AZIENDA OSPEDALIERA UNIVERSITARIA INTEGRATA - VERONA (D.Lgs. n. 517/ Art. 3 L.R.Veneto n. 18/2009) D I M T
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1 1 Allegato 1 D I M T PROCEDURA APERTA PER LA FORNITURA QUINQUENNALE PER IL DIPARTIMENTO INTERAZIENDALE DI MEDICINA TRASFUSIONALE DI PRODOTTI PER LA TIPIZZAZIONE GENOMICA A BASSA E ALTA RISOLUZIONE SUDDIVISA IN LOTTI ALLEGATO TECNICO al Capitolato Speciale d appalto
2 2 ALLEGATO TECNICO ARTICOLO 1 OGGETTO E CARATTERISTICHE DELLA FORNITURA La gara ha per oggetto la fornitura di prodotti per TIPIZZAZIONE GENOMICA HLA DI I e di II CLASSE per l Unita Operativa Complessa di Medicina Trasfusionale presso l Ospedale di Borgo Trento nell ambito del Dipartimento Interaziendale di Medicina Trasfusionale (DIMT) Per la tipizzazione del sistema HLA in biologia molecolare viene utilizzata la metodica di PCR-SSP. Al fine di garantire una corretta tipizzazione in biologia molecolare a bassa e alta risoluzione sono necessari kit a diversa tipologia suddivisi nei seguenti 2 lotti: LOTTO N.1 CIG. NR F TIPIZZAZIONE HLA DI 1-2 CLASSE A BASSA RISOLUZIONE CARATTERISTICHE QUALITATIVE ESSENZIALI DEI PRODOTTI E MATERIALI Per la tipizzazione dei loci HLA-A,B,C devono essere forniti tre distinti kit per permettere la tipizzazione genomica di I classe (A,B,C) a bassa risoluzione separatamente. Per la tipizzazione genomica del locus HLA-A* a bassa risoluzione il kit deve contenere i primers per identificare gli alleli da HLA-A*01:01 all HLA-A*80:02 corrispondenti agli antigeni dal A1 all antigene A80. Per la tipizzazione genomica del locus HLA-B* a bassa risoluzione il kit deve contenere i primers per identificare gli alleli da HLA-B*07:02 all HLA-B*83:01 corrispondenti agli antigeni dal B7 all antigene B-. Per la tipizzazione genomica del locus HLA-C* a bassa risoluzione il kit deve contenere i primers per identificare gli alleli da HLA-C*01:02 all HLA-C*18:03 corrispondenti agli antigeni dal Cw1 all antigene Cw-. Ciascun test del kit deve essere costituito dall insieme di soluzioni di primers prealiquotate in provette da PCR da 0.2 ml. come una soluzione disidratata di primers a sequenza specifica e da coppie di primers di controllo per le sequenze non alleliche
3 3 (controllo interno positivo) e deve essere previsto e incluso in ogni test un controllo negativo costituito da una soluzione pre-aliquotata/disidratata di primers, per poter documentare ad ogni uso che i reagenti siano liberi da contaminazione secondo quanto richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L L1.3300). I kit devono contenere la miscela di pre-amplificazione senza Taq DNA Polimerasi secondo le raccomandazioni degli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.3300). Per ogni campione si devono eseguire non meno di: 24 reazioni di PCR per il locus A*, 48 reazioni per il locus B* e 24 reazioni per il locus C* con un volume massimo di 10 ul ciascuna. L'interpretazione dei risultati deve garantire la identificazione di tutte le specificità alleliche approvate dal Comitato Internazionale WHO ed in particolare le seguenti: A*01:13/21/28/51 A*02:17/55/78/135/146/169/237/243 A*03:08/12/30/41/63/75/88/95 A*24:18/82/92 A*25:05/06 A*26:02/09/16/19/22/54 A*29:07/13 A*30:08 A*31:03/04/08/29/35 A*32:03/04/05/13/15 A*33:13/19/22/24 A*34:04 A*34:08 A*34:09 A*36:02/04 A*66:09/12 A*68:29/45/66 A*74:07/13 A*80:01/02 N. di test annuo 100 B*07:27/28/38/47/50/54/60/65/73/78/84 B*08:04/09/21/25/32/35/36/38/49/55/60
4 4 B*13:03/06/13:07N/09/11/14/16/26/31/36 B*14:10 B*15:04/13/29/31/36/42/43/45/46/53/54/55/57/62/64/66/68/69/73/74/76/77/80/83/86/89 /101/106/116/124/137/138/142/143/144/161/180/186/189 B*18:04/09/12/19/22/37/44/48/49 B*27:01/12/18/19/23/24/25/29/30/33/41/52/62 B*35:13/16/19/22/26/27/35/38/44/46/47/60/63/76/87 B*37:02/05/07/08/09/11/12/14 B*38:03/04/05/06/07/10/17/20/22 B*39:04/07/17/18/22/36/39/42/43 B*40:05/08/12/16/21/23/26/28/46/47/48/58/59/60/68/71/74/76/83/93/95/96/98 B*41:05/08 B*42:04/08/09/11/13 B*44:06/08/09/10/12/14/15/18/20/31/40/44/49/54/57/60/62/83/90/95/97 B*45:04/06/08/09/10 B*46:02/06/17/18 B*47:02/03 B*48:06/14/15/16/18/21 B*49:02/03/07 B*50:02/06/07/09 B*51:15/36/42/45/50/61/62/64/68/93 B*52:16/19/20 B*53:02/06/14/17/22 B*54:03/06/12/20 B*55:14/18/20/21/22/34/35/40 B*56:03/06/07/09/10/13/17/21/23/25 B*57:04/07/09/12/14/24 B*58:07/08/09/58:17N/18/20/27/28 B*59:04 B*73:01 B*78:05/06 B*81:01 B*82:01 B*83:01 N. di test annuo 100 C*01:04/09/10/14/21/43 C*02:02/04/06/12/14/22/26/27 C*03:15/16/58/67/81/86/94/99
5 5 C*04:10/11/16/29/37/42/58 C*05:16/23/26/36/42/46 C*06:03/05/06/08/09/17/31/32 C*07:31/64/96/123/125 C*08:05/07/10/12/21/25/31 C*12:05/08/09/15/16/21/24/28/31/41/44/49 C*14:04/10/12/15/16/17/25 C*15:07/10/11/12/21/22/23/25/36/37/42/43 C*16:04/15/18/20/29 C*17:05/07 C*18:03 N. di test annuo 200 La Ditta aggiudicatrice dovrà aggiornare periodicamente i kit con i primers per la definizione di tutti gli alleli approvati dal comitato WHO secondo la nuova nomenclatura internazionale; inoltre dovrà aggiornare almeno una volta all anno il Software Database delle sequenze HLA utilizzato per l assegnazione degli alleli, secondo la versione di nomenclatura internazionale più aggiornata del Database IMGT/HLA per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version C1.930). Per la tipizzazione dei loci DRB1* e DQB1* devono essere forniti due distinti kit per permettere la tipizzazione genomica di II classe a bassa risoluzione separatamente. Per la tipizzazione genomica del DRB1* a bassa risoluzione il kit deve contenere i primers per identificare gli alleli dal DRB1*01:01 al DRB1*16:17 corrispondenti agli antigeni dal DR1 al DR18 e le superspecificità alleliche DRB3*, DRB4* e DRB5* corrispondenti alle superspecificità antigeniche DR51, 52 e 53. Per la tipizzazione genomica del DQB1* a bassa risoluzione il kit deve contenere i primers per identificare gli alleli dal DQB1* 02:01 al DQB1* 06:29 corrispondenti agli antigeni dal DQ2 al DQ9. Ciascun test del kit deve essere costituito dall insieme di soluzioni di primers prealiquotate in provette da PCR da 0.2 ml. come una soluzione disidratata di primers a
6 6 sequenza specifica e da coppie di primers di controllo per le sequenze non alleliche (controllo interno positivo) e deve essere previsto e incluso in ogni test un controllo negativo costituito da una soluzione pre-aliquotata/disidratata di primers, per poter documentare ad ogni uso che i reagenti siano liberi da contaminazione secondo quanto richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L L ). I kit devono contenere la miscela di pre-amplificazione senza Taq DNA Polimerasi secondo le raccomandazioni degli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.3300). Per ogni campione si devono eseguire non meno di: 24 reazioni di PCR per il locus DRB1* e non meno di 8 reazioni di PCR per il locus DQB1* con un volume massimo di 10 ul ciascuna. L'interpretazione dei risultati deve garantire la identificazione di tutte le specificità alleliche approvate dal Comitato Internazionale WHO ed in particolare le seguenti: DRB1* 01:03 DRB1* 03:08/10/42/46 DRB1* 08:08/21/32/35/40 DRB1*11:05/55/89 DRB1* 12:04/16/22 DRB1*13:09/17/26/43/45/85 DRB1*14:11/16/22/24/27/37/42/49/50/58/65/69/73/74/82/89/95/98 DRB1*15:21/25 DRB1* 16:04 N. di test annuo 1000 DQB1*06:29 N. di test annuo 400 La Ditta aggiudicatrice dovrà aggiornare periodicamente i kit con i primers per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO secondo la nuova nomenclatura internazionale; inoltre dovrà aggiornare almeno una volta all anno il Software Database delle sequenze HLA utilizzato per l assegnazione degli alleli,
7 7 secondo la versione di nomenclatura internazionale più aggiornata del Database IMGT/HLA per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version C1.930). FORNITURA DI CONTROLLO DI CONTAMINAZIONE (WIPE TEST) Per la determinazione del sistema HLA di I e II Classe in biologia molecolare è necessario che la Ditta aggiudicatrice fornisca un kit per il Controllo di contaminazione ( Wipe Test ) da utilizzare nell'area di pre-amplificazione allo scopo di verificare che le attrezzature non siano contaminate da DNA amplificato tale da interferire con le analisi in corso, come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.2000). Il Controllo di contaminazione (Wipe Test) deve essere costituito da coppie di primers disidratate, pre-aliquotate in provette da PCR da 0.2ml. Ogni provetta deve contenere coppie di primers che amplificano più del 90% degli alleli HLA-A*,-B*,-C*, DRB1*, DQB1* e DPB1* oltre che primers di controllo per le sequenze non alleliche (controllo interno positivo). Il kit deve contenere la miscela di pre-amplificazione senza Taq DNA Polimerasi secondo le raccomandazioni degli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.3300). N. di test annuo 200 FORNITURA DI MARCATORE DI PESO MOLECOLARE Per la determinazione del sistema HLA di I e II Classe in biologia molecolare è necessario che la Ditta aggiudicatrice fornisca un reagente per la determinazione del range di peso molecolare delle bande (da 1000bp a 50 bp) ottenute per gel-elettroforesi da includere in ciascun gel, come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L2.2000). N. di confezioni annuo 150 FORNITURA DI ETIDIO BROMURO Per la determinazione del sistema HLA di I e II Classe in biologia molecolare è necessario che la Ditta aggiudicatrice fornisca il reagente etidio bromuro per la
8 8 colorazione delle bande di DNA ottenute per gel-elettroforesi per la rilevazione post PCR-SSP (conc. finale nel gel raccomandata 0.5ug/ml). N. di confezioni annuo 30 LOTTO N.2 CIG. NR TIPIZZAZIONE HLA DI 1-2 CLASSE AD ALTA RISOLUZIONE CARATTERISTICHE QUALITATIVE ESSENZIALI DEI PRODOTTI E MATERIALI I kit, con numero variabile di primers, devono essere forniti distinti per permettere la tipizzazione genomica HLA di I classe in alta risoluzione separatamente, delle seguenti specificità alleliche: ALLELE N. TEST PREVISTI / ANNO HLA-A *01:01-*01:66 45 HLA-A *02:01-*02: HLA-A *03:01-*03:76 20 HLA-A *11:01-*11:80 15 HLA-A *23:01-*23:31 05 HLA-A *24:02-*24: HLA-A *25:01-*25:13 05 HLA-A *26:01-*26:65 10 HLA-A *29:01-*29:22 15 HLA-A *30:01-*30:34 10 HLA-A *31:01-*31:28 10 HLA-A *32:01-*32:25 15 HLA-A *33:01-*33:34 05 HLA-A *34:01-*34:08 01 HLA-A *36:01-*36:05 01 HLA-A *66:01-*66:04 05 HLA-A *68:01-*68:54,*69:01 05 HLA-A *74:01-*74:14 01 HLA-B *07:02-*07 :117 30
9 9 HLA-B *08:01-*08:61 25 HLA-B*13:01-*13 :37 10 HLA-B*14:01-*14 :19 10 HLA-B*15:01- *15:209N 05 HLA-B*18:01-*18 :49 30 HLA-B*27:01-*27:73 10 HLA-B*35:01-*35: HLA-B*37:01-*37:25 05 HLA-B*38:01-*38:22 10 HLA-B*39:01-*39:54 15 HLA-B*40:01-*40 :99 10 HLA-B*41:01-*41:16 05 HLA-B*42:01-*42:14 01 HLA-B*44:02-*44:99 20 HLA-B*45:01-*45:11 05 HLA-B*46:01-*46 :22 01 HLA-B*47:01-*47:07 01 HLA-B*48:01-*48 :23 01 HLA-B*49 01-*49:15 05 HLA-B*50:01-*50:09 05 HLA-B*51:01-*51:95 20 HLA-B*52:01-*52:21 05 HLA-B*53:01-*53:24 05 HLA-B*54:01-*54 :19 01 HLA-B*55:01-*55:48 05 HLA-B*56:01-*56:29 05 HLA-B*57:01-*57:37 10 HLA-B*58:01-*58:31N 01 HLA-B*59:01-*59:05 01 HLA-B*73 :01-*73 :02 05 HLA-B*67:01-*67:02 01 HLA-B*78:01-*78:07 01 HLA-B*81:01-*81:05 01 HLA-B*82:01-*82:03 01 HLA-C*01:02-01:45 10 HLA-C*02:02-02:47 10 HLA-C*03:02-03: HLA-C*04:01-04:84 30 HLA-C*05:01-05:13 20
10 10 HLA-C*06:02-06:37 25 HLA-C*07:01-07:99 75 HLA-C*08:01-08:13 10 HLA-C*12:02-12:50 40 HLA-C*14:01-14:29 05 HLA-C*15:02-15:48 20 HLA-C*16:01-16: HLA-C*17:01-17:07 05 HLA-C*18:1-18:04 01 Ciascun test del kit deve essere costituito dall insieme di soluzioni di primers prealiquotate in provette da PCR da 0.2 ml. come una soluzione disidratata di primers a sequenza specifica e inoltre da coppie di primers di controllo per le sequenze non alleliche (controllo interno positivo) come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L ). I kit devono contenere la miscela di pre-amplificazione senza Taq DNA Polimerasi secondo le raccomandazioni degli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.3300). La Ditta aggiudicatrice dovrà aggiornare periodicamente i kit con i primers per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO secondo la nuova nomenclatura internazionale; inoltre dovrà aggiornare almeno una volta all anno il Software Database delle sequenze HLA utilizzato per l assegnazione degli alleli, secondo la versione di nomenclatura internazionale più aggiornata del Database IMGT/HLA per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version C1.930).
11 11 I kit, con numero variabile di primers, devono essere forniti distinti per permettere la tipizzazione genomica HLA di II classe in alta risoluzione separatamente, delle seguenti specificità alleliche: ALLELE N. TEST PREVISTI / ANNO DRB3*01:01 -*01:14, *02:01-*02:25,*03:01-*03: DRB4*01:01 -*03:01N 100 DRB5*01:01 -*01:14, *02:02 - *02: DRB1*01:01 - *01:31 20 DRB1*03:01 - *03:52 25 DRB1*04:01 - *04:89 20 DRB1*07:01 - *07:19 25 DRB1*08:01 - *08:41 10 DRB1*09:01 - *09:09 05 DRB1*10:01-*10:03 20 DRB1*11:01 - *11:94 50 DRB1*12:01 - *12:26 05 DRB1*13:01 - *13: DRB1*14:01 - *14: DRB1*15:01 - *15:44 20 DRB1*16: , 16:07-16:18 15 DQB1*02:01 - *02: DQB1*03:01 - *03: DQB1*04:01 - *04:05 15 DQB1*05:01 - *05: DQB1*06:01 - *06:40 50 DQA1*01:01-*01:07, *02:01, *03:01-*03:03,* 04:01-*04:04, 200 *05:01-*05:10, 06:01-06:02 DPB1*01:01 -* 99:01, *100:01-125:01 200
12 12 FORNITURA DI KIT DEDICATI Per la determinazione del sistema HLA di I e II Classe in biologia molecolare a alta risoluzione è necessario che la Ditta aggiudicatrice fornisca dei kit per la definizione di un singolo o limitato numero di loci: HLA-*B27 N. di test annuo 200 HLA-B*57:01 N. di test annuo 100 HLA-DQ2/DQ8 A1*,DQB1*) N. di test annuo 150 A*2409N N. di test annuo 5 B*5111N N. di test annuo 5 C*0409N N. di test annuo 5 DRB4* N N. di test annuo 5 DRB5*0108N N. di test annuo 5 Ciascun test del kit deve essere costituito dall insieme di soluzioni di primers prealiquotate in provette da PCR da 0.2 ml. come una soluzione disidratata di primers a sequenza specifica e inoltre da coppie di primers di controllo per le sequenze non alleliche (controllo interno positivo) come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L ). I kit devono contenere la miscela di pre-amplificazione senza Taq DNA Polimerasi secondo le raccomandazioni degli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version L1.3300). La Ditta aggiudicatrice dovrà aggiornare periodicamente i kit con i primers per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO secondo la nuova nomenclatura internazionale; inoltre dovrà aggiornare almeno una volta all anno il Software Database delle sequenze HLA utilizzato per l assegnazione degli alleli, secondo la versione di nomenclatura internazionale più aggiornata del Database IMGT/HLA per la definizione di tutti gli alleli approvati dal Comitato Internazionale WHO come richiesto dagli standards EFI (European Federation for Immunogenetics Version C1.930).
13 13 L Unità Ooerativa Complessa di Medicina Trasfusionale do nelll ambito del Dipartimento Interaziendale di Medicina trasfusionale (DIMT) dell Azienda Ospedaliera di Verona è certificato UNI EN ISO 9001 per "Progettazione ed effettuazione di servizi di : immunoematologia, produzione di sangue ed emocomponenti, medicina trasfusionale, biologia dei trapianti e allergologia" Si ricorda che i prodotti diagnostici, dovranno avere la marcatura CE, secondo la normativa vigente, ai sensi del D.Lgs. 332/2000, in attuazione alla direttiva 98/79/CE Dispositivi medico diagnostici in vitro.
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