruttando il fenomeno della diffrazione della luce che questi immunocomplessi provocano, si è in grado, per mezzo del nefelometro, di misurare l'intensità della luce diffratta, che risulta proporzionale alla concentrazione della Prealbumina presente nel campione in esame. La valutazione avviene per confronto con uno calibratore a concentrazione nota. REAGENTE CONTENUTO NELLA CONFEZIONE Il reagente deve essere conservato a 2-8 C. Durante la conservazione, l'antisiero può presentare flocculazioni o intorbidamenti che non dipendono da contaminazioni e che non influiscono sull'attività. In questi casi è necessario filtrare l'antisiero prima dell'uso. Allo scopo, si consiglia di usare filtri monouso con un diametro dei pori di m. La data di scadenza è indicata sulla etichetta e si riferisce al componente conservato chiuso a 2-8 C. A/S Antisiero: 1 flacone (2 ml) di antisiero policlonale, ottenuto in pecora, contro Prealbumina umana altamente purificata. Conservante: NaN 3 (<0.1%). Pronto per l'uso. Dopo l'impiego, conservare il reagente ermeticamente chiuso a 2-8 C per 4 settimane. Non congelare. I titoli anticorpali (T), che indicano quanti mg di antigene vengono precipitati in gel di agarosio da 1 ml dell'antisiero, vengono determinati mediante immunodiffusione radiale e indicati sull'etichetta del flacone. MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO L'antisiero deve essere utilizzato con i seguenti reagenti: Calibratore Proteine S, (Ref. NCPP1) Controllo Proteine S/L, (Ref. NCPP2L) Controllo Proteine S/M, (Ref. NCPP2M) Controllo Proteine S/H, (Ref. NCPP2H) Tampone Supplementare, (Ref. NSPP1) Diluente, (Ref. NDPP1) Tampone di Reazione, (Ref. NDPP2) Nefelometro Delta (Ref ) Altro materiale di consumo e attrezzature sono descritte nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. 1

2 AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per ottenere risultati corretti e riproducibili, è necessario osservare le seguenti norme: Non usare i reagenti dopo la data di scadenza. Evitare accuratamente contaminazioni tra campioni e reagenti; a tal fine è consigliabile usare pipette con puntali monouso per ogni campione e per ogni reattivo. Per evitare contaminazioni personali ed ambientali, è necessario osservare le seguenti norme di sicurezza: Utilizzare guanti monouso durante la manipolazione di materiale potenzialmente infetto e durante il dosaggio. Non fumare, mangiare, bere o applicare cosmetici durante l'esecuzione del dosaggio. Evitare la produzione di schizzi e la formazione di aerosol; in tal caso, ripulire accuratamente con ipoclorito di sodio ad una concentrazione del 3%. Il mezzo adoperato per la pulizia deve essere trattato come residuo potenzialmente infetto ed eliminato secondo le modalità sotto riportate. I reagenti per cui non si fornisce la scheda di sicurezza non contengono sostanze chimiche pericolose o se presenti, queste sono al di sotto dei limiti di concentrazione definiti nel D.Lgs.285/98 e nella direttiva CEE 91/55. Ai sensi del D.L. italiano n. 22 del , che fa riferimento alle direttive CEE (91/156/CEE, 91/689/CEE, 94/62/CEE) tutti i rifiuti provenienti da lavorazioni manuali e/o in automatico sono classificati rifiuti speciali pericolosi con codice di classificazione CER ; devono quindi essere eliminati affidandoli a ditte autorizzate al ritiro ed allo smaltimento. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Il dosaggio può essere effettuato su campioni di sieri umani freschi. I campioni di siero devono essere completamente coagulati e, dopo essere stati centrifugati, non devono contenere particelle o tracce di fibrina in sospensione; prima del dosaggio, accertarsi che i campioni siano perfettamente limpidi. Pertanto, campioni fortemente lipemici o campioni congelati, che dopo lo scongelamento si presentano torbidi, devono essere chiarificati mediante centrifugazione (10' a ca g). I campioni di siero e liquor possono essere conservati a 2-8 C per 8 giorni, per tempi più lunghi (1 anno) si consiglia di congelarli a -20 C. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti. PROCEDIMENTO OPERATIVO Tutte le fasi vengono eseguite automaticamente dallo strumento Attendere che i reagenti ed i campioni raggiungano la temperatura ambiente (15-25 C). Seguire il procedimento operativo descritto sul manuale d'uso del Nefelometro Delta, che prevede l'allestimento di quanto segue: Curva di calibrazione: viene preparata automaticamente dallo strumento mediante diluizioni seriali del Calibratore (Ref. NCPP1) con l'apposito Diluente (Ref. NDPP1). Le diluizioni effettuate vengono quindi impiegate per la calibrazione, che rimane valida purché il dosaggio dei sieri di controllo rientri nei limiti attesi. La calibrazione deve essere necessariamente ripetuta ogni qualvolta si utilizzi un nuovo lotto di antisiero. Campioni: prima del dosaggio, i sieri vengono diluiti automaticamente dallo strumento alla diluizione di 1:20, utilizzando l'apposito Diluente (Ref. NDPP1). Qualora i valori dei campioni siano al di fuori dell'ambito di misura è opportuno ripetere il test, utilizzando una diluizione maggiore o minore. 2

3 Controllo di qualità interno: per ogni serie di campioni e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di antisiero, è necessario effettuare un controllo di accuratezza e di precisione, utilizzando il Controllo per Proteine S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) e S/H (Ref. NCPP2H). I controlli vengono trattati come i campioni in esame. Per i limiti attesi di tali controlli fare riferimento alla relativa tabella fornita a corredo della confezione dei controlli stessi. CALCOLO DEI RISULTATI La valutazione dei campioni viene eseguita in modo automatico, mediante elaborazione dei risultati con una funzione logit-log. VALORI NORMALI I valori di Prealbumina sotto riportati sono soltanto indicativi. Si raccomanda a ciascun laboratorio di stabilire i propri intervalli di riferimento : Proteina Prealbumina Siero g/l CARATTERISTICHE METODOLOGICHE SPECIFICITA' L' Antisiero utilizzato risulta essere specifico per la determinazione della Prealbumina umana. SENSIBILITA' La sensibilità della determinazione viene definita dal limite inferiore della curva di calibrazione e dipende quindi dalla concentrazione delle proteine nel calibratore. Gli ambiti di misura sono riportati nel manuale d'uso del Nefelometro Delta. PRECISIONE La precisione è stata valutata misurando la variabilità intra-saggio ed intersaggio. Intra-saggio Inter-saggio Proteina n repl. Valore medio [g/l] CV % n repl. Valore medio [g/l] CV % Prealbumina CORRELAZIONE TRA METODI Campioni di siero sono stati esaminati con l'antisiero Radim anti-prealbumina umana (y) a confronto con un sistema nefelometrico di riferimento (x). Le correlazioni dei risultati sono riportate nella tabella sottostante: Proteina Regressione lineare Coeff. di correlazione N campioni Prealbumina y = 0.925x

4 LIMITI DEL TEST La presenza di torbidità o di particelle può interferire nell'esecuzione del test. Si raccomanda, pertanto, di rimuovere mediante centrifugazione, eventuali particelle dovute a sieri non completamente coagulati, o a denaturazione proteica. Per motivazioni tecniche relative alla produzione e/o all'invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti, facendo riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati. 4

5 PREALBUMIN (Ref. NPP19L) REAGENT FOR QUANTITATIVE DETERMINATION OF PREALBUMIN IN HUMAN SERUM USING A NEPHELOMETRIC METHOD FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE ONLY CLINICAL APPLICATIONS Prealbumin is formed in the liver and serves to transport tiroxin and retinol (vitamin A). The serum Prealbumin concentration is an indication of hepatic synthesis capacity. It diminishes in several diseases such as proteic deficiency and usually increases in nephrotic syndrome as well as at the end of pregnancy. Generally, rapid diminished serum value of Prealbumin occurs during hepatitis. PRINCIPLE OF THE ASSAY The human serum Prealbumin form immune complexes with specific antibodies. With the light diffraction phenomenon produced by these complexes it is possible to measure the intensity of scattered light using a nephelometer. This intensity is proportional to the concentration of the relevant albumin in the sample. The result is evaluated by comparison with a calibrator of known concentration. REAGENT PROVIDED WITH THE KIT - Store the reagent at 2-8 C. During storage the antiserum can develop precipitates or turbidity which are not caused by microbial contamination and do not affect their activity. In such cases the antiserum should be filtered prior to use. Disposable filters with a pore size of m are suitable for this purpose. - The expiry date is given on the label and it refers to the closed component stored at 2-8 C. A/S Antiserum: 1 vial (2 ml) of polyclonal antiserum, produced by immunisation of sheep to highly purified human Prealbumin. Preservative: NaN3 (< 0.1 %). Ready for use. After each use store the reagent, sealed hermetically, at 2-8 C for 4 weeks. Do not freeze. The antibody titres (T) indicate the quantity of antigen in mg which will be precipitated in agarose gel by 1 ml of the corresponding antiserum. The titres are determined by radial immunodiffusion and are printed on the vial labels. MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED The Antiserum must be used with the following reagents: Protein Calibrator S, (Ref. NCPP1) Protein Control S/L, (Ref. NCPP2L) Protein Control S/M, (Ref. NCPP2M) Protein Control S/H, (Ref. NCPP2H) Supplementary Buffer, (Ref. NSPP1) Diluent, (Ref. NDPP1) Reaction Buffer, (Ref. NDPP2) Delta Nephelometer (Ref ) Disposable materials and samples as described in the instruction manual for the Delta Nephelometer. 5

6 WARNINGS AND PRECAUTIONS In order to obtain correct and reproducible results, the following rules must be observed: - Do not use reagents beyond their expiry date - Avoid any contamination among samples and reagents. For this purpose disposable tips should be used for each sample and reagent. In order to avoid personal and environmental contamination, the following precautions must be observed: - Use disposable gloves while handling any potentially infectious material and while performing the assay. - Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics during the assay. - Avoid splashing and aerosol formation; in such cases wash carefully with a 3% sodium hypochlorite solution. Any such cleaning material must be treated as potentially infectious and disposed of accordingly. - The reagents for which a Safety Data Sheet is not supplied do not contain hazardous chemical substances or, if they do, are below the concentration limits established by the Italian decree D.Lgs.285/98 in compliance with EEC directive 91/ According to Italian decree D.L. no. 22 dated , in compliance with EEC directives (91/156/EEC, 91/689/EEC, 94/62/EEC) all waste products originating from either manual and/or automated processing are classified as hazardous special waste materials (European classification code180103). As such they must be eliminated by delegating to special enterprises qualified in waste collection and disposal. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Fresh serum human samples are suitable for use. Serum samples should have coagulated completely and, after centrifugation, should contain no particles or traces of fibrin. Prior to use be sure that samples are perfectly clear. Specimens showing particulate matter or turbidity should be centrifuged (10 minutes at approx. 15,000 x g) prior to use. Serum samples can be stored at 2-8 C for 8 days, for longer periods (1 year) it is advisable to freeze samples at -20 C. Repeated Freeze/thawing of samples should be avoided. ASSAY PROCEDURE - All steps are automatically performed by the instrument. - Allow the reagents and samples to warm up to room temperature (15 to 25 C). - Consult the Delta Nephelometer manual for details regarding the operation of the instrument in preparation of the following: - Reference curve: is automatically prepared by instrument with serial dilutions of the Calibrator (Ref. NCPP1) using the supplied Diluent (Ref. NDPP1). These dilutions are used for calibration. The calibration is valid as long as control serum performances are reproduced within their expected limits. Every time a different lot of antiserum is used a new calibration curve must be prepared. - Specimens: prior to use, serum samples are automatically diluted 1:20 for Prealbumin assay using the supplied Diluent (Ref. NDPP1). If the readings obtained are outside the assay range the assay can be repeated using a higher or lower dilution of sample. - Internal Quality Control: for each series of serum samples as well as the initial opening of an antiserum vial, an accuracy and precision control should be assessed using the Protein Controls S/L (Ref. NCPP2L), S/M (Ref. NCPP2M) and S/H (Ref. NCPP2H). The controls are assayed and results evaluated as for patient samples. For the expected values refer to the table provided with the control kit. 6

7 CALCULATION OF RESULTS The evaluation of samples is automatic and the results are elaborated by means of a logit-log function. NORMAL VALUES The Prealbumin values reported below are indicative. We suggest that each laboratory establish its own normal range: Protein Prealbumin Serum g/l ASSAY PERFORMANCE SPECIFICITY Antisera used are specific for determination of corresponding human Prealbumin. SENSITIVITY The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends therefore upon the concentrations of the proteins in the calibrator. Typical measuring ranges are given in the Delta Nephelometer instruction manual. PRECISION Precision was evaluated upon intra- and inter-assay variability. Intra-assay Inter-assay Protein n repl. Mean value [g/l] CV % n repl. Mean value [g/l] CV % Prealbumin METHOD COMPARISON Serum was assayed with Radim antisera to human Prealbumin (y). These results were confronted with a reference nephelometric system(x). Correlation results yielded the following data: Protein Linear regression Coeff. of correlation n samples Prealbumin y = 0.925x

8 LIMITS OF THE ASSAY Turbidity or particles can interfere with the assay. Any particles formed due to serum samples not completely coagulated or proteinic denaturation samples must be removed by centrifugation. Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples the results obtained for control samples and inter-laboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values. M366 - Rev.1 Maggio 2005 RADIM SpA - Via del Mare, Pomezia (Roma) Italia Tel.: 0039/06/ Fax: 0039/06/ ; National Order Entry: 0039/06/ ; Export Dept.: 0039/06/ ; Customer Care: 0039/06/ ; 8