Polmonite. Giovanni Di Bonaventura, Ph.D. CI Medicina di Laboratorio CL Medicina e Chirurgia Università G. d Annunzio di Chieti-Pescara AA

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1 Polmonite Giovanni Di Bonaventura, Ph.D. CI Medicina di Laboratorio CL Medicina e Chirurgia Università G. d Annunzio di Chieti-Pescara AA

2 Polmonite Infezione: Batterica Virale Fungina Infiammazione del polmone con alveoli ripieni di fluido Acquisita in comunità Nosocomiale 2

3 Polmonite batterica Streptococcus pneumoniae Legionella Mycoplasma pneumoniae 3

4 Streptococcus pneumoniae Pneumococco 2/3 delle polmoniti viene contratta in comunità Non può sopravvivere al di fuori del proprio habitat Alto rischio: anziani, stagionalità, presenza di infezione virale, diabete, consumo di alcool e/o stupefacenti Variabilità dell antigene capsulare Consolidamento 4

5 S. pneumoniae. La colorazione di Gram rivela caratteristici coppie cellulari. La coltura su agar sangue mostra alfa-emolisi. Streptococcus pneumoniae 5

6 Il consolidamento consiste nel blocco infiammatorio di bronchioli ed alveoli, con formazione di essudato. Polmonite batterica: consolidamento.

7 Legionella Infezione infrequente ma grave Sopravvive nell habitat naturale (acqua di rubinetto, sorgenti termali, ecc.) Malattia opportunistica 7

8 Legionella è un organismo intracellulare capace di sopravvivere nelle amebe e nei fagociti umani. Legionella intracellulari 8

9 Mycoplasma pneumoniae Il più piccolo tra i batteri conosciuti Assenza di parete cellulare Walking pneumoniae polmonite atipica 9

10 Infezione virale Hantavirus Malattia emergente Sindrome respiratoria acuta Disseminazione ematica dell antigene di Hantavirus Perdita di fluido dai vasi sanguigni Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)- associated Coronavirus Concentrata in Cina e sud-est asiatico Pochi casi in Australia, Canada e USA Sintomatologia similare a quella indotta da influenzavirus e virus sinciziale respiratorio (RSV) Il genoma virale è stato interamente sequenziato 10

11 Infezione fungina Histoplasma capsulatum Causa la malattia di Darling (o febbre Ohio Valley) Manifestazione benigna: Benigna o grave, Acuta o cronica Intracellulare Pazienti affetti da AIDS sono ad alto rischio Endemica Pneumocystis jiroveci Già denominato Pneumocystis carinii Infezione opportunistica in pazienti con AIDS Intracellulare ed extracellulare Cianosi 11

12 TIPOLOGIA DEL CAMPIONE Polmonite Diagnosi microbiologica ESCREATO: per i campioni di escreato (almeno 1 ml) si richiede che il materiale sia di provenienza dalle vie respiratorie inferiori ottenuto con colpi di tosse profondi. Quando la tosse è secca, possono essere utili la fisioterapia, il drenaggio posturale o l inalazione di un aerosol prima dell espettorazione. LAVAGGIO BRONCOALVEOLARE (BAL - bronchoalveolar lavage): Dopo inserzione di un broncoscopio flessibile si lava con soluzione fisiologica sterile (max quantità possibile) un segmento polmonare, ottenendo in tal modo componenti cellulari e nondella superficie della mucosa del tratto respiratorio inferiore. ALTRI CAMPIONI: campioni prelevati broncoscopicamente con spazzolamento protetto, campioni da spazzolamento bronchiale cieco e lavaggio broncoalveolare non diretto. 12

13 Polmonite Diagnosi microbiologica TRASPORTO E CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE I campioni devono essere trasportati e processati il più presto possibile. L escreato può essere refrigerato per 2-3 ore senza una perdita apprezzabile dei patogeni. Qualsiasi ritardo oltre questo limite di tempo può consentire la sovracrescita di bacilli Gram- e la mortalità di Haemophilus e S. pneumoniae. Quando il trasporto è difficoltoso, i campioni possono essere refrigerati e seminati entro 48 ore dal prelievo, ponendo attenzione all interpretazione dei risultati. 13

14 Polmonite Diagnosi microbiologica La ricerca e l isolamento di microrganismi responsabili di polmonite dipendono da: Adeguatezza del campione delle basse vie respiratorie Assenza di contaminazione della flora del tratto respiratorio superiore Utilizzo delle tecniche microscopiche e colturali Trattamenti antimicrobici recenti in corso La differenziazione fra colonizzazione tracheobronchiale e vera infezione polmonare può risultare difficile. 14

15 Polmonite Diagnosi microbiologica La colorazione di Gram su campioni di escreato può essere utilizzata per: 1. verificare la qualità del campione: per le colture sono selezionati campioni purulenti (presenza di PMNs) e non contaminati con cellule epiteliali squamose; gli escreati dei pazienti immunodepressi od ove sussistano difficoltà per la ripetizione del campione non dovrebbero essere rifiutati. 2. predire la probabilità di riscontro dei patogeni in funzione delle loro caratteristiche morfologiche: il campione dovrebbe essere osservato prima della sua coltura; porre attenzione all interpretazione del Gram, poiché l uso di antimicrobici può rendere non vitali i microrganismi osservati sul vetrino; può essere inappropriato identificare i microrganismi in caso di grossolana contaminazione da flora orofaringea; la sensibilità del Gram può variare e spesso dipende da un nuovo controllo soggettivo del vetrino; la colorazione Gram consente l identificazione di ife di lieviti, ma è di qualità inferiore rispetto all idrato di potassio ed ai coloranti fluorescenti. 15

16 Coloranti fluorescenti Polmonite Diagnosi microbiologica Nella ricerca dei bacilli acido-alcool resistenti sono preferiti coloranti quali auramina-fenolo perché più rapidi e sensibili rispetto allo Ziehl Neelsen (Z-N). Gli strisci auramina positivi possono essere confermati con una sovra-colorazione con Z-N. Calcofluor bianco, ed altri coloranti fluorescenti sono particolarmente idonei per visualizzare le ife fungine. Sono lievemente più sensibili delle colorazioni con KOH, e di lettura è più rapida. Forniscono inoltre informazioni morfologiche più dettagliate rispetto ai coloranti KOH, sufficienti a riconoscere i Mucorales (grandi ife non settate) da quelle simil-aspergillus (sottili, settate, con ramificazioni a 45 ). I coloranti per Pneumocystis jiroveci, agente causale della polmonite pneumocistica, sono per lo più fluorescenti. Può essere richiesta la microscopia in fluorescenza per Legionella. 16

17 Calcofluor white staining Rhizopus Aspergillus

18 Polmonite Diagnosi microbiologica TERRENI DI COLTURA, CONDIZIONI E MICRORGANISMI PER CAMPIONI DI ESCREATO 18

19 Polmonite Diagnosi microbiologica TERRENI DI COLTURA, CONDIZIONI E MICRORGANISMI PER CAMPIONI DI BAL 19

20 Caratteristiche di polmoniti batteriche, virali e fungine 20