Nucleo Compartimento limitato da membrana che contiene il materiale genetico L organello più grande Solo negli

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Bernadetta Raimondi
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1 Nucleo Compartimento limitato da membrana che contiene il materiale genetico L organello più grande Solo negli EUCARIOTI

2 Cellula Interfasica Cromatina Nucleolo Involucro nucleare Doppia membrana Pori Matrice Nucleare /Nucleoplasma

4 Cromatina Associazione di DNA e proteine Responsabile della colorazione basofila [basofilia: colorazione di molecole biologiche acide (presenza di gruppi acidi) con coloranti basici] Proteine istoniche e non- istoniche Eterocromatina Cromatina Inattiva Eucromatina Cromatina Attiva

5 Cromatina Inattiva Eterocromatina Condensata, elettrondensa Facilmente osservabile in cellule che non sintetizzano attivamente proteine o che producono un numero ristretto di proteine Linfociti, spermatozoi, plasma cellule

6 Eterocromatina (H)

7 neuroni dei gangli spinali Cromatina rilassata DNA viene trascritto Eucromatina Colorazione chiara in Micr. ottica e elettr. Osservabile in cellule con attiva sintesi proteica Neuroni, Fegato

8 DNA nel nucleo: cromosomi Lunghe molecole lineari di DNA associate a proteine CROMOSOMI n:23 (22 somatici, 1 sessuale) CELLULE APLOIDI: 1n CELLULE DIPLOIDI: 2n Nelle cellule diploidi una serie di 23 cromosomi viene dal padre e l altra serie di 23 cromosomi dalla madre Lunghezza di un cromosoma: Da 50 a 250 milioni di paia di basi (nucleotidi) Da 1,7 a 8,5 cm di lunghezza lineare Quindi in un nucleo (diametro medio 5-10 µm) ci sono circa 2 metri di DNA

9 Nucleosomi Otto molecole istoniche formano un ottamero 2 molecole di H2A 2 molecole di H2B 2 molecole di H3 2 molecole di H4 146 bp di DNA arrotolate intorno all'ottamero

10 Nucleosomi

11 Istone H1 Stabilizza il nucleosoma e il legame tra gli nucleosomi

12 Fibre di cromatina

13 Organizzazione del DNA in cromatina

Coinvolgimento di proteine non istoniche a formare un supporto che organizza le fibre di cromatina Video In interfase l eucromatina è nella forma di fibre da 30 nm, organizzati in anse

14 Coinvolgimento di proteine non istoniche a formare un supporto che organizza le fibre di cromatina Video In interfase l eucromatina è nella forma di fibre da 30 nm, organizzati in anse contenenti circa 50 a 100 kb di DNA. Circa il 10% della eucromatina, contenente i geni attivamente trascritti, è in uno stato più decondensato (la conformazione a 10-nm) che ne consente la trascrizione.

16 Cromosomi mitotici Letteralmente, corpi colorati La cromatina si condensa in strutture discrete durante la mitosi

17 Cromosomi mitotici Centromero Restringimento +/- centrale DNA satellite, sequenze altamente ripetuto Cinetocore proteico

18 Territori Cromosomici in Interfase DNA dei diversi cromosomi è rilevato tramite ibridazione in situ

19 Corpi di Barr Cromosoma X inattivato nelle femmine Nella maggior parte dei nuclei, sembra una macchia a lato del nucleo Neutrofili, bacchetta di tamburo che penzola da uno dei lobi

20 Altri componenti del nucleo Il DNA costituisce solo il 20% del materiale nucleare, Inoltre il nucleo contiene: - RNA - una grande varietà di proteine, chiamate nucleoproteine. Tutte le nucleoproteine sono sintetizzate nel citoplasma e quindi trasportate nel nucleo.

21 Nucleoproteine associate al DNA Le proteine che legano il DNA sono di due tipi: 1) istoni 2) proteine non-istoniche Le proteine non-istoniche associate al DNA sono un gruppo eterogeneo di proteine che comprendono: - Proteine che organizzano la cromatina - Enzimi responsabili della replicazione del DNA e della sua riparazione - Enzimi responsabili della sintesi dell RNA. - Proteine che regolano l espressione dei geni.

22 RNA Vi sono tre principali tipi di RNA: - RNA messaggero - RNA di trasferimento - RNA ribosomiale L RNA nucleare è quello non ancora trasferito nel citoplasma

23 Trascrizione del DNA in RNA Il Nucleo permette di mantenere separate trascrizione e traduzione. Questo consente di regolare i due eventi in maniera indipendente e di modificare l RNA prima che venga tradotto, aumentando il numero di isoforme prodotte da un gene nucleo citoplasma

Trascrizione del DNA in RNA 1. La cromatina deve essere parzialmente decondensata per permette l accesso degli enzimi al DNA 2. La trascrizione è effettuata da enzimi denominati RNA polimerasi 3.

24 Trascrizione del DNA in RNA 1. La cromatina deve essere parzialmente decondensata per permette l accesso degli enzimi al DNA 2. La trascrizione è effettuata da enzimi denominati RNA polimerasi 3. La trascrizione è regolata da fattori positivi e negativi che legano sequenze regolative dei geni (promotori ed enhancer) 4. L RNA trascritto viene processato (modificazioni, splicing ) prima di essere esportato dal nucleo

25 1) La cromatina deve essere decondensata per permette l accesso degli enzimi al DNA Regolata da cambi nella Metilazione (metilasi), Fosforilazione (chinasi) ed Acetilazione (acetilasi) degli Istoni

26 2) Trascrizione Pol I: RNA ribosomiali, Pol II: RNA messaggeri, Pol III: RNA transfer e 5S ribosomiale

27 3) La trascrizione del RNA è regolata sia positivamente che negativamente da fattori trascrizionali. Questi fattori legano sequenze regolative presenti sul DNA in prossimità della porzione da trascrivere (promotori) o più distalmente (enhancer)

28 4) I RNA messaggeri trascritti vengono processati prima lasciare il nucleo Cappuccio al 5 Poliadenilazione al 3

29 Lo splicing dei RNA messaggeri Spliceosoma

30 Trascrizione dei mrna

31 Trascrizione e processamento dei RNA ribosomiali

32 Nucleolo Sintesi degli rrna Assemblaggio dei ribosomi Molto esteso nelle cellule con attiva sintesi proteica Es.: Cellule secretorie

33 Nucleolo - Masserella granulare e fibrillare dai contorni irregolari non rivestita da membrane - Costituito da parte fibrillare (DNA ed RNA: trascrizione) e parte granulare (RNA e proteine: assemblaggio)

34 Trascrizione dei RNA ribosomali e formazione dei ribosomi

35 Nucleoplasma o Spazio Intercromatinico Materiale interno all involucro nucleare ad esclusione di cromatina e nucleolo Costituito da Proteine, RNA, Metaboliti vari e Fibre che formano la matrice nucleare (una sorta di scheletro nucleare )

36 Involucro Nucleare Doppia membrana con spazio intermembrana Continuo con il RER, da cui si forma Lamina Fibrosa All interno della membrana nucleare Composta da Lamine Filamenti Intermedi classe V Connessa alle fibre della matrice nucleare

37 Lamina Nucleare e Matrice Nucleare

38 Esterno Pori Nucleari Interno

Aperture di 10-40 nm Trasporto nucleocitoplasma bidirezionale Molecole

39 Aperture di nm Trasporto nucleocitoplasma bidirezionale Molecole grandi (>40 Kda) richiedono meccanismi ATP dipendenti per passare Pori Nucleari

40 Pori Nucleari Struttura molto complessa costituita da 50 proteine diverse Nucleoporine: Subunità ad anello Bracci Proteine di ancoraggio Fibre e cesto di fibre Trasportatore

41 Movimento di proteine dal citosol al nucleo Importine

42 Movimento di RNA e proteine dal nucleo al citosol Esportine

43 L attività di importine ed esportine è regolata dalla proteina G Ran. Il legame a RanGTP permette il rilascio dal cargo dalle Importine, mentre le Esportine necessitano di RanGTP per legare il cargo da esportare.

44 Differenze nei Nuclei di diversi tipi cellulari

45 Eritrociti Cellule senza Nucleo Globuli Rossi Nucleo espulso durante l eritropoiesi Non si dividono Pochi altri organelli Diametro di 8-10 µm

Piastrine Formate mediante trombopoiesi Residui della rottura dei Megacariociti Dimensione 1.5-3.

46 Piastrine Formate mediante trombopoiesi Residui della rottura dei Megacariociti Dimensione µm Hanno mitocondri, microtubuli, glicogeno, golgi, lisosomi, granuli specifici per la loro funzione Non si possono dividere

47 Cellule Multinucleate Muscolo Scheletrico Mioblasti > Miotubi Sincizi di centinaia di cellule Centinaia di nuclei nella cellula matura (fibra) Non possono dividersi Nuclei localizzati perifericamente Muscolo cardiaco solo 1 o 2 nuclei

48 Osteoclasti Tessuto Osseo in riassorbimento Cellule attive con molti lisosomi Originano dalla fusione di Monociti e Macrofagi Monociti sono precursori dei Macrofagi Macrofagi fagociti professionali e cellule presentati gli antigeni 5-50 nuclei

49 Cellule Multinucleate derivanti da divisione incompleta della cellula (plasmodi) Epatociti Possono essere binucleati A volte 1 nucleo con un numero di cromosomi superiore a 2n e molti nucleoli Si possono in seguito dividere per Mitosi

50 Epiteli di transizione Megacariociti Fino a 64x il numero di cromosomi Divisione incompleta dei nuclei Precursori delle Piastrine

Nuclei singoli Multi-lobati non sono frutto di divisioni incomplete Leucociti Polimorfonucleati (PMNs) Globuli bianchi granulari Neutrofili, Eosinofili e Basofili Derivano da una

51 Nuclei singoli Multi-lobati non sono frutto di divisioni incomplete Leucociti Polimorfonucleati (PMNs) Globuli bianchi granulari Neutrofili, Eosinofili e Basofili Derivano da una cellula staminale con nucleo più grande Granulopoiesi Forma matura non richiede nucleo così grande Si condensa e forma lobi» 5 lobi in neutrofili» 2 lobi in eosinofili e basofili

52 Neutrofili Basofili Eosinofili

53 Linfociti Nuclei caratteristici Globuli bianchi più piccoli Nucleo rotondo e denso Citoplasma scarso Monociti Nucleo a ferro di cavallo o fagiolo Precursori dei macrofagi

54 Adipociti (bianchi) Nucleo e citoplasma schiacciati alla periferia

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