PSA. ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti PSA
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- Faustina Ceccarelli
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1 ISTRUZIONI PER L USO VITROS Immunodiagnostic Products Confezione dei reagenti PSA PSA Impiego Per la misura quantitativa in vitro del PSA nel siero e nel plasma (EDTA o eparina) umani. Compendio e spiegazione del dosaggio Il cancro alla prostata è il secondo tipo di cancro riscontrato più comunemente negli uomini, e ricorre nel 50% degli individui che hanno superato i 70 anni 1,2. Come altri tipi di cancro, viene curato con maggiori probabilità di successo se la diagnosi è precoce. Il PSA (antigene prostatico specifico) è una glicoproteina che presenta un peso molecolare approssimativo di Dalton 3. Si trova nei tessuti prostatici maligni e iperplastici benigni normali ma anche nel liquido prostatico e nel liquido seminale 4. Il PSA nel siero esiste in forme differenti. Solo il PSA libero e quello complessato alfa-1chimotripsiana (ACT) sono immunologicamente attivi. Il dosaggio PSA VITROS misura il PSA totale (PSA libero e PSA complessato ACT). Elevate concentrazioni di siero PSA si riscontrano negli uomini affetti da cancro alla prostata, ipertrofia prostatica benigna o malattie infiammatorie di altri tessuti dell apparato urogenitale adiacente, ma apparentemente non nel maschio in salute o nel maschio affetto da cancro diverso dal cancro alla prostata 5. La misura delle concentrazioni di siero PSA non è consigliata come procedura di screening per la diagnosi del cancro. Tuttavia, se combinata con altri dati clinici, la misura del PSA è utile nella diagnosi del cancro alla prostata, nel rilevare precocemente le ricadute e nel monitoraggio della terapia. Principi della procedura Il dosaggio PSA VITROS misura in modo equimolare il PSA libero e quello complessato ACT. Il dosaggio PSA VITROS viene eseguito utilizzando la Confezione di reagenti PSA VITROS e i calibratori PSA per prodotti immunodiagnostici VITROS sul sistema immunodiagnostico VITROS. Viene utilizzata una tecnica immunometrica, che implica la reazione contemporanea del PSA presente nel campione con gli anticorpi biotilinati (entrambi anti-psa monoclonale di ratto) e un coniugato dell anticorpo marcato con HRP (anti-psa policlonale di capra). L antigene-anticorpo complesso viene catturato nei pozzetti dalla streptavidina, il materiale non legato viene rimosso mediante lavaggio. Il coniugato con perossidasi da rafano legato viene misurato mediante reazione luminescente 6. Un reagente contenente substrati luminogenici (derivato del luminolo e sale peracido) ed un agente di trasferimento di elettroni, viene aggiunto ai pozzetti. La perossidasi da rafano nel coniugato legato catalizza l ossidazione del derivato del luminolo, dando origine a produzione di luce. L agente di trasferimento di elettroni (acetanilide sostituita) provoca un aumento del livello di luce prodotta prolungandone l emissione. I segnali luminosi vengono letti dal Sistema VITROS. Il quantitativo di coniugato con perossidasi da rafano legato è direttamente proporzionale alla concentrazione di PSA presente. Avvertenze e precauzioni Solo per uso diagnostico in vitro AVVERTENZA: Materiale Potenzialmente Infettivo Si raccomanda di usare la dovuta cautela nel maneggiare i campioni di origine umana. Tutti i campioni sono da considerare come potenziale fonte di infezione. Nessun metodo sperimentale può garantire con assoluta certezza l assenza del virus dell epatite B, del virus dell epatite C, dell HIV 1+2 o di altri agenti infettivi. Campioni e componenti del dosaggio devono essere manipolati, conservati ed eliminati in forma solida o liquida in conformità alle procedure dettate dalle relative direttive e normative nazionali in materia di sicurezza biologica (per es. Direttiva M29 del NCCLS 7 ). AVVERTENZA: Contiene 2-Cloroacetammide Il reagenti contenente 2-Cloroacetammide. R43: Può provocare sensibilizzazione per contatto con la pelle. S24: Evitare il contatto con la pelle. S37: Usare guanti adatti. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1115_IT 1
2 PSA ISTRUZIONI PER L USO Materiali forniti Materiali forniti 1 confezione dei reagenti contenente: 100 pozzetti rivestiti (streptavidina, lega 3 ng biotina/pozzetto). 8,7 ml di reagente coniugato (HRP- anti-psa policlonale di capra, lega 40,5 ng PSA/mL) in soluzione tampone con agente antimicrobico. 8,7 ml di reagente anticorpo biotinilato (due anticorpi anti-psa monoclonale biotina di ratto, lega 40,5 ng PSA/mL) in soluzione tampone con agente antimicrobico. NOTA: Contiene albumina di siero bovino e gammaglobulina bovina. Materiali richiesti, ma non forniti nel kit Sistema VITROS per immunodiagnostica oltre ai seguenti prodotti immunodiagnostici VITROS: Calibratori per PSA (comprese scheda di calibrazione lotti e scheda e dei protocolli), reagente di segnale, reagente di lavaggio universale, diluente per campioni ad elevata concentrazione B, contenitore per la conservazione delle confezioni di reagenti (opzionale) con essiccante. Preparazione e conservazione dei reagenti La confezione dei reagenti viene fornita pronta per l uso. Conservare i reagenti in condizioni integre a 2-8 C. Non congelare. Una volta aperta, utilizzare la confezione dei reagenti entro 8 settimane dal primo caricamento sul sistema. Non usare oltre la data di scadenza. Conservare le confezioni di reagenti aperte direttamente sul sistema o a 2-8 C in apposito contenitore ermetico per la conservazione delle confezioni di reagenti sigillati con essiccante a secco. I calibratori per PSA VITROS vengono forniti pronti per l uso. Conservare i calibratori in condizioni integre a 2-8 C. Non usare oltre la data di scadenza. Dopo l apertura conservare per un massimo di 12 settimane a 2-8 C o di 12 settimane a -20 C (è ammesso un solo ciclo di congelamento-scongelamento). Preparazione del paziente Non è necessaria alcuna preparazione specifica del paziente. Raccolta, preparazione e conservazione dei campioni Si possono usare campioni di siero o plasma (EDTA o eparina). Per la raccolta dei campioni ematici attenersi a procedure standard. I campioni di siero o plasma possono essere conservati fino ad un massimo di 7 giorni a 2-8 C o di 4 settimane a -20 C. Evitare congelamenti e scongelamenti ripetuti. Si è riscontrato che alcuni dispositivi di prelievo del campione biologico hanno determinato alterazioni all integrità di determinati analiti provocando interferenze nella determinazione analitica 8. Considerata la varietà di dispositivi per la raccolta dei campioni disponibili in commercio, la Ortho-Clinical Diagnostics non è in grado di definire con assoluta certezza le prestazioni dei propri prodotti con tutti i diversi dispositivi. Si raccomanda pertanto che i singoli utilizzatori verifichino che il sistema di prelievo da loro adottato venga usato nel rispetto delle istruzioni della Casa produttrice e sia compatibile con il sistema VITROS. Note sul controllo di qualità e sulla procedura Maneggiare la confezione dei reagenti con cura evitando la formazione di condensa sulla scatola, evitando la formazione di schiuma nei reagenti ed infine cercando di non agitare la scatola stessa. La calibrazione è specifica per i singoli lotti. Le confezioni di reagenti e i calibratori corrispondenti sono identificabili dal numero di lotto. Le confezioni di reagenti dello stesso lotto possono utilizzare la medesima calibrazione, che dev essere effettuata con calibratori aventi lo stesso numero di lotto. Mescolare perfettamente i campioni, i calibratori e i controlli per inversione e portarli a C prima dell uso. Manipolare i campioni, calibratori e controlli in contenitori chiusi al fine di evitare contaminazione ed evaporazione. Per evitare l evaporazione, limitare il numero di campioni, calibratori e controlli presenti sul sistema VITROS. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Dopo l uso, devono essere tempestivamente riportati a 2-8 C. In alternativa è possible utilizzarne un aliquota sufficiente ad una singola determinazione. I calibratori possono essere aliquotati in altri contenitori resi identificabili mediante le etichette con codice a barre fornite nel kit. Verificare periodicamente il materiale a disposizione assicurando la corretta gestione dei reagenti e la disponibilità di lotti di reagenti di Segnale, Reagenti di Lavaggio Universale e Reagenti calibrati sufficienti a condurre le analisi programmate. Dovendo eseguire una serie di dosaggi su un singolo campione, è opportuno accertarsi che il volume di campione sia sufficiente ad effettuare i dosaggi richiesti. 2 Pubb. n. GEM1115_IT Versione 1.0
3 ISTRUZIONI PER L USO Procedura PSA La buona prassi di laboratorio prevede l esecuzione di controlli ai fini della verifica delle prestazioni del dosaggio eseguito. I Controlli per Oncologia VITROS contengono 3 livelli utili di PSA (basso, medio e alto). Si raccomanda di eseguire i controlli contestualmente all esecuzione di una calibrazione e, successivamente, almeno una volta ogni 24 ore e dopo l esecuzione delle procedure di controllo previste (Cfr. la Guida dell operatore del sistema VITROS). Se le procedure di controllo di qualità interne richiedono un uso più frequente dei controlli, è opportuno attenersi alle procedure previste. Per maggiori informazioni vedere la Guida dell operatore del sistema VITROS. Il nome predefinito del dosaggio che appare sul referto del paziente è PSA L abbreviazione predefinita che appare sui menu di selezione dei dosaggi e sui referti di laboratorio. Se necessario è possibile riconfigurare questi valori predefiniti. I risultati possono essere espressi come ng/ml o µg/l. Tali opzioni sono configurabili dalla videata di configurazione degli analiti nelle Opzioni e Configurazioni. I campioni di siero o plasma (EDTA o eparina) con valori superiori all intervallo di calibrazione possono essere diluiti fino a 1/20 con diluente per campioni ad elevata concentrazione B precedentemente al dosaggio. Fare riferimento al foglietto illustrativo del diluente per campioni ad elevata concentrazione B. Procedura Il dosaggio per PSA VITROS richiede 15 µl di campione, calibratore o controllo per una determinazione singola, indipendentemente dal volume minimo di riempimento del contenitore per campioni utilizzato. Il dosaggio per PSA VITROS dev essere calibrato ogni volta si usi un nuovo lotto di reagenti e, successivamente, ad intervalli di 28 giorni. Il dosaggio per PSA VITROS dev essere calibrato anche dopo l esecuzione di alcune procedure di controllo oppure se i risultati del controllo qualità differiscono molto dal range accettabile. Per informazioni più dettagliate sul funzionamento del sistema si veda la Guida dell Operatore del Sistema immunodiagnostico VITROS, capitoli 4-7. In breve: 1. Effettuare la scansione della scheda dei protocolli per caricare un nuovo protocollo di analisi sul sistema a questo punto viene visualizzato il pulsante relativo alle diverse determinazioni sulla videata di programmazione dei campioni. Effettuare la scansione della scheda di calibrazione dei lotti per ogni nuovo lotto di reagenti per immettere i dati di scadenza e di calibrazione specifici per quel lotto. 2. Aprire la busta e prelevare la confezione dei reagenti. Caricare la confezione sull unità di autocaricamento o utilizzare il pulsante di scarico/carico nella videata di gestione dei reagenti (visualizzazione per reagente). NOTA: Non utilizzare prodotti danneggiati o non sigillati perfettamente. 3. Caricare i campioni nei settori portacampioni universali usando, se necessario, appositi adattatori (volendo, si possono identificare i campioni con codici a barre). Collocare un puntale monouso accanto ai singoli campioni e caricare i settori sul sistema. Definire i programmi dei campioni tramite la videata di programmazione dei campioni. Avviare la funzione di campionamento. Tutte le fasi di campionamento vengono effettuate automaticamente. 4. Processare i calibratori analogamente ai campioni. Non è necessario programmare la calibrazione se si usano etichette con codici a barre. Caricare i calibratori nell ordine voluto: la calibrazione parte automaticamente. Risultati Per costruire la curva di calibrazione principale codificata sulla scheda di calibrazione dei lotti si usa una funzione di aggiustamento di curva logistica a quattro parametri modificata. Il processo di calibrazione riposiziona la curva di calibrazione principale definendo una curva valida che viene memorizzata per il sistema. Per maggiori informazioni leggere le istruzioni per l uso dei calibratori. I risultati vengono calcolati automaticamente dal Sistema VITROS. Controllo di qualità I risultati di calibrazione vengono confrontati con un range di parametri di che appaiono in dettaglio nella videata dei parametri di calibrazione alla quale si accede dalle Opzioni e Configurazioni (videata di revisione/calibrazioni utente). Se non vengono rispettati tutti i range dei parametri di qualità definiti, sul rapporto di calibrazione appare un codice d identificazione. Per le operazioni da eseguire successivamente ad una calibrazione non andata a buon fine si veda il capitolo 8 della Guida dell Operatore (Revisione dei risultati). I valori dei campioni dei pazienti che non rientrano nell intervallo di riferimento vengono identificati con un codice elevato HI. I valori dei controlli vengono identificati se 2 DS rispetto alla media della linea di base definita. Non esistono parametri individuali in grado di descrivere completamente la qualità dell aggiustamento della curva. Il rapporto di calibrazione dev essere utilizzato in abbinamento a valori di controllo ai fini della determinazione della validità della calibrazione. Se i risultati di controllo differiscono di molto dal range accettabile, indagarne la causa prima di decidere se annotare i risultati del paziente. Versione 1.0 Pubb. n. GEM1115_IT 3
4 PSA ISTRUZIONI PER L USO Limiti della procedura Limiti della procedura I risultati ottenuti con questo o altri kit diagnostici devono essere utilizzati ed interpretati esclusivamente nel contesto del quadro clinico generale. I diversi metodi di dosaggi non possono essere utilizzabili in modo intercambiabile. L antigene prostatico specifico presente nel campione di un paziente, campione determinato per mezzo di dosaggi diversi e provenienti da diversi produttori, può variare a causa di differenze nei metodi del dosaggio e della specificità del reagente. Un cambio di dosaggio durante l analisi del paziente deve essere accompagnato da sequenze aggiuntive di test per confermare i valori di base. I risultati presentati dal laboratorio al medico devono menzionare il nome del PSA dosaggio utilizzato. Risultati di test in serie ottenuti grazie ai saggi PSA VITROS, in pazienti clinicamente sani, andranno utilizzati di concerto con tutte le informazioni rilevanti derivate dai test diagnostici, da esami fisici, e da un anamnesi completa secondo le procedure di cura del paziente d uopo. Gli anticorpi eterofili nei campioni di siero o di plasma possono provocare interferenze negli immunodosaggi 9. Questi anticorpi possono essere presenti nei campioni di sangue provenienti da individui a contatto con animali o che sono stati curati con prodotti derivati da siero animale. I risultati che sono contraddittori con le osservazioni cliniche indicano che sono necessari altri test. I campioni contenenti trioleina (22,6 mmol/l) o bilirubina (0,342 mmol/l) interferiscono con questo dosaggio in ragione di meno del 5%. Non usare campioni torbidi. I livelli di biotina nel siero restano elevati fino a 24 ore dopo somministrazione orale o endovenosa di biotina. I campioni contenenti 10 ng di biotina/ml interferiscono in ragione di meno del 5%. L'emoglobina può interferire con il dosaggio VITROS PSA. Con un livello di PSA 0,03 ng/ml, l'emoglobina a 200, 400 e 600 mg/dl ha causato rispettivamente uno scostamento positivo di 0,118, 0,270 e 0,390 ng/ml. Unità = ng/ml Interferente Concentrazione di interferente Conc. analita* Scostamento** Emoglobina 0,124 mmol/l 200 mg/dl 0,03 0,118 Emoglobina 0,248 mmol/l 400 mg/dl 0,03 0,270 Emoglobina 0,372 mmol/l 600 mg/dl 0,03 0,390 * Concentrazione media del test con due lotti di reagente. ** Stima della differenza media osservata. In campioni fino a ng/ml non è stato rilevato alcun decremento improvviso del dosaggio. Valori attesi Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire il proprio intervallo di riferimento. Per avere un indicazione, il 99,2% dei valori dei saggi PSA VITROS sono risultati uguali a o minori di 4 ng/ml in una ricerca condotta su 367 campioni di maschi normali. Su 182 campioni di pazienti affetti da cancro alla prostata, 94 campioni presentavano valori del dosaggio PSA VITROS al di sopra di 4 ng/ml. Tabella 1: Distribuzione dei valori relativi al dosaggio PSA VITROS N <4 >4 Maschi 40 anni Maschi >40 anni Malattie non maligne Ipertrofia prostatica benigna (BPH) Prostatite Urogenitale Renale Cirrosi Malattie maligne* Prostata Stadio A Stadio B Stadio C Stadio D Urogenitale * Pazienti sottoposti e terapia e non Unità = ng/ml 4 Pubb. n. GEM1115_IT Versione 1.0
5 ISTRUZIONI PER L USO Prestazioni metodologiche PSA Prestazioni metodologiche Calibrazione e modalità per ricostruirla La scala di calibrazione del dosaggio PSA VITROS va da 0 a 100 ng PSA/mL (ricavabile da calibratori di riferimento interni che sono stati avvalorati per essere messi in correlazione con un altro dosaggio disponibile in commercio). I valori del dosaggio PSA sono espressi in ng/ml. Accuratezza Si è ottenuta una correlazione tra il dosaggio PSA VITROS e un dosaggio del commercio (X) misurando un pannello di 293 campioni di pazienti appartenenti a diverse categorie cliniche. Il range di campioni utilizzato andava da 0,002-93,7 ng/ml con dosaggio PSA VITROS a 0-96,0 ng/ml con il dosaggio del commercio: Dosaggio PSA VITROS = 0,984 x X - 0,193 (ng/ml), con coefficiente di correlazione di 0,992. Precisione La precisione è stata valutata secondo il protocollo EP5-T2 10 del National Committee for Clinical Laboratory Standards. Due replicati di ognuna delle 3 controlli sono stati dosati in 2 differenti occasioni ogni giorno per 20 giorni. L esperimento è stato eseguito due volte usando 2 lotti di reagenti differenti su Sistemi differenti. I dati presentati sono rappresentativi delle prestazioni del prodotto. Tabella 2: Precisione Concentrazione Intra-dosaggio Intracalibrazione Intralaboratorio tipica ng/ml DS* CV(%)* DS* CV(%)* DS* CV(%)* 0,444 0,009 2,0 0,025 5,9 0,034 7,2 4,12 0,046 1,2 0,174 4,4 0,183 4,3 49,9 0,904 1, 9 2,08 4,3 1,85 3,6 * Quadratica media Intra-dosaggio: Precisione fra un duplicato e l altro, con media ottenuta su tutti i replicati. Intracalibrazione: Precisione totale, con componenti ponderati di variazione infra-replica, fra una replica e l altra e da un giorno all altro. Intralaboratorio: Misura dell effetto della ricalibrazione sulla precisione totale, calcolata nell ambito di un singolo lotto di reagenti, utilizzando dati di 4 calibrazioni. Sensibilità La sensibilità analitica viene definita come la concentrazione di 2 deviazioni standard rispetto alla media di un campione che non contiene analiti, dove vengono determinati 20 replicati. Tipicamente, la sensibilità del dosaggio PSA VITROS è 0,03 ng/ml. La sensibilità funzionale viene definita come la concentrazione che corrisponde al 20% del coefficiente di variazione tra un dosaggio e l altro rispetto al profilo della dose di precisione 11. La sensibilità funzionale del dosaggio PSA VITROS è stata calcolata per un singolo intervallo calibrazione di 28 giorni. Utilizzando una matrice di siero umano, la sensibilità funzionale è risultata complessivamente di 0,1 ng/ml. Bibliografia 1. Scott R et al.: Carcinoma of the prostate in elderly men: Incidence, growth characteristics and clinical significance. Journal of Urology 101: (1969). 2. Silverberg E. CA-A Cancer Journal for Clinicians 32: (1982). 3. Wang MC et al.: Purification of a human prostate specific antigen. Invest. Urology 17: (1979). 4. Wang E. et al.: Prostate antigen: A new potential marker for prostatic cancer. The Prostate 2: (1981). 5. Papsidero LD. et al.: A Prostatic antigen in sera of prostatic cancer patients. Cancer Research 40: (1980). 6. Summers M et al.: Luminogenic Reagent Using 3-Chloro 4-Hydroxy Acetanilide to Enhance Peroxidase/Luminol Chemiluminescence. Clin Chem 41. S73 (1995). 7. NCCLS. Protection of laboratory Workers from Instrument biohazards and Infectious Diseases Transmitted by Blood, Body Fluids and tissue; Approved guideline-second Edition. NCCLS Document M29-A2 (ISBN ). NCCLS, Wayne, PA ; Calam RR.: Specimen Processing Separator Gels: An Update. J Clin Immunoassay 11: (1988). 9. Levinson, SS.: The Nature of Heterophilic Antibodies and Their Role in Immunoassay Interference. J Clin Immunoassay 15: (1992). 10. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Order Code EP5-T2 (1992). 11. Spencer CA et al.: Interlaboratory/Intermethod differences in functional sensitivity of Immunometric assays of Thyrotropin (TSH) and impact on reliability of measurement of subnormal concentrations of TSH. Clinical Chemistry 41: (1995). Versione 1.0 Pubb. n. GEM1115_IT 5
6 PSA ISTRUZIONI PER L USO Glossario dei simboli Glossario dei simboli 6 Pubb. n. GEM1115_IT Versione 1.0
7 ISTRUZIONI PER L USO Revisioni PSA Revisioni Data revisione Versione Modifiche tecniche apportate* Nuovo formato, tecnicamente equivalente a PIGEM1115/102.0 con le seguenti variazioni minori: Sezione Simboli usati sostituita dalla tabella Glossario dei simboli Aggiunta la casella per la firma della sezione Revisioni * Le barre delle modifiche indicano la posizione del testo aggiornato rispetto alla versione precedente del documento. Quando le presenti Istruzioni per l uso saranno sostituite da quelle aggiornate, apporre la propria firma e la data e conservare in base alle direttive locali o ai regolamenti del laboratorio. Firma Data Versione 1.0 Pubb. n. GEM1115_IT 7
8 PSA ISTRUZIONI PER L USO Condizioni di fornitura: tutte le forniture sono soggette ai termini e alle condizioni di vendita della ditta Ortho-Clinical Diagnostics e dei suoi distributori. Copie di tali condizioni saranno disponibili su richiesta. Forniti da: Fujirebio Diagnostics, Inc. Malvern, PA, USA 0459 Ortho-Clinical Diagnostics Johnson & Johnson Holmers Farm Way High Wycombe Buckinghamshire HP12 4DP United Kingdom VITROS è un marchio di Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Ortho-Clinical Diagnostics, Inc., Pubb. n. GEM1115_IT Versione 1.0
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