Cortisol Saliva Luminescence Immunoassay

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1 Istruzioni per l Uso Cortisol Saliva Luminescence Immunoassay Immunodosaggio in Luminescenza per la determinazione diagnostica in vitro quantitativa di cortisolo nella saliva umana. RE62111 / RE / C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. USO PREVISTO L Immunodosaggio in Luminescenza d IBL International è destinato per la determinazione diagnostica in vitro quantitativa di cortisolo nella saliva umana e per l uso come ausilio nella diagnosi e nel trattamento della sindrome di disturbi del surrene. Il dispositivo non è indicato per le impostazioni point-of-care. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONI Il cortisolo (idrocortisone, composto F) è il principale glucocorticoide negli esseri umani ed è prodotto dalla zona fascicolata della corteccia surrenalica. Il 90% del cortisolo circolante è legato alle globuline leganti I corticosteroidi (CBG, Transcortina); il 7% circa all albumina e solo l 1 3% è libero. Solo il cortisolo libero è la parte biologicamente attiva del cortisolo. Il cortisolo libero è rilasciato nella saliva ed escreto per via renale come piccola percentuale dei metabolite del cortisolo. Il livello di cortisolo libero nel sangue regola principalmente la sua secrezione nella corteccia surrenalica con un meccanismo di feedback negativo tramite il CRH (ormone di liberazione della corticotropina) nella regione ipotalamica e l ACTH nella ghiandola pituitaria, ma viene anche influenzato da varie situazioni, principalmente dallo stress. Negli esseri umani vi è una fluttuazione fisiologica di cortisolo che raggiunge il livello massimo di mattina ed il minimo nelle ore notturne (mezzanotte). Questa fluttuazione del livello di cortisolo nel plasma si riflette anche nella saliva, con un picco nei primi 90 minuti dopo il risveglio. La misurazione deel cortisolo è suggerita in caso nei disturbi surrenali. A causa delle fluttuazioni diurni di cortisolo di campioni di saliva quindi è un metodo semplice che non comporta lo stress di venipunture ripetute. 3. PRINCIPIO DEL TEST Immunodosaggio in luminescenza basato sul principio di competizione. Una quantità sconosciuta dell antigene presente nel campione e una quantità fissa di antigene legato all enzima competono per i siti di legame sugli anticorpi che rivestono i pozzetti. Dopo incubazione i pozzetti vengono lavati per bloccare la reazione di competizione. Dopo aggiunta della soluzione substrato luminescente l intensità della luminescenza misurata sarà inversamente proporzionale alla quantità di antigene nel campione. I risultati dei campioni possono essere determinati direttamente usando la curva standard. 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. Utilizzare solo da persone ben istruite. 2. Leggere attentamente le istruzioni prima di iniziare il test. Utilizzare il manuale fornito nel kit. Assicurarsi di aver compreso tutte le indicazioni. 3. In caso di danneggiamento del kit contattare IBL o il Vostro fornitore entro 1 settimana dal ricevimento della merce. Non utilizzare i componenti danneggiati ma conservarli per fornire prove del danno assieme al reclamo che inoltrerete al produttore/fornitore. 4. Vetro rotto potrebbe causare lesioni. Maneggiare vasi di vetro con cautela. 5. Rispettare lotto e scadenze. Non scambiare o mescolare tra loro reagenti di lotti diversi. Non usare i reagenti scaduti. 6. Attenersi alle Buone Pratiche di Laboratorio e alle direttive di sicurezza. Indossare camici, guanti in lattice e occhiali protettivi se necessario. 7. Alcuni reagenti del kit contengono sostanze pericolose che potrebbero causare irritazioni a pelle ed occhi. Consultare la sezione MATERIALE FORNITO e le etichette per i dettagli precisi. Schede di sicurezza del prodotto sono disponibili sul sito web IBL o su richiesta specifica ad IBL/fornitore. 8. I reagenti preparati e usati e le sostanze chimiche del kit devono essere trattati come rifiuti pericolosi secondo le normative di sicurezza e la legislazione vigente nel Paese in cui il prodotto viene usato. 9. Il personale delle pulizie dev essere informato dal personale specializzato sui possibili rischi e sulle procedure da adottare. 5. CONSERVAZIONE E STABILITÀ Il kit è spedito e trasportato a temperatura ambiente e deve essere conservato a 2-8 C. Non esporre a luce solare diretta e ad alte temperature. Le informazioni relative a conservazione e stabilità di tutti i reagenti e dei campioni sono riportate nel capitolo corrispondente. La piastra microtitrata aperta è stabile fino a scadenza del kit se conservata nel suo involucro ben chiuso riposta a 2 8 C. Version / 7

3 6. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Saliva Il paziente non dovrebbe bere, mangiare, masticare gomme o lavarsi i denti nei 30 minuti che precedono il prelievo dei campioni. In caso una delle precedenti cose fosse stata fatta far risciascquare la bocca a fondo con acqua fresca 5 minuti prima del prelievo del campione. Non prelevare il campione in caso di infezioni del cavo orale, infiammazioni o lesioni (contaminazione da sangue). La saliva può essere raccolta in Sarstedt Cortisol Salivette o eventuali navi approvati per la raccolta di saliva ai fini della determinazione del cortisolo. Raccogliere un minimo di 0.5 ml di saliva. La salivazione può essere stimolata masticando un pezzo di Parafilm. Si consiglia di congelare il campione prima del test a 20 C. Mescolare e centrifugare Dopo scongelamento centrifugare 10 min a x g per rimuovere il materiale particolato. Controllare l aspetto della saliva. (Colorazione rosata o rossastra - indice di presenza di sangue.) Conservazione: 37 C C 2-8 C -20 C (Aliquote) Stabilità: 2 settimane 4 settimane 4 settimane 12 mesi 7. MATERIALE FORNITO RE62111 RE62119 Simbolo Componente 1 x 12 x 8 10 x 12 x 8 MTP 1 x 13 ml 1 x 120 ml ENZCONJ 1 x 3.5 ml 1 x 20 ml 1 x 6 x 1.0 ml 1 x 6 x 3.5 ml CAL A-G 2 x 1.0 ml 2 x 3.5 ml CONTROL x 4.5 ml 2 x 45 ml LUMINREAG x 100 ml 5 x 100 ml WASHBUF CONC 3 x 12 x FOIL Pellicola Adesiva Micropiastra Di colore bianco. Coniugato con anticorpi anti-cortisolo. (coniglio). Coniugato Enzimatico Di Colore Giallo. Pronto/a all uso. Contiene: Cortisolo (purificato cromatograficamente), coniugato a HRP, stabilizzatori. Standard A-G 0; 0.015; 0.03; 0.10; 0.40; 1.00; 3.20 µg/dl 0; 0.15; 0.3; 1.0; 4.0; 10; 32 ng/ml 0; 0.41; 0.83; 2.8; 11; 28; 88 nmol/l Pronto/a all uso. Contiene: Cortisolo, Tampone, 0.1 % BSA, 0.1 % ProClin. Controllo 1+2 Pronto/a all uso. Contiene: Cortisolo, basso e elevato, Tampone, 0.1 % BSA, 0.1 % ProClin. Per le concentrazioni /gli intervalli accettabili vedere le etichette sulle provette. Reagente di Chemiluminescenza 1+2 Pronto/a all uso. Reagente 1: Contiene: amplificatore di luminol. Reagente 2: Contiene: soluzione perossido, stabilizzatori. Tampone Lavaggio Concentrato (10x) Contiene: tampone fosfato, Tween, stabilizzatori. 8. MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette (Multipette Eppendorf o similari, < 3 % CV). Volumi: 20; 50; 100; 1000 µl 2. Centrifuga 3. Vortex mixer 4. Micropipetta 8-Canali con contenitori per reagenti 5. Spruzzetta per lavaggi, lavatore per micropiastre automatico o semi automatico 6. Lettore per immunodosaggio in luminescenza 7. Acqua bidistillata o deionizzata 8. Carta assorbente, puntali per pipette e timer 9. NOTE PER LA PROCEDURA 1. Qualsiasi manipolazione impropria dei campioni o modifica alla procedura può compromettere i risultati. Rispettare rigorosamente i volumi, i tempi e le temperature di incubazione e i passaggi di pretrattamento dei campioni indicati in metodica. Utilizzare pipette calibrate. Version / 7

4 2. Una volta iniziato il test completare tutti i passaggi senza interruzioni. Assicurarsi che tutti i reagenti siano stati precedentemente preparati in tempo utile. Far raggiungere la temperatura ambiente ai campioni e ai componenti del kit (18-25 C) e mescolare delicatamente ciascun reattivo liquido e campione prima dell uso. Non creare schiuma durante il mescolamento. 3. Evitare la contaminazione di reagenti, pipette, pozzetti o provette. Usare puntali di plastica nuovi per ogni reagente, standard e campione. Non scambiare i tappi tra loro. Tappare sempre i flaconi non utilizzati. Non riutilizzare pozzetti/provette o reagenti. 4. Si consiglia di saggiare i campioni in doppio per poter identificare eventuali errori di pipettamento. 5. Usare uno schema di pipettamento per realizzare un appropriata distribuzione sulla piastra. 6. Il tempo di incubazione influisce sui risultati. Tutti i pozzetti dovrebbero essere dispensati nello stesso ordine e sequenza temporale. Si raccomanda una pipetta multicanale a 8 canali per pipettare le soluzioni in tutti i pozzetti. 7. Il lavaggio della micropiastra è importante. Pozzetti lavati in modo inappropriato possono portare a risultati erronei. Si raccomanda una pipetta multicanale o un lavatore automatico per piastre. Non far asciugare i pozzetti tra le varie incubazioni. Non graffiare i pozzetti rivestiti durante risciacqui e aspirazioni. Risciacquare e versare i reagenti con cura. Durante i risciacqui assicurarsi che i pozzetti siano ben riempiti con la soluzione di lavaggio e che non ci siano residui nei pozzetti. 8. L umidità influisce sui pozzetti/tubi rivestiti. Non aprire l involucro finché non ha raggiunto la temperatura ambiente. Riporre immediatamente i tubi/pozzetti non utilizzati nell involucro con il disseccante. 10. ISTRUZIONI PRE-TEST Preparazione di componenti concentrati Diluire / dissolvere Componente Diluente Rapporto Note Conservazione Stabilità 10 ml WASHBUF fino a 100 ml acqua bidist. 1: Preparazione della Miscela di Soluzione Substrato Diluire / dissolvere Mescolare energicamente. 2-8 C 4 settimane Componente con Componente Rapporto Note Conservazione Stabilità 1 ml LUMINREAG 1 1 ml LUMINREAG Mescolare energicamente C 8 h Diluizione dei Campioni I campioni sospettati di avere una concentrazione superiore a quella dello 3.13 µg/dl devono essere diluiti con Standard A. In caso di campioni i valori devono essere moltiplicati per il corrispondente fattore di diluizione. 11. PROCEDURA DEL TEST 1. Pipettare 20 µl di ogni Standard, di ogni Controllo e di ogni campione nei rispettivi pozzetti della micropiastra. 2. Pipettare 100 µl di Coniugato Enzimatico in ogni pozzetto. Coprire la piastra con pellicola adesiva. Agitare delicatamente la piastra. 3. Incubare per 3 h a TA (18-25 C). 4. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra 4 x con 250 µl di Tampone di Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 5. Pipettare 50 µl del Miscela di Soluzione Substrato preparato in ogni pozzetto con lo stesso intervallo di tempo e lo stesso ordine con cui verranno misurati nel Luminometro (nel Luminometro Berthold per esempio serve 2 sec per pozzetto). 6. Misurare le unità di luminescenza relativa con un Luminometro dopo 10 min. Version / 7

5 12. CONTROLLO DI QUALITA I risultati del test sono validi solo se il test è stato eseguito seguendo le istruzioni per l uso. L utente deve inoltre attenersi rigorosamente ai principi della BPL (Buona Pratica di Laboratorio) o a norme equivalenti. Gli utenti e il laboratorio devono avere un sistema di formulazione della diagnosi conforme alle Buone Pratiche di Laboratorio. Tutti i controlli devono risultare compresi entro gli intervalli accettabili indicati sulle etichette e il Certificato QC. Se i criteri non sono soddisfatti il test non è valido e dovrebbe essere ripetuto. Ogni laboratorio dovrebbe usare campioni noti come ulteriori controlli. Si consiglia la partecipazione a programmi di controllo qualità periodici. In caso di deviazioni devono essere forniti i seguenti dati: Scadenza dei reagenti (preparati), condizioni di conservazione, pipette, strumenti, condizioni d incubazione e metodi di lavaggio. 13. CALCOLO DEI RISULTATI Le RLU ottenute per gli standards (asse-y, lineare) vengono messe in grafico contro le loro concentrazioni (asse-x, logaritmico) sia su grafico semi-logaritmico che usando un metodo automatico. Buoni risultati si ottengono con grafici cubic spline, 4 Parametri Logistica o Logit-Log. Per il calcolo della curva standard utilizzare ogni segnale degli standard (omettere ovviamente I valori dei duplicati molto al di fuori dei risultati attesi e impiegare il valore singolo più plausibile). La concentrazione dei campioni può essere ricavata direttamente dalla curva standard. I campioni con concentrazioni superiori al più alto degli standards devono essere diluiti come descritto nel paragrafo ISTRUZIONI PRE-TEST e ritestati. In caso di campioni diluiti i valori devono essere moltiplicati per il corrispondente fattore di diluizione. Campioni di Saliva con valori eccessivamente elevate devono essere controllati poiché potrebbero avere contaminazione da sangue. Conversione: Cortisolo (ng/ml) x 2.76 = nmol/l Cortisolo x 27.6 = nmol/l Portata di Riferimento Saliva: µg/dl Cortisolo Tipica Curva di Calibrazione (Esempio. Non usare per il calcolo!) Standard Cortisolo Media Luminescence (RLU) RLU/RLU max (%) A B C D E F G VALORI ATTESI Gli intervalli di riferimento sono stati stabiliti utilizzando prospettivamente 326 campioni raccolti da 76 uomini e 76 donne apparentemente in salute in due punti di tempo indipendenti presso una sede di raccolta situata negli Stati Uniti. La saliva è stata raccolta utilizzando il Cortisol Salivette di SARSTEDT Int. (Numero di elenco FDA: D053653). I criteri di inclusione per la popolazione adulta in salute era di adulti di età compresa tra 21 e 70 anni, entrambi i sessi e razza con livelli di TSH e TPO normali, non attualmente sottoposti a cure mediche o farmacologiche e che non presentassero patologie il giorno della raccolta del campione. I criteri di esclusione comprendevano pazienti sottoposti a terapie con cortisolo, terapie ormoniche o che assumessero contraccettivi orali, pazienti con dispositivi contraccettivi impiantati, un anamnesi di tiroide o altre patologie autoimmuni, anamnesi di sindrome di Cushing o morbo di Addison, donne in stato interessante o in allattamento. Version / 7

6 La tabella seguente indica la sintesi dei risultati: Partizione n Riferimento Limite 2.5% percentile 97.5% percentile 90% Intervallo di confidenza limite inferiore limite superiore Riferimento Limite 90% Intervallo di confidenza limite inferiore limite superiore mattina (entro le ore 10) dopopranzo (tra 2 e 16:00) Ulteriore letteratura (13) ha suggerito le seguenti intervalli per le concentrazioni di cortisolo durante il giorno: Gruppo n dopopranzo mattina Intervallo Intervallo Uomini, età ND Donne, età ND Uomini, età ND Donne, età ND Uomini, età ND Donne, età Tutti gli adulti ND I soli risultati non dovrebbero essere l unica motivazione alla base di una scelta terapeutica. Devono essere correlati ad altre osservazioni cliniche e test diagnostici. Gli utenti e / o laboratori devono avere un sistema validato per ottenere la diagnosi secondo GLP. 15. LIMITI DELLA PROCEDURA Livelli infantili non sono ancora stati misurati con questo test. La raccolta e conservazione dei campioni ha influenza significativa sui risultati del test. Vedere la sezione PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI per maggiori dettagli. Per le reazioni crociate vedere la sezione PERFORMANCE. Nota: I campioni di saliva contenenti thimerosal, azoturo di sodio e tracce ematiche non devono essere usati per il dosaggio. I seguenti componenti del sostanze non hanno effetto significativo sui risultati del test fino ai livelli di concentrazione riportati in tabella: Potenziali sostanze interferenti Concentrazione testato Gamma di sostanze potenzialmente interferenti Massima concentrazione testato con influenza accettabile di sostanze potenzialmente interferenti Gamma di Recupero osservato con influenza accettabile Sangue 0 10 % (v/v) 0.1 % (v/v) % Etanolo 0-1% (v/v) 1 % (v/v) % Cibo 0-1% (w/v) 1 % (w/v) % gomma da masticare 0 1 % (w/v) 1 % (w/v) % Nicotina 0 10 mg/ml 10 mg/ml % Caffeina µg/ml 1000 µg/ml % Version / 7

7 16. PERFORMANCE Specificità Analitica (Reattività Crociate) Sensibilità Analitica (Limite di Bianco LdB) Sensibilità Funzionale (Limite di Rilevazione LdR, Limite di Quantificazione LdQ) Recupero (Diluizione dei Campioni) Linearità Sostanza Reattività Crociate (%) Prednisolone Deoxycortisol 4.1 Cortisone 1.8 6β-Hydroxycortisol 1.7 Prednisone 0.8 Cross-reattività di altre sostanze esaminate: < 1.0 % Androstenedione, Estrone, Estriol, Medroxyprogesterone 17-acetate, 17α-Hydroxyprogesterone, Dehydroisoandrosterone, Pregnenolone, Medroxyprogesterone, 4,5α-Dihydrotestosterone, Progesterone, Corticosterone, Dexamethason, Testosterone, Androsterone, Dihydrotestosterone, Methyltestosterone, 19-Norethindrone, Ethynylestradiol, Epiestriol, ß-Estradiol µg/dl Media (Zero-Standard) - 2SD µg/dl Conc. Media < 20 % CV Conc. non diluito Diluizioni Seriali fino a Rec. Intervallo (%) Rec. Media (%) : concentrazione di cortisolo determinato = x (Conc. Attesa ), r 2 = 0.99 Intervallo Lineare del dosaggio è fino a µg/dl Recupero Confronto del metodo (Deming Regression) Precisione e riproducibilità Conc. Intervallo Conc. Aggiunto Rec. Intervallo (%) Rec. Media (%) IBL-Assay = x altro ELISA r Pearson = n = 173 IBL-Assay = x LCMS Data r Pearson = n = 85 livello tra corsa - entro corsa tra giorno Conc. Media entro il giorno SD CV SD CV SD CV (%) (%) (%) livello Conc. Media all interno di laboratorio Precisione deviazione standard della media giornaliera SD CV (%) SD CV (%) Version / 7

8 Inter-Lotto tra l operatore livello livello Media SD CV (%) Media SD CV (%) RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI SUL PRODOTTO 1. Clow, A.; Hucklebridge, F.; Stalder, T.; Evans, P.; Thorn, L. (2010): The cortisol awakening response: more than a measure of HPA axis function. In Neurosci Biobehav Rev 35 (1), pp Kalman, B.A; Grahn, R.E (2004): Measuring salivary cortisol in the behavioral neuroscience laboratory. In J Undergrad Neurosci Edu 2, pp. A41-A Kirschbaum, C.; Kudielka, B. M.; Gaab, J.; Schommer, N. C.; Hellhammer, D. H. (1999): Impact of gender, menstrual cycle phase, and oral contraceptives on the activity of the hypothalamus-pituitaryadrenal axis. In Psychosom Med 61 (2), pp Kirschbaum, C. (2010): Trier Social Stress Test. In Encyclopedia of Psychopharmacology, pp Laudat, M. H.; Cerdas, S.; Fournier, C.; Guiban, D.; Guilhaume, B.; Luton, J. P. (1988): Salivary cortisol measurement: a practical approach to assess pituitary-adrenal function. In J Clin Endocrinol Metab 66 (2), pp Lewis, J. G. (2006): Steroid analysis in saliva: an overview. In Clin Biochem Rev 27 (3), pp Liening, S. H.; Stanton, S. J.; Saini, E. K.; Schultheiss, O. C. (2010): Salivary testosterone, cortisol, and progesterone: two-week stability, interhormone correlations, and effects of time of day, menstrual cycle, and oral contraceptive use on steroid hormone levels. In Physiol Behav 99 (1), pp Nicolson, N.A (2008): Measurement of cortisol. In Handbook of physiological research methods in health psychology, pp Piazza, JR; Almeida, D. M.; Dmitrieva, N. O.; Klein, L. C. (2010): Frontiers in the use of biomarkers of health in research on stress and aging. In J Gerontol B Psychol Sci Soc Sci 65 (5), pp Raff, H.; Raff, J. L.; Findling, J. W. (1998): Late-night salivary cortisol as a screening test for Cushing's syndrome. In J Clin Endocrinol Metab 83 (8), pp Shimada, M.; Takahashi, K.; Ohkawa, T.; Segawa, M.; Higurashi, M. (1995): Determination of salivary cortisol by ELISA and its application to the assessment of the circadian rhythm in children. In Horm Res 44 (5), pp Tunn, S.; Mollmann, H.; Barth, J.; Derendorf, H.; Krieg, M. (1992): Simultaneous measurement of cortisol in serum and saliva after different forms of cortisol administration. In Clin Chem 38 (8 Pt 1), pp Aardal, E., Holm, A. (1995): Cortisol in Saliva Reference Ranges and Relation to Cortisol in Serum. Eur J Clin Chem Clin Biochem, 33(12), Version / 7

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12 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύμβολα REF LOT CONC LYO IVD Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθμός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθμός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιμοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθμός εξετάσεων: Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συμπύκνωμα Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασμένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro Διάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / Διαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται μακριά από θερμότητα και άμεση επαφή με το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύμβολα των συστατικών του κιτ συμβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /