Corso di Tecniche diagnostiche in ematologia
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- Virginio Valle
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1 Corso di Tecniche diagnostiche in ematologia Struttura e funzione del sistema emopoietico Inquadramento fisiopatologico Tecniche di studio, cliniche e sperimentali Trapianto di cellule staminali Principali patologie ematologiche Inquadramento fisiopatologico Approccio diagnostico laboratoristico Approcci terapeutici innovatici Inquadramento anemie Neoplasie Mieloproliferative croniche Leucemia mieloide cronica Leucemie mieloidi acute Malattie linfoproliferative croniche Patologie delle piastrine Patologie congenite dei fattori della coagulazione 1
2 Libri di testo Non esiste alcun testo specifico consigliato, i seguenti permettono di estrapolare agevolmente le necessarie informazioni di fisiopatologia e diagnostica: Castoldi G, Core Curriculum Ematologia, McGrawHill, 2009 Castoldi - Liso, Malattie del sangue, McGrawHill, 2008 Corradini P, Manuale di Ematologia, Minerva,
3 Il materiale didattico verrà inserito nel sito Sezione DIDATTICA 3
4 EMOPOIESI Sede: midollo osseo (adulto) Componenti: Cellule emopoietiche Cellule dello stroma Citochine Fattori nutrizionali 4
5 Cellule CD % nel midollo 0.05% nel sangue periferico % nel sangue cordonale 0.5-3% nel sangue periferico mobilizzato >> in condizioni patologiche (PMF) LTR dopo terapia mieloablativa 5
6 Tecniche per lo studio funzionale delle cellule midollari Progenitori multipotenti Conta CD34+ circolanti Per monitoraggio staminoaferesi Diagnostica Mielofibrosi Primaria Per studi sperimentali Progenitori commissionati Test clonogenici in terreno semisolido Precursori 6
7 VALUTAZIONE DEL SISTEMA EMOPOIETICO La valutazione morfologica del sistema emopoietico richiede i seguenti campioni: BIOPSIA OSTEOMIDOLLARE CITOASPIRATO MIDOLLARE SANGUE PERIFERICO 7
8 video 8
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10 BIOPSIA OSTEOMIDOLLARE ASPIRATO MIDOLLARE Cellularità emopoietica Espressione delle diverse filiere emopoietiche Organismi intracellulari-granulomi Tesaurismosi Infiltrati linfocitari Infiltrati cellule non-emopoietiche Stroma ed osso Citomorfologia Reazioni citochimiche Reazione Perls Organismi intracellulari Tesaurociti Infiltrati linfocitari Infiltrati cellule non-emopoietiche 10
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14 TRAPIANTO DI CELLULE STAMINALI EMOPOIETICHE Autologo Singenico Allogenico Da donatore familiare Da donatore non familiare volontario (MUD) Aploidentico Mieloablativo Non-mieloablativo; regimi ad intensità ridotta; mini-allo 14
15 SORGENTI DI CELLULE STAMINALI EMOPOIETICHE Cellule midollari Cellule da sangue periferico [AUTO] Reclutamento con ciclofosfamide + G-CSF Sullo sblocco di un ciclo chemioterapico convenzionale/alte dosi sequenziali +G-CSF Cellule da sangue periferico [ALLO] Reclutamento con solo fattore di crescita (G-CSF) Cellule da sangue di cordone ombelicale [cellule espanse ex-vivo] 15
16 CLASSE II CLASSE III CLASSE I COMPL TNF- DP DQ DR HeatSP B C E A 16
17 * *= cromosoma 15 17
18 CARATTERISTICHE MHC I MHC II Composizione complesso MHCpeptide Tipo di APC Catena polimorfica, 2-MG, peptide Catene polimorfiche e, peptide Tutte le cellule nucleate APC professionali Cellule T responsive CD8+ (CTL) CD4+ (helper) Origine dei peptidi Proteine del cytosol Proteine dagli endosomi/ lisosomi (di orgine extracellulare) Sede di generazione del peptide proteasomi Endosomi / lisosomi Meccanismi di trasporto del peptide TAP Non necessari 18
19 -196 C 19
20 20
21 21
22 Le fasi del trapianto autologo Regime di condizionamento Infusione di c. staminali Recupero della funzione emopoietica Recupero della funzione immunologica Aplasia -10/ >
23 Le fasi del trapianto allogenico Regime di condizionamento Infusione di c. staminali Recupero della funzione emopoietica Recupero della funzione immunologica Aplasia -10/ >+365 graft-failure GVHD acuta < +100 GVHD cronica >
24 GVHD ACUTA Entro 100 gg dal TMO (..ma non sempre ) CRONICA Oltre il terzo mese 24
25 GVHD acuta GRADO CUTE FEGATO INTESTINO + Rash maculopapulare, <25% ++ Rash maculopapulare, 25-50% Bilirubina, 2-3 mg/dl Bilirubina, 3-6 mg/dl +++ Eritroderma generalizzato Bilirubina, 6-15 mg/dl ++++ Desquamazione e bolle Bilirubina, >15 mg/dl Diarrea ml/die oppure Nausea persistente Diarrea, ml/die Diarrea, >1500 ml/die Dolore addominale e/o ileo paralitico 25
26 da J Ferrara et al. 26
27 GVHD GVL GRAFT HOST HVG --> rejection 27
28 28
29 Tecniche per lo studio del chimerismo Cariotipo VNTR STR SNP 29
30 Indicazioni al trapianto di cellule staminali emopoietiche Emopatie neoplastiche Emopatie non neoplastiche Difetti congeniti metabolismo Auto Allo/MUD convenz mini-allo CB Aploiden * * /+ Neoplasie solide + -/ M. autoimmuni + -/+ -/+ - - * futuribile: terapia genica 30
Corso di Tecniche diagnostiche in ematologia
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