Apoptosi. Geni espressi Proteine correlate Apoptosi. Induzione. Attività delle Caspasi Identificazione dell apoptosi. Induzione. Kit INDUTTORI CHIMICI

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1 LINEA BIOTECH

2 Apoptosi Geni espressi Proteine correlate Apoptosi Induzione Attività delle Caspasi Identificazione dell apoptosi Induzione INDUTTORI CHIMICI Actinomycin D, Anisomycin, Antibiotic A23187, Betulinic acid, Camptothecin, Carboplatin, Cisplatin, Colchicine, Cycloheximide, Daunorubicin, Dexamethasone, Doxorubicin, Etoposide, Forskolin, Genistein, Okadaic acid, Phorbol-12- myristate 13-acetate, Staurosporine, Tamoxifen, Citrate. ANTICORPI Anti-human Fas, anti-mouse Fas. Kit MEMBRANA CELLULARE I prodotti che si basano sull Annessina V permettono di identificare le modificazioni della conformazione della membrana cellulare. I risultati possono essere analizzati al citofluorimetro o al microscopio a fluorescenza. Annexin V-FITC * Annexin V-EGFP * Annexin V-Cy3 * Annexin V-Cy5 * Annexin V-PE * Annexin V-PE-Cy5 Annexin V-Biotin * Annexin V Unlabeled * Annexin V Binding Buffer * Propidium Iodide. Sono disponibili kit e reagenti. 38

3 Apoptosi ATTIVITÀ DELLE CASPASI L attività delle caspasi può essere analizzata in lisati cellulari o intracellularmente, in cellule vive. I Caspase 1/2/3/5/6/8/9/10 Protease Assay Kit consentono di valutare l attività delle caspasi specifiche in lisati cellulari utilizzando lo spettrofotometro, il fluorimetro o i rispettivi lettori per micropiastre. I CaspSELECT Caspase 3/7 Immunoassay permettono di dosare l attività delle rispettive caspasi in lisati cellulari e omogenati di tessuto utilizzando un lettore di fluorescenza per micropiastre. I CaspGLOW Caspase 3/8/9 Staining Kit identificano le caspasi attivate in situ, in cellule vive. I saggi utilizzano potenti inibitori delle specifiche caspasi coniugati con FITC o rodamina e necessitano il citofluorimetro, il microscopio a fluorescenza o il lettore di fluorescenza per micropiastre. I CaspGLOW Caspase Staining Kit utilizzano un inibitore generico delle caspasi coniugato con FITC o rodamina e permettono di verificare in situ, in cellule vive, la presenza di caspasi attivate. Necessitano il citofluorimetro, il microscopio a fluorescenza o il lettore di fluorescenza per micropiastre. Il CaspSCREEN Caspase Screening Kit permette di identificare in situ, in cellule vive, la presenza di caspasi attivate. Il saggio utilizza un substrato generico delle caspasi e i risultati sono valutati con il citofluorimetro. Sono disponibili:anticorpi contro la forma inattiva/attiva delle caspasi, inibitori e substrati. MITOCONDRI Il MitoCapture kit fornisce un metodo veloce e semplice per valutare i cambiamenti del potenziale transmembrana dei mitocondri e discriminare velocemente tra cellule apoptotiche e cellule sane. I segnali fluorescenti emessi possono essere letti con il citofluorimetro o il microcopio a fluorescenza. Il Cytochrome c Realeasing kit permette di identificare il rilascio del citocromo c dai mitocondri al citosol. Il Cytochrome c ELISA Kit dosa il citocromo c in campioni umani, murini o di ratto. DNA Kit basati sul metodo TUNEL MEBSTAIN Kit Direct incorpora FITC-dUTP nel DNA. MEBSTAIN Kit II incorpora Biotin-dUTP nel DNA che è poi colorato con Avidin-FITC. ApoDIRECT Kit incorpora FITC-dUTP nel DNA e fornisce un tampone con PI/RNasi e cellule controllo positivo e negativo. Apo-BrdU Kit incorpora Br-dUTP nel DNA che è poi colorato con anti-brdu-fitc. Fornisce un tampone con PI/RNasi e cellule controllo positivo e negativo. Apo-BrdU-IHC In Situ Kit incorpora Br-dUTP biotinilato nel DNA che è poi colorato con streptavidina HRP. Kit completo, tra i componenti:vetrini di controllo positivo e negativo, soluzione bloccante e Methyl green counterstain. Frammentazione del DNA visualizzata su gel di agarosio (Ladder) Enhanced DNA Ladder Detection Kit fornisce un metodo veloce e semplice per isolare DNA apoptotico ricco di frammenti di piccole dimensioni. Contiene un colorante per il gel di agarosio che lega il DNA con un affinità 10 volte superiore rispetto all EtBr. 39

4 Apoptosi LIVELLI DI ADP/ATP Il kit utilizza una reazione bioluminescente per valutare i livelli di ADP e ATP in cellule di mammifero. E sensibile (100 cell./pozzetto) e permette di discriminare tra apoptosi, necrosi, proliferazione e arresto della crescita. CONCENTRAZIONE DI FAS/FAS L I Fas/Fas Ligand ELISA kit dosano Fas/Fas L umano/murino in campioni di siero, plasma e sopranatante di colture cellulari. LIVELLI DI GLUTATIONE Il kit utilizza un colorante che emette fluorescenza blu solo dopo il legame con il Glutatione. La variazione dei livelli di Glutatione può essere valutata utilizzando un fluorimetro o un lettore di fluorescenza per micropiastre. PRODUZIONE DI OSSIDO D AZOTO La produzione di ossido d azoto è valutata indirettamente misurando le concentrazioni di nitrito e nitrato che si formano dalla sua ossidazione. Il Nitric Oxide Detection Kit è disponibile nella versione colorimetrica e fluorescente. ESPRESSIONE DI GENI COINVOLTI NELL APOPTOSI L espressione di geni coinvolti nell apoptosi può essere studiata con gli RT-MPCR kit. Questi kit permettono di amplificare, nella stessa reazione di PCR, diversi geni contemporaneamente. L amplificazione di questi geni produce frammenti di lunghezze differenti che possono essere separati facilmente con un elettroforesi su gel di agarosio. Per maggiori dettagli consultare il sito: QUANTIFICAZIONE DELL ESPRESSIONE GENETICA La RT-PCR competitiva è un valido strumento per quantificare l espressione di geni coinvolti nell apoptosi. RT-PCR Competitive Kit sono forniti per numerosi geni. Per maggiori dettagli consultare il sito: Anticorpi Anticorpi funzionanti nelle tecniche più comuni (IHC, WB, IP, IF, CF, ELISA) sono disponibili per analizzare:caspasi, proteine della famiglia di Bcl-2, proteine correlate ai mitocondri, proteine che inibiscono l apoptosi, death receptors, adaptors molecules. Per maggiori dettagli sugli anticorpi consultare il sito: 40

5 Analisi dell espressione genica Multiplex RT-PCR Kit SENSIBILITÀ E RISOLUZIONE DELLA RT-MPCR Gli esperimenti sono stati fatti partendo da RNA isolato da cellule Mo-B (ATCC#CCl-245) Lane 1:MPCR utilizzando cdna ottenuto da 80 µl di RNA Lane 2:MPCR utilizzando cdna ottenuto da 40 µl di RNA Lane 3:MPCR utilizzando cdna ottenuto da 20 µl di RNA Lane 4:MPCR utilizzando cdna ottenuto da 10 µl di RNA DESCRIZIONE La Multiplex RT-PCR (RT-MPCR) combina il potere di amplificazione della PCR con l identificazione di più geni in una singola provetta. Questa tecnologia consente di valutare l espressione relativa di gruppi di geni con variazioni di livelli di espressione pari a 2 volte. Variazioni nell isolamento dell RNA, errori nella quantificazione iniziale o variazioni da provetta a provetta durante la retrotrascrizione e l amplificazione possono essere compensate includendo nella MPCR un gene costitutivo (house-keeping). Differenze nell espressione genica possono essere determinate dopo avere normalizzato l espressione dei geni di interesse contro quella del gene costitutivo. CARATTERISTICHE Utilizzano RNA totale Amplificano più geni contemporaneamente nella stessa reazione Sensibili Specifici I prodotti PCR hanno pesi molecolari differenti e possono essere separati su gel di agarosio colorato con Et-Br Semiquantitativi COMPONENTI 50 reazioni:tampone per RT-MPCR, dntp, miscela di primer per RT-MPCR, controllo positivo, marcatori di peso molecolare H2O * - (* I kit sono disponibili anche nel formato da 100 reazioni) RT-MPCR KIT Apoptosis Pathways - TH1/TH2 Gene Profiling - Cytokines, Chemokines and Receptors - House Keeping Genes Matrix Metalloproteinases Pathways - Nitric Oxide (NO) Metabolism - Signaling Receptor Pathways - Angiogenesis Pathways Cathepsin Family - CD Antigens - Sepsis and Inflammation Pathways - TGF Superfamily - VEGF Family - Telomerase Genes Transcriptional Factors Pathways - TNF Signaling Pathways - Insulin Like Growth Factors and Binding Proteins Apolipoproteins Family - Thrombosis Sono disponibili anche MPCR Kit Ras - HIV - HPV-DMD/BMD - Oncogenes - p53 - H.pylori - Sexual Transmitted Deseases - Respiratory Infections (Bacteria) -Respiratory Infections (Virus) Per maggior dettagli consultare il sito: 41

6 Analisi dell espressione genica Full-length cdna Clone L analisi funzionale del genoma inizia con la disponibilità di cdna full-length del gene di interesse. E offerta una collezione di oltre cloni di cdna full- length di geni umani che rappresenta più del 75% delle sequenze di mrna raccolte dal National Centre for Biotechnology Information (NCBI). I cdna full-length di geni umani sono inseriti in un vettore di clonaggio e possono essere utilizzati per: studi di espressione di geni eterologhi in cellule di mammifero studi di espressione di geni eterologhi in tessuti di topi trasgenici generare proteine ricombinanti per studiare in vitro la loro attività e identificare i loro target (trascrizione/traduzione di sequenze di cdna in appropriati sistemi cell-free) La sequenza e la lunghezza di ciascun clone sono state controllate e confrontate con quelle registrate dal National Centre for Biotechnology Information (NCBI). 42

7 Analisi di proteine Kit per isolare frazioni cellulari Mitochondria/Cytosol Fractionation Cat. # J JM-K saggi Il kit fornisce formulazioni uniche di tamponi e reagenti per isolare frazioni altamente arricchite di mitocondri dal citosol di cellule di mammifero. La procedura non richiede né ultracentrifugazioni né l utilizzo di sostanze tossiche e le frazioni ottenute possono essere usate per analizzare la traslocazione di fattori con differenti metodi, quali:wb, ELISA. Nuclear/Cytosol Fractionation Kit Cat. # J JM-K saggi Il kit fornisce reagenti ottimizzati per separare l estratto nucleare dalla frazione citoplasmatica di cellule di mammifero. Il sistema usato permette di mantenere i compartimenti nucleare e citosolico separati e intatti. Gli estratti ottenuti sono compatibili con saggi quali:saggi reporter, saggi di attività trascrizionale e di attività enzimatica, gel-shift, WB. Plasma Membrane Protein Extraction Kit Cat. # J JM-K saggi Cytosol/Particulate Rapid Separation Kit Cat. # J JM-K saggi Il kit utilizza un protocollo veloce e semplice per estrarre proteine di membrana da cellule e tessuti di mammifero. Con questo kit si possono ottenere estratti di proteine di membrana totali e si possono anche purificare specificamente le proteine della membrana plasmatica Gli estratti purificati con questo kit sono compatibili con applicazioni quali:wb, analisi di enzimi, elettroforesi bidimensionale. Il kit permette di separare la frazione particolata dal citosol. E un utile aiuto per studiare la localizzazione di componenti cellulari. Mammalian Cell Extraction Kit Cat. # J JM-K saggi Il kit fornisce un tampone di lisi cellulare ottimizzato, un cocktail di inibitori di proteasi e DTT per l estrazione di proteine da cellule in coltura e tessuti di mammifero in condizioni non denaturanti. Mitochondrial DNA Isolation Kit J JM-K saggi Il kit permette di isolare DNA mitocondriale (mtdna) da cellule e tessuti con resa e purezza elevate senza contaminazione da DNA genomico. Il mtdna purificato può essere usato in una varietà di studi, quali:manipolazioni enzimatiche, clonaggio, Southern Blotting, PCR. Per maggiori informazioni consultare il sito: 43

8 Analisi di proteine Chinasi KinaseSTAR JNK Activity Screning Kit Cat. # J JM-K saggi Il kit si basa sulla capacità di JNK di fosforilare c-jun. Una proteina di fusione (porzione N- terminale di c-jun e glutatione) coniugata con biglie di sefarosio è utilizzata per isolare JNK da lisati cellulari. L aggiunta di ATP permette a JNK di fosforilare la porzione N-terminale di c-jun sul residuo Ser73. La fosforilazione di c-jun è valutata in western blotting utilizzando un anticorpo anti-fosfo-c-jun. KinaseSTAR Akt Activity Assay Kit Cat. # J JM-K saggi Il kit si basa sulla capacità di Akt di fosforilare GSK-3α. Un anticorpo anti-akt immunoprecipita Akt da lisati cellulari. L attività di Akt è poi determinata in una reazione di fosforilazione che utilizza GSK-3α ricombinante come substrato. La fosforilazione di GSK-3α è analizzata in western blotting uti-lizzando un anticorpo anti-fosfo-akt. AKT/PKB Kinase Inhibitor Screening Assay Kit Cat. # J CY-1168 L'anticorpo policlonale anti-fosfo-serina usato in questo kit riconosce specificamente su Bad la fosforilazione in ser-131. Indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di AKT o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (AKT1 positive control:j CY-E1168-1, AKT2 positive control:j CY-E1168-2) Rho-kinase Assay Kit Cat. # J CY-1160 Disponibile nella versione 384 Il kit permette di misurare l attività delle chinasi della famiglia delle Rho-chinasi o della famiglia DMPK (Myotonic dystrophy protein kinase). Un substrato ricombinante di queste chinasi è immobilizzato su una piastra da 96 pozzetti e la sua fosforilazione sul residuo thr 697 è evidenziata con un anticorpo monoclonale coniugato con HRP. Il kit utilizza lisati cellulari, omogenati di tessuto, frazioni proteiche purificate/semipurificate. E indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di chinasi della famiglia delle Rho-chinasi o della famiglia DMPK, per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi o per monitorare la loro purificazione. Il controllo positivo è fornito separatamente (Rho-kinase positive control:j CY-E1160-1; DMPK positive control:j CY-E1160-2). Cyclic GMP dependent protein kinase (PKG/cGK) Assay Kit Cat. # J CY-1161 Checkpoint kinase Assay/Drug Discovery Kit-1 Assay Kit Cat. # J CY-1162 Il kit consente di misurare l attività delle chinasi della famiglia PKG (Cyclic GMP dependent protein kinase). Un substrato ricombinante di PKG è immobilizzato su una piastra da 96 pozzetti e la sua fosforilazione sui residui thr 68/119 è evidenziata con un anticorpo monoclonale coniugato con HRP. Il kit utilizza lisati cellulari, omogenati di tessuto, frazioni proteiche purificate/semipurificate. E indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di PKG, per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi o per studiare le loro cinetiche. Il controllo positivo è fornito separatamente (PKG positive control, catalytic domain:j CY-E o PKG positive control, full length:j CY-E1161-2). Il kit permette di misurare l attività di chinasi che controllano il ciclo cellulare (checkpoint kinases) quali:chk1, Chk2, C-TAK1 e PLK3. Cdc25C ricombinante è immobilizzato su una piastra da 96 pozzetti e la sua fosforilazione sul residuo ser 216, operata dalle checkpoint kinases, è evidenziata con un anticorpo monoclonale coniugato con HRP. Il kit utilizza frazioni proteiche purificate/semipurificate. E indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di checkpoint kinases o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (Chk1 positive control:j CY- E1162-1, Chk2 positive control:j CY-E1162-2; C-TAK1 positive control:j CY-E1162-3, PLK3 positive control:j CY-E1162-4). 44

9 Analisi di proteine Aurora A Kinase Inhibitor Screening Kit Cat. # J CY-1165 L'anticorpo monoclonale anti-fosfo-serina usato in questo kit riconosce specificamente su Lats2 la fosforilazione in ser-83. Indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di Aurora A o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (Aurora A positive control:j CY-E1165) Cdc2-Cyclin B Assay Kit Cat. # J CY-1164 Il kit misura l'attività della chinasi Cdc2-Ciclina B in lisati cellulari, linee cellulari e omogenati di tessuto. L'anticorpo monoclonale anti-fosfo-treonina usato in questo kit riconosce specificamente su Cdc7 la fosforilazione in treonina 376. Il kit è indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di Cdc2/Cyclin B, monitorare la purificazione di Cdc2/Cyclin B o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su questa chinasi. MAPKAP-Kinase 2 Assay/Inhibitor Screening Kit Cat. # J CY-1166 Il kit misura l'attività della Protein Chinasi 2 attivata dalla MAP chinasi. L'anticorpo monoclonale anti-fosfo-serina usato in questo kit riconosce specificamente su LSP1 la fosforilazione in serina 204. Il kit è indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di MAPKAP- Kinase 2 o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su questa chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (MAPKAP-kinase 2 positive control:j CY-E1166) Polo-like kinase Assay/Inhibitor Screening Kit Cat. # J CY-1163 Il kit misura l'attività della Polo-like kinase 1. L'anticorpo policlonale usato in questo kit riconosce specificamente su una proteina X, substrato di Plk1, la fosforilazione su treonina. Il kit è indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di Plk1 o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su questa chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (Plk1 positive control:j CY-E1163, Plk2 positive control:j CY-E1162-4) Aurora family kinase Assay/Inhibitor Screening Kit Cat. # J CY-1174 Il kit misura l'attività di chinasi della famiglia Aurora (Aurora A, B, C). L'anticorpo monoclonale usato in questo kit riconosce specificamente il residuo di serina fosforilato su un substrato della famiglia Aurora. Il kit è indicato per la ricerca di inibitori/attivatori di Aurora A, B, C o per verificare gli effetti di agenti farmacologici su queste chinasi. Il controllo positivo è fornito separatamente (Aurora A positive control:j CY-E1165, Aurora A positive control:j CY-E1165, Aurora B positive control:j CY-E1174-1, Aurora C positive control:j CY-E1174-2) Per maggiori dettagli su Kit, anticorpi e proteine ricombinanti consultare il sito: 45

10 Analisi di proteine Anticorpi anti-fosfo-proteine DESCRIZIONE CODICE DESCRIZIONE CODICE DESCRIZIONE CODICE P-AFX J JM P-Akt J JM P-AKTide-2T J CY-M1025 (Ser193) (Ser473) (Thr376) P-ATF2 J JM P-Bad J BV P-b-Catenin J JM (Thr69/Thr71) (Ser112) (Ser45) P-CaMK II J JM P-Cdc5C J CY-M1018 P-Cdc7 J CY-M1021 (Thr286) (Ser216) (Thr376) P-c-Jun J JM P-c-Myc J JM P-CPI-17 J CY-M1024 (Ser73) (Thr58/Ser62) (Thr38) P-DNA J M025-3/3S P-ElK-1 J JM P-ElK-1 J JM Topoisomerase II (Ser383) (Ser383) (Thr1342) P-ErK 1/2 J JM P-FAK J JM P-GFAP J D121-3 (Ser660) (Tyr397) (Ser13) P-GFAP J MY-01-3 P-GFAP J D098-3/3S P-GSK3a/b J JM (Ser8) (Thr7) (Ser21/9) P-GSK-3b J JM P-G-Substrate J CY-M1017 P-Histone H2A.X J CY-P1016 (Ser9) (Thr68/119) (Ser139) P-Histone H3 J PM006 P-JKK1/SEK1/MKK4 J JM P-JKK1/SEK1/MKK4 J JM (Ser28) P-JNK/SAPK J JM P-Lats 2 J CY-M1020 P-LCK J JM (Thr183/Tyr185) (Ser83) (Tyr505) P-LSP1 J CY-M1019 P-MAPKAPK-2 J JM P-MBS/MYBT1 J CY-M1011 (Ser204) (Thr334) (Thr697) P-MeK 1/2 J JM P-MLK3 J JM P-MSK1 J JM (Thr292) (Thr277/Ser281) (Thr581) P-p38 MAPK J JM P-p53 J JM P-p53 J K (Thr180/Tyr 182) (Ser15) (Ser315) P-p53 J K0060-3/3S P-PKC J JM P-Raf J JM (Ser392) (Ser660) (Ser259) P-RB J CY-M1012 / M1013 P-RB J M045-3/3S P-RB J 555/555S (Ser612) (Ser780) (Ser780) P-RB J CY-M1015 P-RB J CY-M1014 P-S6-Kinase J JM (Ser807) (Thr356) (Thr389/Thr412) P-STAT1 J JM P-STAT2 J JM P-STAT3 J JM (Thyr701) (Thyr689) (Ser727) P-STAT3 J D P-STAT5 J JM P-STAT6 J JM (Tyr 705) (Thyr694) (Thyr641) P-Syntide-2 J CY-M1023 P-Tau J JM P-TrkA J JM (Ser404) (Tyr490) P-tyr J MH-11-3 P-tyr-FITC J MH-11-4 P-Vimentin J D099-3/3S (Ser33) P-Vimentin J D094-3/3S P-Vimentin J D122-3/3S P-Vimentin J D076-3/3S (Ser38) (Ser50) (Ser55) 46 P-Vimentin J D096-3/3S P-Vimentin J D093-3/3S P-Vimentin J D095-3/3S (Ser6) (Ser71) (Ser82)

11 Analisi di proteine Le proteine fluorescenti CoralHue sono state isolate da corallo. Emettono una fluorescenza stabile e brillante. Sono particolarmente indicate per marcare strutture sub-cellulari, studiare la migrazione di proteine e analisi FRET. CoralHue Monomeric Kusabira-Orange (vettore di espressione) CoralHue Monomeric Kusabira-Green (vettore di espressione) CoralHue Monomeric Kaede (Green to Red after excitation by UV) CoralHue Monomeric Midoriishi-Cyan 100 M ATP Figures are provided courtesy of Dr. A. Miyawaki, RIKEN Institute, Japan. CoralHue Monomeric Azami-Green was fused to the pleckstrin homology domain (PHD) of PLC-d1 to generate mag-phd, and was expressed in Madin-Darby canine kidney (MDCK) epithelial cells. PHD is redistributed from the plasma membrane to the cytoplasm in response to activation of phopholipase C (PLC), or to an increase in the concentration of IP3. transfection with mag-phd clearly outlined the plasma membrane of the transfected cells, and stimulation with 100 M ATP led to significant translocation of mag-phd to the cytosol. Chimeric MiCy/mKO constructed as a specific sensor for caspase-3 activity was expressed in HeLa cells. Following a 1.5-hr exposure to 500 ng/ml anti-fas antibody (CH-11) and 10 mg/ml cycloheximide at 37 C, the Orange/Cyan emission ratio dropped progressively from 1.2 reaching 0.2 immediately prior to the shrinking of cells characteristic of apoptosis. Figures are provided courtesy of Dr. A. Miyawaki, RIKEN Institute, Japan. Kusahira Orange 47

12 Analisi di proteine OPTICAL MARKING OF AN INDIVIDUAL NEURON IN A HIPPOCAMPAL PRIMARY CULTURE. One day after transfection with the cdna of Kaede, the botton neuron was UV-pulsed. After three minutes, the red neuron, together with adjacent green neuron, were imaged simultaneously using confocal microscopy at 488/543-nm excitation and merged. FLUORESCENCE IMAGE OF CELLS USING AG HeLa cells expressing AG FLUORESCENCE IMAGE OF SUBCELLULAR STRUCTURES USING MAG1 HeLa cells expressing mag1 (mitochondria-specific) HeLa cells expressing mag1 (plasma membrane-specific) Excitation/Emission Moler Extinction Fluorescence Number of Quaternary Maxima (nm) Coefficient (M -1 cm -1 ) Quantum Yield ph sensitivity Amino acids structure Azami-G 492/505 72,300 (492 nm) 0.67 pka < 5.0 (ε) 225 Tetramer mag 1 492/505 55,500 (492 nm) 0.74 pka = 5.8 (ε) 225 Monomer MiCy 1 470/495 27,250 (470 nm) 0.90 pka = 6.6 (ε) 232 Dimer Kusabira-O 1 548/561 73,700 (548 nm) 0.45 pka < 5.0 (ε) 218 Dimer MKO 1 548/559 51,600 (548 nm) 0.60 pka = 5.0 (ε) 218 Monomer Kaede (G) 508/518 98,800 (508 nm) 0.80 pka = 5.6 (ε) 225 Tetramer Kaede (G) 572/582 60,400 (572 nm) 0.33 pka = 5.6 (ε) 225 Tetramer NOVEL FLUORESCENTE PROTEINS 48 *Karasawa, T., et al J. Biol. Chem. 278: **Campbell, RE, et al PNAS 99:

13 Condizioni Generali di Vendita 1) ORDINI Gli ordini devono essere completati con: a) ragione sociale ed indirizzo del committente; b) codice fiscale, numero di partita IVA, ragione sociale, indirizzo fiscale valido per l intestazione della fattura (D.P.R n. 605 e successive modificazioni ed integrazioni); c) ragione sociale ed indirizzo de destinatario della merce; d) codice cliente; e) numero e data ordine; f) firma e timbro del committente; g) denominazione del prodotto; h) quantità richiesta; i) estremi di autorizzazione per eventuale riduzione / esenzione dell IVA; l) condizioni di pagamento: diventano vincolanti per le parti qualora EPPENDORF S.r.l. provveda alla spedizione della merce richiesta. Gli ordini dovranno essere inviati alla EPPENDORF S.r.l. Via Zante Milano. Gli ordini potranno essere inviati al ns. fax 02/ In questo caso sull eventuale ordine originale, spedito per posta, Vi preghiamo di riportare la dicitura già trasmesso via fax. 2) PREZZI I prezzi esposti sul presente listino sono in Euro ( ) ed al netto di IVA. Per le forniture verranno ritenuti validi i prezzi in vigore al momento della spedizione. 3) ACQUISTO MINIMO Potranno essere evasi solo ordini di importo netto superiore a 85,00 + IVA con spese di imballo e spedizione a carico del committente come specificato nel punto 4. Per ordini di importo superiore a 150,00 + IVA la spedizione sarà effettuata a ns. spese con nostro vettore conveensionato. Spedizioni con vettore diverso potranno avvenire solo con spese a carico del destinatario. 4) CONSEGNA-SPEDIZIONE-RESI A EPPENDORF S.r.l. Per importi superiori a Euro 150,00 + IVA la merce verrà spedita in porto franco senza spese. Per importi inferiori a 150,00 + IVA la merce verrà spedita in porto franco con addebito in fattura di un contributo di 10 Euro per consegna in Lombardia e di 15 Euro per il resto del territorio nazionale, di 18 Euro in Lombardia e di 25 Euro per il resto del territorio nazionale per i reagenti di biologia molecolare riportati nelle pagine 21, 22 e 23 del presente listino. In caso di spedizione in porto assegnato (con vettore indicato dal cliente sull ordine) la merce viaggia a rischio e pericolo del cliente. Le suddette condizioni non sono valide per le riparazioni. Eppendorf S.r.l. si riserva di effettuare, in funzione della disponibilità dei prodotti, consegne e fatturazioni parziali a fronte di un solo ordine. Qualora tale condizione non possa venire accettata dal Cliente si prega di darne comunicazione scritta sull ordine stesso. Qualsiasi prodotto reso a Eppendorf S.r.l. dovrà viaggiare opportunamente imballato affinché sia garantita la corretta conservazione del prodotto stesso. La mancata osservanza di tale accorgimento comporterà la non sostituzione del prodotto. 5) PAGAMENTI Le condizioni di pagamento dovranno essere sempre concordate con Eppendorf S.r.l. ed appariranno sulla fattura di vendita. 6) RECLAMI Reclami su merce fornita devono essere comunicati per iscritto alla Eppendorf S.r.l. entro 10 giorni dal ricevimento della merce. Il Cliente, solo dopo aver ricevuto autorizzazione scritta alla restituzione, potrà restituire il materiale difettoso alla Eppendorf S.r.l. allegando allo stesso copia della bolla di consegna ed una relazione sulla natura del difetto. (Per le modalità di spedizione riferirsi a quanto indicato al punto 4). Per i materiali monouso verrà effettuata sostituzione in caso di difetti di fabbricazione a condizione che la confezione resa contenga almeno l 80% della quantità originale. In caso di reso per errore d ordine la merce dovrà essere spedita in porto franco alla Eppendorf S.r.l. la quale richiederà un rimborso per il ricontrollo dei materiali. Non verranno accettati resi senza la necessaria autorizzazione scritta che dovrà essere allegata ai documenti di trasporto. Non è prevista in alcun caso la restituzione di quanto pagato né la risoluzione del contratto. 7) RISERVA DI PROPRIETA La proprietà dei prodotti forniti passerà in capo al Cliente solo a loro avvenuto pagamento. 8) FORO COMPETENTE Per qualsiasi controversia è competente il Foro di Milano. Ai sensi dell art C.C. si approvano espressamente le clausole: 2 (variazioni prezzo) 3 (minimo fatturabile 85,00.) 4 (termini di consegna - condizioni di resa) 6 (reclami) 7 (riserva di proprietà) 8 (Foro competente) Preghiamo di inviare i Vostri ordini a: EPPENDORF S.r.l. FAX Grazie per la collaborazione

14 Il Vostro Partner in Italia: Informazioni: Eppendorf s.r.l. Via Zante, Milano Tel Fax Supporto Applicativo Tel customerservice@eppendorf.it Servizio Assistenza Tecnica Strumentazione Tel sat@eppendorf.it Home pages: eppendorf@eppendorf.it Agente o rivenditore di zona: