5-HIAA ELISA. Saggio immunoenzimatico per la diagnostica-in-vitro per la determinazione quantitativa di 5-HIAA in urina umana.

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1 Istruzioni per l Uso 5-HIAA ELISA Saggio immunoenzimatico per la diagnostica-in-vitro per la determinazione quantitativa di 5-HIAA in urina umana. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. USO PREVISTO Saggio immunoenzimatico per la diagnostica-in-vitro per la determinazione quantitativa di 5-HIAA in urina umana. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONI Il tumore carcinoide primario deriva di solito dalle cellule enterocromoaffini dell intestino e si localizza il più delle volte nell ileo terminale. Generalmente i tumori carcinoidi determinano la secrezione di quantità varie di indoles. La sindrome carcinoidea è generalmente caratterizzata da un aumento dell escrezione urinaria di acido 5-idrossi-3-indolacetico (5-HIAA), il prodotto finale del metabolismo della serotonina (5-HT). Tradizionalmente l acido 5-idrossi-3-indolacetico (5-HIAA) è prodotto dalla diazotizzazione con nitrosonaphtol, che dà origine a una colorazione purpurea. È comunque ben documentato che molte altre sostanze presenti nell urina possono interferire con questa reazione fornendo erroneamente risultati positivi. Per far fronte a questo problema sono stati svolti dei tentativi con una combinazione di cromografia con scambio di ioni e fluorometria. Tuttavia questi metodi non sono sufficientemente sensibili e richiedono molto tempo. Di recente sono state descritte analisi cromatografiche del 5-HIAA allo stato liquido con fluorometria nella regione ultravioletta dello spettro o con metodo elettrochimico con buoni risultati. Per entrambi i metodi sono necessari solventi di estrazione per via delle numerose componenti dell urina che potrebbero interferire nella misurazione. Il saggio immunoenzimatico per il 5-HIAA è un metodo semplice e innovativo per la determinazione quantitativa di questo importante marcatore della sindrome carcinoidea in piccoli campioni di urina. 3. PRINCIPIO DEL TEST La procedura di dosaggio segue il principio fondamentale del test Elisa competitivo, in quanto vi è competizione tra un antigene biotilinato ed uno non-biotilinato per un numero fisso di siti di legame degli anticorpi. La quantità di antigene biotinilato legato agli anticorpi è inversamente proporzionale alla concentrazione di analiti contenuta nel campione. Quando il sistema è in equilibrio, l antigene libero biotinilato viene eliminato con una fase di lavaggio e l antigene biotinilato legato agli anticorpi viene determinato con l uso di streptavidina coniugata a fosfatasi alcalina come marker ed al fosfato di P- bionitrodifenile come substrato. La quantificazione della concentrazione sconosciuta si ottiene paragonando quest ultima ad una curva preparata usando gli standard conosciuti. 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI 1. Solo per uso diagnostico in-vitro. Solo per uso professionale. 2. Leggere attentamente le istruzioni prima di iniziare il test. Utilizzare il manuale fornito nel kit. Assicurarsi di aver compreso tutte le indicazioni. 3. In caso di danneggiamento del kit contattare IBL o il Vostro fornitore entro 1 settimana dal ricevimento della merce. Non utilizzare i componenti danneggiati ma conservarli per fornire prove del danno assieme al reclamo che inoltrerete al produttore/fornitore. 4. Rispettare lotto e scadenze. Non scambiare o mescolare tra loro reagenti di lotti diversi. Non usare i reagenti scaduti. 5. Attenersi alle Buone Pratiche di Laboratorio e alle direttive di sicurezza. Indossare camici, guanti in lattice e occhiali protettivi se necessario. 6. Alcuni reagenti del kit contengono sostanze pericolose che potrebbero causare irritazioni a pelle ed occhi. Consultare la sezione MATERIALE FORNITO e le etichette per i dettagli precisi. Schede di sicurezza del prodotto sono disponibili sul sito web IBL o su richiesta specifica ad IBL/fornitore. 7. I reagenti preparati e usati e le sostanze chimiche del kit devono essere trattati come rifiuti pericolosi secondo le normative di sicurezza e la legislazione vigente nel Paese in cui il prodotto viene usato. 8. Il personale delle pulizie dev essere informato dal personale specializzato sui possibili rischi e sulle procedure da adottare. 9. Evitare il contatto con la soluzione stop. Può causare irritazioni e ustioni della pelle. 10. Reagenti Metilati dovrebbero essere distrutti aggiungendo 1 ml 0.1 M HCl e dovrebbero essere trattati come rifiuto chimico, tanto quanto l eccesso di Diluente del Reattivo. Version / 6

3 5. CONSERVAZIONE E STABILITÀ Il kit è spedito e trasportato a temperatura ambiente e deve essere conservato a 2-8 C. Non esporre a luce solare diretta e ad alte temperature. Le informazioni relative a conservazione e stabilità di tutti i reagenti e dei campioni sono riportate nel capitolo corrispondente. La piastra microtitrata aperta è stabile fino a scadenza del kit se conservata nel suo involucro ben chiuso riposta a 2 8 C. 6. PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Alcuni cibi contengono dosi sostanziali di serotonina. Alcuni farmaci potrebbero favorire il rilascio di serotonina e potrebbero alterare i livelli nel campione. I pazienti devono evitare di assumere tali cibi (es. avocado, banane, caffè, prugne, ananas, pomodori, noci) e farmaci (es. aspirina, corticotropina, MAO inibitori, fenazetina, catecolamine, reserpina, nicotina). 5-HIAA è fotosensibile. Conservare al riparo dalla luce durante la raccolta dei campioni. Urina È possibile usare campioni freschi e campioni delle 24 ore. Il volume totale delle urine delle 24 ore deve essere raccolto in un unico recipiente con aggiunta di ml di HCl 6 N come conservante. Segnare il volume totale per il calcolo dei risultati. Mescolare e centrifugare i campioni prima di usare nel saggio. Conservazione: 2-8 C -20 C (Aliquote) Non esporre alla luce solare diretta e al calore. Stabilità: 7 giorni 3 mesi Evitare la ripetizione di cicli di congelamento/scongelamento. 7. MATERIALE FORNITO I reagenti forniti nel kit sono sufficienti per le preparazioni in singolo dei campioni (mutilazione) e per analisi in doppio durante l esecuzione del test. Reagenti aggiuntivi sono disponibili su richiesta. Quantità Simbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP 1 x 8 ml ANTISERUM 1 x 8 ml BIOTIN 1 x 0.3 ml ENZCONJ CONC 1 x 7 x 1 ml CAL A-G 1 x 2 x 0.5 ml CONTROL 1+2 LYO 1 x 2 ml METHYLREAG 1 x 1 ml HCL 1 x 50 ml ASSAYBUF CONC 1 x 4 ml DILREAG 2 x 50 ml WASHBUF CONC 2 x 13 ml PNPP SUBS 1 x 15 ml PNPP STOP Micropiastra Strisce separabili. Coniugato con anti-coniglio IgG. (capra, policlonale). Acido 5-idrossiindolacetico (5-HIAA) Antisiero Di colore blu. Pronto/a all uso. Contiene: Antisiero (coniglio), tampone fosfato, stabilizzatori. Acido 5-idrossiindolacetico (5-HIAA) Biotina Pronto/a all uso. Di Colore Giallo. Contiene: tampone fosfato, stabilizzatori. Coniugato Enzimatico, Concentrato (100x) Contiene: Streptavidin fosfatase alcalina, Tampone Tris, stabilizzatori. Standard A-G 0; 0.2; 0.55; 1.8; 7.5; 20; 55 mg/l 0; 1.1; 2.9; 9.5; 39.4; 105; 288 µmol/l Pronto/a all uso. Contiene: Acido 5-idrossiindolacetico (5-HIAA) (metilato), stabilizzatori. Controllo 1+2, liofilizzato Contiene: urina umana (normale e patologico). Per le concentrazioni /gli intervalli accettabili vedere le etichette sulle provette. Reagente di Metilazione Di Colore Giallo. Pronto/a all uso. Contiene: diclorometano. HCl Pronto/a all uso. 0.1 M HCl. 3 x FOIL Pellicola Adesiva Tampone Saggio, Concentrato (10x) Contiene: tampone fosfato, BSA, stabilizzatori. Reagente di Diluzione Pronto/a all uso. Contiene: N,N-dimetilformamide. Tampone Lavaggio, Concentrato (20x) Contiene: tampone fosfato, Tween, stabilizzatori. Soluzione Substrato PNPP Pronto/a all uso. Contiene: p-nitrofenil fosfato (PNPP). Soluzione Stop PNPP Pronto/a all uso. Contiene: 1 M NaOH, 0.25 M EDTA. Version / 6

4 8. MATERIALI NECESSARI MA NON FORNITI 1. Micropipette (Multipette Eppendorf o similari, < 3 % CV). Volumi: 20; 25; 50; 100; 1000 µl. 2. Provette in vetro (12 x 75 mm) 3. Vortex mixer 4. Micropipetta 8-Canali con contenitori per reagenti 5. Spruzzetta per lavaggi, lavatore per micropiastre automatico o semi automatico 6. Lettore per micropiastre in grado di leggere ad assorbanza di 405 nm (lunghezza d onda di riferimento nm) 7. Acqua bidistillata o deionizzata 8. Cappa aspirante 9. Carta assorbente, puntali per pipette e timer 9. NOTE PER LA PROCEDURA 1. Qualsiasi manipolazione impropria dei campioni o modifica alla procedura può compromettere i risultati. Rispettare rigorosamente i volumi, i tempi e le temperature di incubazione e i passaggi di pretrattamento dei campioni indicati in metodica. Utilizzare pipette calibrate. 2. Una volta iniziato il test completare tutti i passaggi senza interruzioni. Assicurarsi che tutti i reagenti siano stati precedentemente preparati in tempo utile. Far raggiungere la temperatura ambiente ai campioni e ai componenti del kit (18-25 C) e mescolare delicatamente ciascun reattivo liquido e campione prima dell uso. Non creare schiuma durante il mescolamento. 3. Evitare la contaminazione di reagenti, pipette, pozzetti o provette. Usare puntali di plastica nuovi per ogni reagente, standard e campione. Non scambiare i tappi tra loro. Tappare sempre i flaconi non utilizzati. Non riutilizzare pozzetti/provette o reagenti. 4. Si consiglia di saggiare i campioni in doppio per poter identificare eventuali errori di pipettamento. 5. Usare uno schema di pipettamento per realizzare un appropriata distribuzione sulla piastra. 6. Il tempo di incubazione influisce sui risultati. Tutti i pozzetti dovrebbero essere dispensati nello stesso ordine e sequenza temporale. Si raccomanda una pipetta multicanale a 8 canali per pipettare le soluzioni in tutti i pozzetti. 7. Il lavaggio della micropiastra è importante. Pozzetti lavati in modo inappropriato possono portare a risultati erronei. Si raccomanda una pipetta multicanale o un lavatore automatico per piastre. Non far asciugare i pozzetti tra le varie incubazioni. Non graffiare i pozzetti rivestiti durante risciacqui e aspirazioni. Risciacquare e versare i reagenti con cura. Durante i risciacqui assicurarsi che i pozzetti siano ben riempiti con la soluzione di lavaggio e che non ci siano residui nei pozzetti. 8. L umidità influisce sui pozzetti/tubi rivestiti. Non aprire l involucro finché non ha raggiunto la temperatura ambiente. Riporre immediatamente i tubi/pozzetti non utilizzati nell involucro con il disseccante. 10. ISTRUZIONI PRE-TEST Manuelle und automatisierte Version Il contenuto del kit per 96 determinazioni può essere diviso per 3 esecuzioni separate. I volumi indicati di seguito si riferiscono a un'esecuzione con 4 strisce (32 determinazioni). Se il cliente vuole ridurre il numero di standard da 7 a 6 può omettere lo Standard G. Il campo di riferimento verrà quindi ridotto a 3000 µg/l Preparazione di componenti liofilizzati o concentrati Diluire / dissolvere Componente Diluente Rapporto Note 15 ml ASSAYBUF CONC CONTROL 1 LYO CONTROL 2 LYO 15 ml WASHBUF CONC 60 µl ENZCONJ CONC fino a 150 ml con 0.5 ml fino a 300 ml con 6.0 ml acqua bidist. 0.1 M HCl acqua bidist. Tampone Saggio (diluito) Conservazione Stabilità 1:10 Mescolare energicamente. 2-8 C 2 settimane 1:20 1:101 Lasciare a riposo per 15 min. Mescolare senza formare schiuma. Riscaldare a 37 C per sciogliere i cristalli. Mescolare energicamente. Preparare freschi ed utilizzare solo una volta. Mescolare senza formare schiuma. -20 C (Aliquote) 8 settimane 2-8 C 4 settimane C 30 min Version / 6

5 10.2. Diluizione dei Campioni Campioni dei quali si sospetta che potrebbero contenere concentrazioni maggiori dello standard più alto vanno diluiti con Tampone Saggio dopo il processo di metilazione. 11. PROCEDURA DEL TEST Diluizione e Metilazione di campioni di Controllo e di Pazienti (non degli Standard) La preparazione dei campioni conduce a una diluizione alla 255 potenza. Questo è già stato preso in considerazione nella concentrazione degli standard. Non metilare gli Standard. Sono già metilati. 1. Pipettare 20 µl di Soluzione di Controllo e di campioni nelle rispettive fiale di vetro. 2. Da questo momento in poi lavorare sotto una cappa ventilata! 3. Pipettare 50 µl di Reagente di Diluzione in ogni fiala. Centrifugare col vortex. 4. Pipettare 25 µl di Reagente di Metilazione in ogni fiala. Centrifugare col vortex ogni fiala immediatamente dopo aver pipettato. Nota: Il colore giallo deve rimanere. L immediata scomparsa del colore indica un eccesso di acido. In questo caso aggiungere altri 25 µl di Reagente di Metilazione in tutte le fiale. 5. Coprire le fiale. Incubare per 20 min a TA (18-25 C). 6. Pipettare 5 ml di Tampone Saggio diluito in ogni fiala. Chiudere le fiale con i rispettivi coperchi e capovolgere ogni fiala manualmente (o in un mixer) almeno 5 volte per ottenere una miscelazione completa. Mesolare nel Vortex. 7. Da questo momento in poi la cappa ventilata non è più necessaria. 8. Prelevare 50 µl di aliquote di supernatante e eseguire il test ELISA immediatamente. Il supernatante è stabile solo per 1 h a TA (18-25 C) ELISA 1. Pipettare 50 µl di Standard, Controllo metilato e campione del paziente metilato nei rispettivi pozzetti della piastra microtiter. 2. Pipettare 50 µl di Biotina 5-HIAA in ogni pozzetto. 3. Pipettare 50 µl di Antisiero 5-HIAA in ogni pozzetto. Agitare la piastra delicatamente. 4. Coprire la piastra con la pellicola adesiva. Incubare per 60 min a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 giri al min). 5. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra per 3 volte con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere l eccesso di soluzione picchiettando la piastra capovolta su una salvietta di carta. 6. Pipettare 150 µl di Coniugato Enzimatico appena preparato in ogni pozzetto. 7. Coprire la piastra con nuova pellicola adesiva. Incubare per 60 min a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 giri al min). 8. Rimuovere la pellicola adesiva. Eliminare la soluzione d incubazione. Lavare la piastra per 3 volte con 250 µl di Tampone Lavaggio diluito. Rimuovere la soluzione in eccesso picchiettando energicamente la piastra capovolta su della carta assorbente. 9. Per aggiungere le Soluzioni Substrato e Stop usare, possibilmente, una micropipetta 8-canali. Pipettare con intervalli di tempo costanti per le Soluzioni Stop e Substrato. Usare uno spostamento positivo ed evitare la formazione di bolle d aria. 10. Pipettare 200 µl di Soluzione Substrato PNPP in ogni pozzetto. 11. Incubare 30 min a TA (18-25 C) su un oscillatore orbitale (500 giri al min). 12. Fermate la reazione substrato aggiungendo 50 µl di Soluzione Stop PNPP in ogni pozzetto. Mescolare delicatamente il contenuto agitando leggermente la piastra. 13. Misurare la densità ottica con un fotometro a 405 nm (Lunghezza d onda di riferimento: nm) entro 60 min dall aggiunta della Soluzione Stop. Version / 6

6 12. CONTROLLO DI QUALITA I risultati del test sono validi solo se il test è stato eseguito seguendo le istruzioni per l uso. L utente deve inoltre attenersi rigorosamente ai principi della BPL (Buona Pratica di Laboratorio) o a norme equivalenti. Gli utenti e il laboratorio devono avere un sistema di formulazione della diagnosi conforme alle Buone Pratiche di Laboratorio. Tutti i controlli devono risultare compresi entro gli intervalli accettabili indicati sulle etichette e il Certificato QC. Se i criteri non sono soddisfatti il test non è valido e dovrebbe essere ripetuto. Ogni laboratorio dovrebbe usare campioni noti come ulteriori controlli. Si consiglia la partecipazione a programmi di controllo qualità periodici. In caso di deviazioni devono essere forniti i seguenti dati: Scadenza dei reagenti (preparati), condizioni di conservazione, pipette, strumenti, condizioni d incubazione e metodi di lavaggio. 13. CALCOLO DEI RISULTATI La DO ottenute per gli standard (asse y, lineare) sono messe in grafico rispetto alla loro concentrazione (asse x, logaritmico) sia su carta per grafico semilogaritmico che con metodo automatico. Buoni risultati si ottengono con grafici cubic spline, 4 Parametri Logistica o Logit-Log. Per il calcolo della curva standard utilizzare ogni segnale degli standard (omettere ovviamente i valori dei duplicati molto al di fuori dei risultati attesi e impiegare il valore singolo più plausibile). La concentrazione dei campioni può essere ricavata dalla curva standard. I campioni con concentrazioni superiori al più alto degli standards devono essere diluiti come descritto nel paragrafo ISTRUZIONI PRE-TEST e ritestati. Calcolare l escrezione a 24 ore per ciascun campione: µg/24 h = µg/l x L/24 h Conversione: Acido 5-idrossiindolacetico (5-HIAA) (mg/l) x 5.25 = µmol/l Tipica Curva di Calibrazione (Esempio. Non usare per il calcolo!) Acido 5- Standard idrossiindolacetico Media DO DO/DO max (%) (5-HIAA) (mg/l) A B C D E F G OD/ODmax (%) HIAA ELISA (mg/l) 14. VALORI ATTESI I soli risultati non dovrebbero essere l unica motivazione alla base di una scelta terapeutica. Devono essere correlati ad altre osservazioni cliniche e test diagnostici. Soggetti apparentemente sani mostrano i seguenti valori: (97.5 % percentile) Acido 5- idrossiindolace tico (5-HIAA) Urina mg/24h µmol/giorni Si consiglia ad ogni laboratorio di calcolare i propri valori di riferimento. 15. LIMITI DELLA PROCEDURA La raccolta e conservazione dei campioni ha influenza significativa sui risultati del test. Vedere la sezione PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI per maggiori dettagli. Per le reazioni crociate vedere la sezione PERFORMANCE. Version / 6

7 16. PERFORMANCE Specificità Analitica (Reattività Crociate) Sensibilità Analitica (Limite di Rilevazione) Precisione Intervallo (mg/l) CV (%) Intra-Saggio Inter-Saggio Sostanza Reattività Crociate (%) Acido 5-idrossiindolacetico (5-HIAA) 100 Serotonin-hydrochloride 9.5 Indole-3-Acido piruvico 1.0 Melatonina Indole-Acido Acrilico 0.9 Triptamina Indole-Acido acetico 0.8 L-5-OH-Triptofano Methoxytryptophol Metossi-DL-Triptofano 0.01 DL-Triptofano mg/l Media (Zero-Standard) - 2SD Intervallo (mg/l) Diluizioni Seriali fino a Intervallo (%) Linearità : Media (%) Intervallo (%) Recupero % Recupero dopo i picchi Confronto del metodo versione abbreviata = 1.04 x Tutta la notte r = 0.98; n = RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI SUL PRODOTTO 1. Millot S., Begout M. L., Person-Le Ruyet J., Breuil G., Di-Poi C., Fievet J. Pineau P., Roue M., Severe A. Feed demand behavior in sea bass juveniles: effects on individual specific growth rate variation and health. Aquaculture, January (2008), Vol. 274, Issue 1, Hou C Jia F, Liu Y, Li L Brain Research 1095 (2006) : CSF serotonin, 5-hydroxyindolacetic acid and neuropeptide Y levels in severe major depressive disorder. 3. Zuetenhorst JM et al. Daily Cyclic Changes in the Urinary Excretion of 5-Hydroxyindoleacetic Acid in Patients with Carcinoid Tumors. Clin. Chem. 50/9: (2004) 4. Mueck AO et al. Effect on biochemical vasoactive markers during postmenopausal hormone replacement therapy: estradiol versus estradiol/dienogest. Maturitas 38: (2001) 5. Mueck AO et al. Der Effekt von Norethisteron-Acetat auf cgmp und Serotonin als biochemische Marker der endothelialen Gefässfunktion bei postmenopausalen Frauen. J. Menopause 3/1998: 23ff. (1998) Version / 6

8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /