Servizio di Analisi Molecolari

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1 Servizio di Analisi Molecolari Laboratorio di Genetica Animale Il laboratorio di Genetica Animale esegue analisi mediante tecniche di biologia molecolare atte ad evidenziare caratteristiche specifiche della sequenza del DNA (polimorfismi genetici). Le tecniche molecolari applicate sono: PCR, elettroforesi su gel e capillare ad alta risoluzione e sequenziamento con metodo Sanger, Mini-sequenziamento SNaPshot. Le analisi sono svolte tramite l utilizzo di kit commerciali oppure con metodiche validate in laboratorio e grazie all utilizzo di reagenti e strumentazione di alta qualità. Il personale incaricato di eseguire l analisi possiede le competenze adeguate al ruolo ed è in continua formazione e aggiornamento. Il laboratorio esegue i seguenti test genetici: sessaggio molecolare negli uccelli, identificazione Freemartinismo nel bovino, identificazione dell individuo e della parentela mediante DNA profiling in cani, cavalli, bovini e suini. Su richiesta è possibile mettere a punto test per l identificazione di mutazioni associate a patologie e di tracciabilità molecolare di filiera dei prodotti di origine animale. Referenti Scientifici: prof.ssa Paola Sacchi Tel paola.sacchi@unito.it prof. Roberto Rasero Tel roberto.rasero@unito.it Responsabile del servizio: dot.ssa Dominga Soglia Tel dominga.soglia@unito.it Gruppo di Ricerca Sandra Maione Roberto Rasero Paola Sacchi Stefano Sartore Dominga Soglia dot.ssa Sandra Maione Tel Sandra.maione@unito.it Tariffe Analisi Molecolari Indicazione prelievo e conservazione campioni Sessaggio molecolare avifauna Freemartinismo bovino DNA profiling Consegna campioni e modalità di pagamento Consegna esiti

2 Tariffe Analisi Molecolari Analisi Molecolare Campione biologico Tariffa Sessaggio avifauna Penna o sangue 18,31 Freemartinismo Sangue 29,11 Dna profiling Sangue 60,34 Per un elevato numero di campioni è possibile stipulare delle convezioni a prezzi agevolati; contattare direttamente il responsabile del servizio d analisi di genetica Animale

3 Indicazioni prelievo e conservazione campioni Sessaggio Molecolare avifauna Il test si basa sull amplificazione mediante PCR (Reazione a Catena della Polimerasi) del gene CHD presente su entrambi i cromosomi sessuali ma caratterizzato da inserzioni introniche di differente taglia nei due cromosomi. Il sessaggio molecolare viene eseguito a partire da penna. Qualora i campioni non presentino i requisiti necessari alle analisi verrà richiesto un nuovo prelievo e l analisi sarà eseguita senza costi aggiuntivi. Prelievo delle PENNE Per l analisi sono necessarie 5-6 penne per soggetto (remiganti o timoniere). L analisi verrà eseguita sul calamo, pertanto le penne devono essere prelevate direttamente sul soggetto e maneggiate rispettando le normali condizioni di asepsi. Le penne devono essere confezionate, immediatamente dopo il prelievo, in contenitori monouso (es. buste o microtubi di plastica). Nel caso di prelievi da più soggetti occorre utilizzare un contenitore per ogni soggetto, i contenitori devono essere numerati e la corrispondenza ID provetta-identità del soggetto (identificativo dell animale/numero del caso) deve essere indicata al momento dell accettazione o sul modulo inviato con la spedizione dei campioni. Non si garantisce il risultato per campioni raccolti o conservati non adeguatamente.

4 Freemartin Bovino Indicazioni prelievo e conservazione campioni Il freemartinismo è una condizione di sterilità che si può verificare nelle femmine nate da parti gemellari in co-presenza di individui maschi. Le femmine freemartin presentano due differenti popolazioni leucocitarie, condizione nota come chimerismo XX/XY. Il test molecolare viene eseguito sui soggetti fenotipicamente femmine a partire da un prelievo di sangue. L analisi consiste nell amplificazione mediante PCR (Reazione a Catena della Polimerasi) di una regione del gene amelogenina, presente su entrambi i cromosomi sessuali ma con inserzioni di differente taglia nei due cromosomi. Le femmine normali presentano un profilo XX, mentre le femmine freemartin presentano un profilo XY. Prelievo SANGUE INTERO Per l analisi sono necessari almeno 2ml di sangue raccolto in una provetta sterile contenente K3-EDTA (es. vacutest tappo viola). Prima del prelievo verificare il volume di sangue indicato sulla provetta per mantenere il corretto rapporto sangue/anticoagulante. Dopo il prelievo capovolgere delicatamente 6-7 volte. Conservare a 2-4 C. Nel caso di prelievi da più soggetti i contenitori devono essere numerati e la corrispondenza ID provetta-identità del soggetto (identificativo dell animale/numero del caso) deve essere indicata al momento dell accettazione o sul modulo inviato con la spedizione dei campioni. Non si garantisce il risultato per campioni raccolti o conservati non adeguatamente.

5 Indicazioni prelievo e conservazione campioni DNA profiling Il profilo genetico viene effettuato mediate l utilizzo di marcatori molecolari chiamati micro satelliti. Il nostro laboratorio utilizza kit commerciali (StockMarks Horse, Cattle, and Dog Genotyping Kits, Biotype BIOTYPE Animaltype Pig) che consentono di definire il profilo genetico (una sorta di impronta digitale genetica) del soggetto. In questo modo è possibile determinare l appartenenza di diversi campioni biologi allo stesso individuo (test d identità) ed eventualmente di confrontarlo con il profilo genetico dei genitori o dei figli (test di parentela). Prelievo SANGUE INTERO Per l analisi sono necessari almeno 2ml di sangue raccolto in una provetta sterile contenente K3-EDTA (es. vacutest tappo viola). Prima del prelievo verificare il volume di sangue indicato sulla provetta per mantenere il corretto rapporto sangue/anticoagulante. Dopo il prelievo capovolgere delicatamente 6-7 volte. Conservare a 2-4 C. Nel caso di prelievi da più soggetti i contenitori devono essere numerati e la corrispondenza ID provetta-identità del soggetto (identificativo dell animale/numero del caso) deve essere indicata al momento dell accettazione o sul modulo inviato con la spedizione dei campioni. Non si garantisce il risultato per campioni raccolti o conservati non adeguatamente.

6 Consegna campioni e modalità di pagamento I campioni biologici, raccolti e conservati come indicato alla voce Indicazione prelievo campioni e conservazione dei campioni, dovranno essere recapitati, unitamente al modulo di consegna, entro 48 ore dal prelievo presso l accettazione dell Ospedale Veterinario Universitario, Largo Paolo Braccini, Grugliasco (TO). Orario lun-ven Tel /8. SPEDIZIONE CAMPIONI In alternativa alla consegna presso l accettazione i campioni possono essere inviati unitamente al modulo di consegna all indirizzo: Dipartimento di Scienze Veterinarie, (C.A: dott.ssa Maione o dott.ssa Soglia) Sezione di Genetica, piano terra palazzina Blu Largo Braccini Grugliasco (TO). In tal caso, prima dell invio, sarà necessario chiedere un preventivo al laboratorio (dominga.soglia@unito.it, sandra.maione@unito.it) e il pagamento delle prestazioni dovrà avvenire tramite bonifico contestualmente all invio dei campioni. ISTRUZIONI PER IL PAGAMENTO MEDIANTE BONIFICO: Eseguire il bonifico della cifra indicata dal preventivo/prestazioni a: Struttura Didattica Speciale Veterinaria sul conto IBAN:IT69L BIC/SWIFT Code: BCITITMM Inviare ricevuta di avvenuto bonifico come allegato via a pagamenti.sdsv@unito.it LA FATTURA VERRÀ INVIATA PER POSTA DIRETTAMENTE AL PROPRIETARIO DELL ANIMALE. Consegna esiti Il tempo richiesto per effettuare l analisi è al massimo di 10 giorni lavorativi. Il risultato potrà essere ritirato presso l accettazione dell ospedale oppure inviato tramite .

7 MODULO DI CONSEGNA (uno per campione) DATA ID LAB* ID provetta N caso clinico* Medico referente Proprietario Specie Analisi richiesta: Sessaggio Freemartin DNA profiling/parentela per consegna referto MODULO DI CONSEGNA (uno per campione) DATA ID LAB* ID provetta N caso clinico* Medico referente Proprietario Specie Analisi richiesta: Sessaggio Freemartin DNA profiling/parentela per consegna referto * compilazione da parte della struttura NOTE: