FEBBRE MEDITERRANEA FAMILIARE: CENNI DI GENETICA

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1 DAVIDE MARTORANA FEBBRE MEDITERRANEA FAMILIARE: CENNI DI GENETICA PARMA, 23 OTTOBRE 2005

2 PROBLEMI DELL INQUADRAMENTO DIAGNOSTICO CARATTERISTICA RICORRENTE: EPISODI PERITONITICI ~70% DEI PAZIENTI SUBISCE APPENDICECTOMIA LAPAROTOMIE ESPLORATIVE LAPAROSCOPIE PER PROCESSI INFETTIVI VALUTAZIONI PSICHIATRICHE PROBLEMA DI UN CORRETTO INQUADRAMENTO DIAGNOSTICO IN ZONE A BASSA PREVALENZA (???) DELLE FEBBRI PERIODICHE EREDITARIE

3 LA PREVALENZA DELLA FMF VARIA MOLTO A SECONDO DELLA POPOLAZIONE, MA COMUNQUE IN ITALIA E SCONOSCIUTA (ALL ESTERO IN ALCUNI CASI E STATA IPOTIZZATA) TUTTO SOMMATO, IN ITALIA MOLTO PROBABILMENTE E SOTTODIAGNOSTICATA

4 CELLULA CROMOSOMA CONTIENE GENI COSTITUITI DA DNA COSTITUITI DA BASI (A, C, G, T)

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6 IL GENE DELLA FMF (MEFV) E NEL CROMOSOMA 16 IN ROSSO: ESONI (10 NEL GENE) SERVONO PER FORMARE LA PROTEINA (PIRINA o MARENOSTRINA) VENGONO ANALIZZATI MEDIANTE SEQUENZIAMENTO (LETTURA DELL ORDINE PROGRESSIVO DELLE BASI NEL DNA) LINEA NERA: INTRONI NELLA FMF NON SONO MAI STATE TROVATE MUTAZIONI NEGLI INTRONI VIENE ANALIZZATO IL DNA VICINO AGLI ESONI MEDIANTE SEQUENZIAMENTO

7 NORMALE PORTATORE MUTATO

8 GENE MEFV (DNA) costituito da basi A,C,G,T PROTEINA PIRINA/MARENOSTRINA Costituita da aminoacidi (in tutto ce ne sono 20 tipi diversi, identificati mediante una lettera alfabetica) Es: la mutazione E148Q, significa che l aminoacido E ( Acido Glutammico ) in posizione 148 sulla proteina Pirina è stato sostituito dall aminoacido Q (Glutammina), a causa di una mutazione nella base corrispondente sul DNA

9 RICERCA DI MUTAZIONI NEL GENE MEFV DELLA FEBBRE MEDITERRANEA FAMILIARE DATA: XX/XX/2005 COGNOME : XXXXXXX NOME : XXXXX DATA DI NASCITA: //XX DATA RICEVIMENTO CAMPIONE: //2005 CODICE IDENTIFICATIVO: G-05 PROVENIENZA: Dott. XXXXXXXXXXX CAMPIONE: DNA genomico estratto da sangue periferico METODICA: Sequenziamento per la ricerca di mutazioni in tutti gli esoni e nelle sequenze introniche adiacenti (+/-20 bp) del gene MEFV. RISULTATO: Non è stata identificata alcuna mutazione causativa la Febbre Mediterranea Familiare ANNOTAZIONI: Sono state osservate in diverse regioni del gene delle variazioni di sequenza rispetto a quella originale riportata da NCBI (National Center for Biotechnology Information); tali varianti non causano un cambiamento aminoacidico nella proteina codificata dal gene MEFV. Nel referto non compaiono le varianti nucleotidiche riportate come polimorfismi nel database Infevers Siamo a disposizione per ulteriori chiarimenti e valutazioni in merito Cordiali saluti Telefono: dmartorana@ao.pr.it

10 RICERCA DI MUTAZIONI NEL GENE MEFV DELLA FEBBRE MEDITERRANEA FAMILIARE DATA: XX/XX/2005 COGNOME : XXXXXXX NOME : XXXXX DATA DI NASCITA: //XX DATA RICEVIMENTO CAMPIONE: //2005 CODICE IDENTIFICATIVO: G-05 PROVENIENZA: Dott. XXXXXXXXXXX CAMPIONE: DNA genomico estratto da sangue periferico METODICA: Sequenziamento per la ricerca di mutazioni in tutti gli esoni e nelle sequenze introniche adiacenti (+/-20 bp) del gene MEFV. RISULTATO: E148Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 2) R202Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 2) P369S IN ETEROZIGOSI (ESONE 3) R408Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 3) CONCLUSIONI: VEDI ALLEGATO ANNOTAZIONI: Sono state osservate in diverse regioni del gene delle variazioni di sequenza rispetto a quella originale riportata da NCBI (National Center for Biotechnology Information); tali varianti non causano un cambiamento aminoacidico nella proteina codificata dal gene MEFV. Nel referto non compaiono le varianti nucleotidiche riportate come polimorfismi nel database Infevers Siamo a disposizione per ulteriori chiarimenti e valutazioni in merito Cordiali saluti Telefono: dmartorana@ao.pr.it

11 La ricerca di mutazioni nel gene MEFV per la Febbre Mediterranea Familiare (FMF) eseguita su xxxxx mediante sequenziamento di tutti gli esoni, ha evidenziato la presenza di varianti nucleotidiche che provocano il cambiamento della struttura aminoacidica: E148Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 2) database Infevers tale variante è indicata come un possibile polimorfismo funzionale. Il ruolo patogenetico di tale variante è controverso; in letteratura ci sono gruppi che non la considerano implicata nello sviluppo della FMF ( The E148Q MEFV allele is not implicated in the development of familial Mediterranean fever. Tchernitchko D, Legendre M, Cazeneuve C, Delahaye A, Niel F, Amselem S. Hum Mutat Oct;22(4):339-40), mentre altri gruppi la ritengono causativa la FMF ( E148Q is a disease causing mefv mutation: a phenotypic evaluation in patients with familial mediterranean fever. Topaloglu R, Ozaltin F, Yilmaz E, Ozen S, Balci B, Besbas N, Bakkaloglu A. ARD ondine, September 30, 2004). Si tratta di studi effettuati su popolazioni di aree geografiche differenti e, in una area come l Italia a non elevata prevalenza della patologia, tale variante è da ritenersi, a nostro parere, implicata nello sviluppo della FMF. R202Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 2) Nel database Infevers, tale variante è indicata come un frequente polimorfismo. Il ruolo patogenetico di questa variante è per ora da escludersi, infatti costituisce un allele con una frequenza assai elevata nella popolazione generale; in uno studio da noi condotto su 150 controlli sani, è stato riscontrato circa un 37% di eterozigoti. P369S IN ETEROZIGOSI (ESONE 3) Nel database Infevers, tale variante è indicata come un possibile polimorfismo funzionale in linkage con la variante R408Q R408Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 3) Nel database Infevers, tale variante è indicata come un possibile polimorfismo funzionale in linkage con la variante P369S. parallelamente alla ricerca di mutazioni nel gene MEFV della Febbre Mediterranea Familiare, è stata eseguita anche l indagine del gene TNFSRF1A della sindrome associata a mutazioni del recettore del TNF-ALFA (TRAPS). La TRAPS presenta una ereditarietà mendeliana autosomica dominante ed appartiene al gruppo di patologie denominate Febbri Periodiche Familiari, di cui anche la FMF fa parte. il sequenziamento diretto degli esoni 2, 3, 4, 6 (sono state individuate mutazioni solo in tali esoni) ha evidenziato una variante nucleotidica che provoca un cambiamento a livello aminoacidico: R92Q IN ETEROZIGOSI (ESONE 4) Nel database Infevers, tale variante è indicata ad elevata frequente nella popolazione. Da studi da noi effettuati su una popolazione di controllo sana (n=140), il 4% circa è risultato eterozigote. Recentemente sono stati effettuati studi che evidenziano come i prodotti proteici dei geni appartenenti al gruppo delle Febbri Periodiche Familiari possano interagire e cooperare a livello cellulare (spesso i pathways sono correlati) in un cosiddetto cross-talk proteico. Nello screening effettuato sul gene MEFV della FMF e sul gene TNFSRF1A della TRAPS, non sono state evidenziate mutazioni riconosciute come tali dal database Infevers ( ma varianti che causano un cambio aminoacidico con frequenza nella popolazione generale superiori ad 1%. Resta comunque la possibilita che mutazioni non evidenziate mediante le nostre metodiche risiedano in regioni regolatrici non normalmente analizzate mediante i comuni esami di tipo diagnostico. In aree come l Italia in cui la prevalenza della malattia non è elevata, il riscontro di varianti anche in eterozigosi in una paziente con quadro clinico suggestivo e risposta positiva alla colchicina, assume un alto valore diagnostico per porre diagnosi di Febbre Mediterranea Familiare.

12 The E148Q MEFV allele is not implicated in the development of familial Mediterranean fever. Tchernitchko D, Legendre M, Cazeneuve C, Delahaye A, Niel F, Amselem S. Hum Mutat Oct;22(4):

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14 ? FMF

15 ALBERO GENEALOGICO QUADRATO: MASCHIO CERCHIO: FEMMINA NERO: AFFETTO BIANCO: SANO M S M S M S S S S M S S

16 DUE GENITORI PORTATORI DI UNA MUTAZIONE FMF (MA NON AFFETTI DA FMF) 25% PROBABILITA DI GENERARE UN FIGLIO AFFETTO DA FMF 50% PROBABILITA DI GENERARE UN FIGLIO PORTATORE DI MUTAZIONE FMF

17 UN GENITORE AFFETTO DA FMF O PORTATORE DI UNA MUTAZIONE SE L ALTRO GENITORE E SANO, POTREBBE ESSERE PORTATORE SE IL TEST GENETICO PER FMF RISULTASSE NEGATIVO LA PROBABILITA DI GENERARE UN FIGLIO AFFETTO DA FMF NON E 0%, MA COMUNQUE MOLTO BASSA...