Indagine scientifica ed informazione veterinaria
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1 Indagine scientifica ed informazione veterinaria Results Test su 150 ceppi clinici di origine canina indica che Otodine è attivo verso tutti i microrganismi associati con otite canina Luca Guardabassi Assistant Professor of Clinical Microbiology, University of Copenhagen (Denmark)
2 Scientific Investigation and Veterinary information Results Test su 150 ceppi clinici di origine canina indica che Otodine è attivo verso tutti i microrganismi associati con otite canina Luca Guardabassi Assistant Professor of Clinical Microbiology, University of Copenhagen (Denmark) Otodine è un antisettico auricolare contenente clorexidina digluconato e acido etilendiamminotetracetico-trometamina (Tris-EDTA). La clorexidina digluconato esercita attività battericida tramite distruzione della membrana (1). Il Tris EDTA aumenta la permeabilità della membrana nei Gram negativi, potenziando così gli effetti di vari agenti antimicrobici, incluso gli antisettici e gli antibiotici (2-3). La combinazione delle due sostanze ha come risultato un effetto sinergico, consentendo l uso di dosi più bassi di clorexidina e quindi non ototossiche (4-6). L attività antimicrobica di Otodine è stata valutata testando un ampia collezione di ceppi patogeni associati all otite canina. La collezione era composta da 150 ceppi clinici appartenenti a Corynebacterium auriscanis (n=12), Escherichia coli (n=12), Malassezia pachydermatis (n=9), Proteus mirabilis (n=11), Pseudomonas aeruginosa (n=19), Staphylococcus aureus (n=22), Staphylococcus pseudintermedius (n=53) and Streptococcus canis (n=12). Le diluizioni di Otodine, risultanti nella completa uccisione dei microrganismi testati sono state determinate con il metodo delle microdiluizioni in brodo (8). Brevemente, ogni ceppo è stato incubato per 30 minuti a 37 C in duplici diluizioni seriali di Otodine nel brodo Mueller-Hinton e i ceppi sopravvissuti sono stati determinati trasferendo un aliquota di ogni diluizione dentro appropriato agar medium.
3 Results Attività sui batteri Gram-negativi Tutti i ceppi Gram-negativi eccetto uno sono stati completamenti uccisi alla diluizione 1:8 di Otodine. P. mirabilis è stata la specie più resistente, mentre C. auriscanis è stata la più suscettibile. P. aeruginosa e E. coli hanno mostrato livelli intermedi di suscettibilità. Ceppi appartenenti a queste due specie sono stati eliminati alla diluzione di 1:16 del prodotto (Tabella 1). Attività sui batteri Gram-positivi I ceppi Gram-positivi sono stati eliminati alla diluizione di 1:16. S. pseudintermedius e S. canis sono stati molto più suscettibili di S. aureus e diluizioni di 1:64 sono state generalmente sufficienti a uccidere ceppi appartenenti a queste due specie. Non sono state osservate significative differenze fra stafilococchi meticillino-resistenti e stafilococchi meticillino-suscettibili (Tabella 2). Attività su lieviti Sorprendentemente, in aggiunta all attività antibatterica verso entrambe le specie, Gram-positivi e Gram-negativi, Otodine ha mostrato una eccellente attività fungicida verso M. pachydermatis. Tutti i ceppi testati sono stati completamente uccisi alle diluizioni di 1:32 del prodotto (Tabella 3). Ghibaudo Osservazioni conclusive A mia conoscenza, questo è stato il primo studio di valutazione dell attività antimicrobica di un antisettico auricolare commerciale verso una ampia collezione di ceppi clinici isolati da cani, inclusi batteri multiresistenti come gli stafilococchi meticillino-resistenti. Otodine ha dimostrato di essere attivo in vitro verso qualsiasi microrganismo patogeno implicato nell otite canina, compresi i Gram-positivi multi-resistenti e i batteri Gramnegativi ma anche anche verso M. pachydermatis. Tale ampio spettro di attività antimicrobica è particolarmente vantaggioso nel trattamento dell otite esterna poiché questa malattia coinvolge spesso diversi microrganismi. Ciascuno dei 150 ceppi testati è stato completamente ucciso dopo 30 min. di esposizione alle diluizioni di 1:4 di Otodine o superiori, inoltre risultati comparabili sono stati ottenuti riducendo il tempo di esposizione a 10 minuti. Poichè concentrazioni simili o più elevate sono probabilmente ottenute in vivo con le applicazioni di Otodine nel canale auricolare infetto, è ragionevole concludere che questo prodotto può essere usato con successo per trattare qualunque caso di infezione auricolare. E interessante notare che gli stafilococchi meticillino-resistenti e quelli meticillinosuscettibili sono attaccati da Otodine allo stesso modo. La combinazione di clorexidina digluconato e Tris-EDTA è efficace verso gli stafilococchi meticillino-resistenti, che notoriamente sono resistenti a antibiotici multipli e rappresentano un serio problema terapeutico (8). Inoltre, questa associazione non sembra facilitare la selezione e la diffusione di questi batteri dannosi. I risultati di questo studio indicano che la formulazione di Otodine può essere un valido strumento terapeutico per combattere la recente emergenza di stafilococchi meticillino-resistenti in dermatologia veterinaria.
4 Scientific Investigation and Veterinary information Results References 1. Kuyyakanond T, Quesnel LB. The mechanism of action of chlorhexidine. FEMS Microbiology Letters 1992; 79: Lambert RJW, Hanlon GW, Denyer SP. The synergistic effect of EDTA/antimicrobial combinations on Pseudomonas aeruginosa. Journal of Applied Microbiology 2004; 96: Farca AM, Piromalli G, Maffei F, Re G. Potentiating effect of EDTA-Tris on the activity of antibiotics against resistant bacteria associated with otitis, dermatitis and cystitis. Journal of Small Animal Practice 1997; 38: Mills PC, Ahlstrom L, Wilson WJ. Ototoxicity and tolerance assessment of a TrisEDTA and polyhexamethylene biguanide ear flush formulation in dogs. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics 2005; 28: Ghibaudo G, Cornegliani L, Martino P. Evaluation of the in vivo effects of Tris-EDTA and chlorhexidine digluconate 0.15% solution in chronic bacterial otitis externa: 11 cases. Veterinary Dermatology 2004; 15: Merchant SR, Neer TM, Tedford BL, et al. Ototoxicity assessment of a chlorhexidine otic preparation in dogs. Prog Vet Neurol 1993; 4: Swinney A, Fazakerley J, McEwan N, Nuttall T. Comparative in vitro antimicrobial efficacy of commercial ear cleaners. Journal of Veterinary Dermatology 2008; 19: Loeffler A, Linek M, Moodley A, Guardabassi L, Sung JML, Winkler M, Weiss R, Lloyd DH.. First report of multiresistant, meca-positive Staphylococcus intermedius in Europe: 12 cases from a veterinary dermatology referral clinic in Germany. Veterinary Dermatology 2007; 18:
5 Table Tabella 1. Diluizioni di Otodine con conseguente abbattimento completo di batteri Gram-negativi. Ceppo Specie 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1 Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Proteus mirabilis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis Corynebacterium auriscanis completo abbattimento (nessuna crescita) + inibizione parziale (1-100 colonie) ++ nessun effetto (vistosa crescita)
6 Tabella 2. Diluizioni di Otodine con conseguente abbattimento completo di batteri Gram-positivi. Table Ceppo Specie a 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1 Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Streptococcus canis Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MS Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus pseudintermedius MR Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MS Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR Staphylococcus aureus - MR a MS, meticillino-suscettibile; MR, meticillino-resistente. - completo abbattimento (nessuna crescita) + inibizione parziale (1-100 colonie) ++ nessun effetto (vistosa crescita)
7 Table Tabella 3. Diluizioni di Otodine con conseguente abbattimento completo di lieviti. Ceppo Specie 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1 Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis Malassezia pachydermatis completo abbattimento (nessuna crescita) + inibizione parziale (1-100 colonie) ++ nessun effetto (vistosa crescita) Luca Guardabassi Assistant Professor of Clinical Microbiology, University of Copenhagen (Denmark)
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