VITAMINA D. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente.
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- Lazzaro Capasso
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1 MODALITA' DI RICHIESTA: Pazienti interni: tramite modulo interno prestampato. Pazienti esterni: tramite richiesta del medico curante. VITAMINA D PREPARAZIONE DEL PAZIENTE ALL'ESAME: Il paziente deve trovarsi in condizioni basali dopo un digiuno di circa 10 ore. MODALITA' DI RACCOLTA DEL CAMPIONE: - Prelievo venoso. - Utilizzo del sistema sottovuoto o di siringa monouso o butterfly. - Utilizzo provetta senza additivi (rosso-marrone). MODALITA DI TRASPORTO DEL CAMPIONE: Pazienti interni: da ogni stanza i campioni sono portati da un infermiere in un contenitore adeguato in laboratorio. Pazienti esterni: dalla sala prelievi (attigua al laboratorio) i campioni, attraverso l apposita finestra, sono consegnati al laboratorio. Vedi procedura. MODALITA' DI CONSERVAZIONE DEL CAMPIONE: La provetta madre dopo essere stata processata è conservata tra 2 e 8 C per 6 giorni Se il campione non può essere processato subito, il surnatante è raccolto mediante pipetta monouso in una provetta di plastica tappata, su cui è applicata l etichetta con codice a barre, e conservata secondo le modalità previste dalla metodica descritta nella scheda tecnica. Evitare congelamenti ripetuti. FASE PRE-ANALITICA: Sulla provetta madre è posta un etichetta con codice a barre che permette la trasmissione bidirezionale dei dati (esami richiesti e relativi risultati) tra il PC dello strumento e il PC gestionale. La provetta madre è centrifugata a 3750 rpm per 8 minuti. FASE ANALITICA: La provetta madre è posizionata sul rack porta campioni dello strumento LIAISON dalla preanalitica COBAS p 312, che provvede alla registrazione del check-in e quindi processata secondo le modalità analitiche previste. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente. CRITERI DI VALIDAZIONE DEL DATO ANALITICO: Analisi dei controlli qualità interni secondo le regole di Westgard e controlli qualità esterni (VEQ). VALORI PANICO: Non applicabile CARATTERISTICHE E DESCRIZIONE DEL METODO: Il LIAISON 25 OH Vitamin D Assay è un test immunologico diretto, competitivo, basato sul principio della chemiluminescenza (CLIA) per la determinazione quantitativa della Vitamina D 25 (OH) totale nel siero. Durante la prima incubazione, la vitamina D 25 (OH) è dissociata dalla sua proteina legante e si lega all anticorpo specifico sulla fase solida. Dopo 10 minuti viene aggiunta come tracciante la vitamina D, legata ad un derivato dell isoluminolo. Dopo una seconda incubazione di 10 minuti, il materiale non legato viene rimosso mediante un ciclo di lavaggio. In seguito vengono aggiunti i reagenti starter che inducono una reazione di chemiluminescenza di tipo flash. Il segnale luminoso è misurato da un fotomoltiplicatore come unità di luce relativa (RLU) ed è inversamente proporzionale alla concentrazione di vitamina D 25 (OH) presente nei calibratori, nei controlli o nei campioni. PRECISIONE, ACCURATEZZA E SENSIBILITA : Vedi scheda tecnica. INTERFERENZE: Vedi scheda tecnica. SIGNIFICATIVITA (VARIABILITA ANALITICA E VARIABILITA BIOLOGICA):
2 Vedi scheda tecnica. COMPILAZIONE, TRASMISSIONE E CONSEGNA REFERTI: I risultati, dopo la validazione tecnica sono controllati e validati clinicamente per poi essere firmati digitalmente dal responsabile del laboratorio o da chi ne fa le veci. Dopo la firma digitale i referti sono disponibili on line per essere visionati dai reparti se i pazienti sono interni. Per i pazienti esterni i referti possono essere stampati su richiesta alla segreteria o sono accessibili via internet tramite l utilizzo dell apposito codice rilasciato al momento dell accettazione del paziente dalla segreteria. PRINCIPALI CRITERI INTERPRETATIVI: La vitamina D è una vitamina liposolubile che interviene nel metabolismo calcio-fosforo ed esiste in due forme: una è il colecalciferolo (Vitamina D3) che viene sintetizzato a livello cutaneo per irradiazione ultravioletta a partire dal dal 7- deidrocolesterolo, ma che può anche essere introdotta con grassi animali (fegato di pesce, latte, carni); l altra è l ergocalciferolo (Vitamina D2), derivata, per affetto dell irradiazione ultravioletta, dall ergosterolo introdotto con la dieta (lievito). Entrambe queste forme subiscono nell organismo due importanti idrossilazioni: la prima nel fegato con formazione del calcidiolo: 25(OH)Vitamina D); la seconda nel rene dove si forma il calcitriolo: 1,25(OH) vitamina D, che rappresenta il metabolita biologicamente attivo. La vitamina D agisce principalmente, aumentando l assorbimento intestinale di calcio, sul riassorbimento osseo (a basse dosi favorisce la mineralizzazione; ad alte dosi provoca una mobilizzazione del calcio stimolando gli osteoclasti), aumentando nel contempo, a livello renale, il riassorbimento tubulare del fosforo. Deficit della 25(OH) vitamina D si osservano nel rachitismo infantile, osteoporosi, osteomalacia, gravidanza, nella crescita, negli anziani, in menopausa, nei malassorbimenti, nell insufficienza epatica. Idrossido d alluminio, colestiramina, cortisonici, anticonvulsivanti, isoniazide, rifampicina ne riducono la concentrazione. La variabilità stagionale è dovuta alla diversa esposizione ai raggi solari che aumenta la produzione endogena del colecalciferolo. Per valori di 25(OH) vitamina D inferiori a 10 ng/ml si è in presenza di una importante carenza. Una intossicazione da Vitamina D può comparire per valori di 25(OH) vitamina D superiori a 100 ng/ml. TEMPO DI ATTESA PER L'ESAME: Uguale o inferiore a 8 ore. 08/04/2015
3 DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave Stillwater, MN USA Tel Fax Modifiche: 5, 10 Soppressioni: 1. USO PREVISTO LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay impiega la tecnologia di immunodosaggio a chemiluminescenza CLIA per la determinazione quantitativa della 25-idrossivitamina D e di altri metaboliti idrossilati della vitamina D nel siero umano, nel plasma con EDTA o nel plasma con litio eparina, da utilizzarsi per valutare l apporto di vitamina D del paziente su analizzatore della serie LIAISON. I risultati devono essere usati insieme ad altri dati clinici e di laboratorio come ausilio per il medico nella decisione del trattamento individuale in una popolazione di pazienti adulti. 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST Il ruolo della vitamina D nel metabolismo osseo e minerale è riconosciuto fin dalla prima identificazione come fattore di potenziale cura per il rachitismo. La vitamina D è ora tuttavia riconosciuta come pro-ormone con molteplici ruoli nel mantenimento di una salute ottimale. [1] La vitamina D 3 (colecalciferolo) e la vitamina D 2 (ergocalciferolo) sono le due forme di vitamina D più abbondanti presenti nell'organismo. La vitamina D 3 viene sintetizzata nella pelle a partire dal 7-deidrocolesterolo in risposta alla luce solare. La migliore fonte alimentare di D 3 è l olio di pesce, in particolare, salmone e sgombro. Fonti nutrizionali di vitamina D 2 sono rappresentate da verdure, lievito e funghi. La vitamina D (D 3, D 2 e loro metaboliti) viene convertita a 25-idrossivitamina D nel fegato. La misurazione della concentrazione sierica o plasmatica di vitamina D 25 (OH) è il più valido indicatore di stato nutrizionale per la vitamina D. [2] Il livello ottimale di vitamina D 25 (OH) è oggetto di dibattito anche se un livello >32ng/ml (>80nmol/L) è considerato sufficiente per la buona salute delle ossa.[3-13] La tossicità della vitamina D è un problema riconosciuto ma di rara evenienza. Al contrario, un crescente problema della salute pubblica recentemente identificato, è costituito dall insufficienza di vitamina D. Vari studi di ricerca hanno identificato una diffusa insufficienza di vitamina D in popolazioni apparentemente sane di tutto il mondo. [3-13] La carenza di vitamina D viene generalmente trattata con preparati di vitamina D 2 o D 3 a dosaggi da IU/mese a IU/settimana. [14] Alimenti e complementi alimentari fortificati possono contenere una delle forme. Onde garantire un accurata valutazione della vitamina D totale, occorre misurarne tutte le forme, inclusi D 3, D 2 e rispettivi metaboliti. Studi recenti hanno identificato un 3-epimero o vitamina D 25 (OH) inattivo, che può essere presente al di sotto di un anno di età. [15] Pertanto è importante che in un test si eviti di misurare la forma 3-epi inattiva e si misuri solo le forme D 3 e D 2 in modo uguale. Più recentemente, diversi studi hanno suggerito che l'insufficienza di vitamina D sia associata a un aumento del rischio di molte malattie croniche, comprese malattie cardiovascolari, cancro, infezioni e malattie autoimmuni. 3. PRINCIPIO DEL DOSAGGIO Il LIAISON 25 OH Vitamin D Assay è un test immunologico diretto, competitivo, basato sul principio della chemiluminescenza (CLIA) per la determinazione quantitativa della Vitamina D 25 (OH) totale nel siero. Durante la prima incubazione, la vitamina D 25 (OH) è dissociata dalla sua proteina legante e si lega all anticorpo specifico sulla fase solida. Dopo 10 minuti viene aggiunta come tracciante la vitamina D, legata ad un derivato dell isoluminolo. Dopo una seconda incubazione di 10 minuti, il materiale non legato viene rimosso mediante un ciclo di lavaggio. In seguito vengono aggiunti i reagenti starter che inducono una reazione di chemiluminescenza di tipo flash. Il segnale luminoso è misurato da un fotomoltiplicatore come unità di luce relativa (RLU) ed è inversamente proporzionale alla concentrazione di vitamina D 25 (OH) presente nei calibratori, nei controlli o nei campioni. 1 / 10 IT
4 4. MATERIALI FORNITI IN DOTAZIONE Integrale di reagenti: Particelle magnetiche (2,4 ml) [SORB] Particelle magnetiche coattate con anticorpo di capra diretto contro la vitamina D 25 (OH), proteina, tampone fosfato, < 0,1% di azoturo di sodio. Tampone per il dosaggio (28,0 ml) [BUF AS] Tampone con 10% di etanolo, surfattanti e 0,2% Proclin 300. Coniugato (4,5 ml) [CONJ] Vitamina D 25 (OH) coniugata con un derivato dell isoluminolo, in tampone fosfato con etanolo al 10%, EDTA, surfattante e 0,1% di acido benzoico come conservante. Siero umano, BSA, <0,1% di azoturo di sodio e vitamina D 25 Calibratore 1 (OH). Le concentrazioni di calibratore (ng/ml) sono tarate contro [CAL 1] (1,0 ml) preparazioni standard contenenti vitamina D 25 (OH) altamente purificata. Calibratore 2 (1,0 ml) [CAL 2] Siero umano, BSA, <0,1% di azoturo di sodio e vitamina D 25 (OH). Le concentrazioni di calibratore (ng/ml) sono tarate contro preparazioni standard contenenti vitamina D 25 (OH) altamente purificata. Numero di test 100 ProClin 300 è un marchio registrato di Rohm e Haas Co. Tutti i reagenti sono forniti pronti all'uso. Materiali richiesti ma non forniti (correlati al sistema) Analizzatore LIAISON XL Analizzatore LIAISON LIAISON Wash/System Fluid (319100) LIAISON Wash/System Fluid (319100) LIAISON XL Waste Bags (REF X0025) LIAISON Waste Bags (REF ) LIAISON XL Cuvettes (REF X0016) LIAISON Module (REF ) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Starter Kit (REF ), LIAISON XL Disposable Tips (REF X0015) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Cleaning Kit (REF ) LIAISON Light Check (REF ) LIAISON Light Check 12 (REF ) Altri materiali necessari: LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Control Set (Cat. no ) LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent (Cat. no ) 5. AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno nell'uomo o negli animali. Sicurezza generale: Tutti i campioni, tutti i reagenti biologici e tutti i materiali usati per effettuare il dosaggio devono essere considerati potenzialmente in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi o le mucose. Durante l'esecuzione del test seguire le abituali pratiche di igiene industriale. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nel laboratorio in cui si esegue il dosaggio. Non pipettare soluzioni con la bocca. Evitare il contatto diretto con qualsiasi tipo di materiale potenzialmente infettivo indossando camici da laboratorio, protezioni per gli occhi/il viso e guanti monouso. Lavare accuratamente le mani al termine di ciascun dosaggio. Evitare schizzi o la formazione di aerosol quando si maneggiano, diluiscono o trasferiscono campioni o reagenti. Eventuali perdite di reagente dovranno essere decontaminate con una soluzione di candeggina al 10% (contenente ipoclorito di sodio allo 0,5%) e smaltite come potenzialmente infettive. I materiali di rifiuto devono essere smaltiti secondo le disposizioni vigenti e le linee guida impartite dagli enti aventi competenza nel territorio dove ha sede il laboratorio e secondo la regolamentazione vigente in ciascun paese. Non usare kit o componenti dopo la data di scadenza indicata sull'etichetta. Informazioni sui pericoli chimici e di sicurezza: I reagenti di questo kit sono classificati in base allo standard US OSHA Hazard Communication standard, alle leggi sul diritto di conoscenza dei singoli stati USA, alle regolamentazioni sul controllo dei prodotti del Canadian Centre for Occupational Health and Safety e alle direttive applicabili dell'unione Europea (vedere la scheda di sicurezza dei materiali per ulteriori informazioni). 2 / 10 IT
5 Reattivi contenenti materiale di origine umana: Attenzione Trattare come potenzialmente infettivi. Ogni unità di siero/plasma proveniente da donatore usata nella preparazione di questo prodotto è stata sottoposta a test secondo una metodica approvata dalla FDA statunitense e trovata non reattiva per la presenza di anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza umana 1 e 2 (HIV 1/2), dell'antigene di superficie dell'epatite B (HBV) e di anticorpi dell'epatite C (HCV). Sebbene siano molto accurati, questi metodi non offrono garanzie assolute di rilevamento di tutte le unità infettate. Questo prodotto può inoltre contenere altri materiali patogeni di provenienza umana per i quali non esiste un test approvato. Poiché nessun metodo di analisi noto garantisce con assoluta certezza l'assenza di virus quali HIV, HBV e HCV o di altri agenti infettivi, tutti i prodotti contenenti materiale di origine umana devono essere trattati secondo le precauzioni universalmente riconosciute e, ove necessario, in conformità alle buone pratiche di laboratorio come descritte nella versione attuale del manuale Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL, Biosicurezza nei laboratori microbiologici e biomedici) redatto dai Centri per la prevenzione e il controllo delle malattie (CDC) e dagli istituti nazionali di sanità o nell'edizione corrente del Laboratory Biosafety Manual (Manuale di biosicurezza nei laboratori) dell'organizzazione mondiale della sanità. GHS/CLP: ProClin Sodio azide Etanolo CAS No.: Reagenti: [BUF AS] [SORB] [CAL 1] [CONJ] [BUF AS] [CAL 2] Classificazione: Sensibilizzazione cutanea, Non richiesto Non richiesto categoria di pericolo 1 Avvertenza: Attenzione Non richiesto Non richiesto Pittogramma: None required None required GHS07 Punto esclamativo H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea. P261 Evitare di respirare la nebbia/ gli aerosol. P272 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. P280 Indossare guanti/ indumenti protettivi/ Proteggere gli occhi. Indicazione Di Pericolo: Non richiesto Non richiesto Consigli Di Prudenza: Non richiesto P210 Tenere lontano da fonti di calore, scintille, fiamme libere o superfici riscaldate. Non fumare. P233 Tenere il recipiente ben chiuso. P242 Utilizzare solo utensili antiscintillamento. P243 Prendere precauzioni contro le scariche elettrostatiche. P403+P235 Conservare in luogo fresco e ben ventilato. Reattivi contenenti sodio azide: Alcuni reagenti di questo kit contengono sodio azide. La sodio azide può reagire con le tubature in piombo o rame e formare azidi metalliche altamente esplosive. Al momento dello smaltimento, sciacquare con abbondante acqua al fine di evitare la formazione di azide. Per ulteriori informazioni, consultare la sezione "Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts (Decontaminazione degli scarichi dei lavandini dei laboratori per rimuovere i sali di azide)" nel manuale per la gestione della sicurezza Guide-Safety Management No. CDC-22, pubblicato dai Centri per il controllo e la prevenzione delle malattie di Atlanta, GA, PREPARAZIONE DELL'INTEGRALE DI REAGENTI Prendere nota delle importanti precauzioni per la manipolazione dei reagenti di seguito descritte: 1. Risospensione di particelle magnetiche Le particelle magnetiche devono essere completamente risospese prima di inserire l integrale nello strumento. Per garantire la sospensione completa delle particelle, osservare le fasi di seguito indicate: Prima di rimuovere il sigillo, girare la rotellina posta in corrispondenza del vano delle particelle magnetiche fino a quando il colore della sospensione vira al marrone. Agitare delicatamente orizzontalmente per favorire la sospensione delle particelle magnetiche (evitare la formazione di schiuma). Controllare visivamente il fondo del flacone delle particelle magnetiche per confermare la risospensione di tutte le particelle magnetiche depositate. Ripetere al bisogno sino alla completa risospensione delle particelle magnetiche. Dopo l'eliminazione del sigillo, pulire accuratamente la superficie di ogni setto per eliminare eventuali liquidi residui. In alternativa è possibile usare il LIAISON Xcelerator (cat. no. A0090) per supportare la risospensione. 3 / 10 IT
6 2. Formazione di schiuma nei reagenti Al fine di garantire prestazioni ottimali dell integrale, si raccomanda di evitare la formazione di schiuma nei reagenti. Osservare le raccomandazioni sotto specificate per evitare tale evento: Prima di usare l integrale, controllare visivamente i reagenti, in particolare i calibratori (in posizione due e tre dopo la fiala delle particelle magnetiche), per escludere la presenza di schiuma. Nel caso si riscontri la presenza di schiuma dopo la risospensione delle particelle magnetiche, posizionare l integrale sullo strumento e lasciare sciogliere la schiuma. L integrale è pronto per l uso quando la schiuma è sciolta e l integrale è rimasto sullo strumento ed è stato mescolato per almeno 30 minuti. 3. Caricare l'integrale nell'area reagenti Analizzatore LIAISON Inserire l'integrale nell'area reagenti dell'analizzatore con l'etichetta del codice a barre rivolta a sinistra e lasciare riposare per 30 minuti prima dell'uso. L'analizzatore miscela automaticamente e risospende le particelle magnetiche completamente. Seguire le istruzioni indicate nel manuale per l'operatore dell'analizzatore per caricare i campioni e iniziare l'analisi. Analizzatore LIAISON XL L analizzatore LIAISON XL è dotato di un dispositivo magnetico a stato solido incorporato che favorisce la dispersione delle microparticelle prima del posizionamento di un integrale di reattivi nell area reattivi dello strumento. Per ulteriori dettagli fare riferimento al manuale operativo dell analizzatore. a. Inserire l integrale di reattivi nell apposita fessura. b. Lasciare l integrale di reattivi nel dispositivo magnetico a stato solido per almeno 30 secondi (massimo alcuni minuti). Ripetere secondo necessità. Posizionare l integrale di reattivi nell area reattivi dell analizzatore con l etichetta del codice a barre rivolta verso sinistra e lasciare riposare per 15 minuti prima dell uso. Lo strumento mescola automaticamente e risospende completamente le particelle magnetiche. Seguire le istruzioni indicate nel Manuale operativo dell analizzatore per caricare i campioni ed iniziare il test. 7. CONSERVAZIONE E STABILITÀ DELL'INTEGRALE DI REAGENTI Al momento dell'arrivo, l'integrale di reagenti deve essere conservato al buio, in posizione verticale al fine di facilitare la sospensione delle particelle magnetiche. Se l'integrale di reagenti è conservato intatto, protetto dalla luce e in posizione verticale, i reagenti sono stabili a 2-8 C fino alla data di scadenza. Non congelare. L'integrale di reagenti non deve essere usato oltre la data di scadenza riportata sulle etichette del kit e dell'integrale. Dopo l'uso, l integrale di reagenti deve essere sigillato con il nastro fornito in dotazione con il kit e riportato alla temperatura di conservazione di 2-8 C al buio. La stabilità dopo l apertura è di 4 settimane, se opportunamente conservato. Evitare di esporre il prodotto alla luce se non necessario. 8. PRELIEVO E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI Possono essere usati siero umano, plasma con EDTA, plasma litio eparina o provette SST. Campioni di pazienti a digiuno sono preferibili ma non indispensabili. Prelevare il sangue per puntura venosa con tecnica asettica, lasciarlo coagulare e separare il siero dal coagulo il più presto possibile dopo il prelievo I campioni possono essere conservati in fiale di materiale plastico o vetro. Non sono richiesti additivi o conservanti per mantenere l'integrità del campione. Il particolato può interferire con il test. I campioni fortemente emolizzati o lipemici, così come i campioni che presentano materiale in sospensione o evidente contaminazione microbica, non devono essere analizzati. Se l'analisi viene eseguita entro 120 ore dalla raccolta dei campioni, questi dovranno essere conservati a 2-8 C; diversamente dovranno essere conservati congelati (-20 C o temperatura inferiore). Se i campioni sono stati congelati, agitarle i campioni scongelati con cura prima di eseguire il test. Evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento. Eliminare le bolle d'aria eventualmente presenti prima del dosaggio. Il volume minimo di campione necessario è 175 µl per il primo test e 25 µl in più per ciascun ulteriore test LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL. Nel plasma umano raccolto in provette con EDTA o litio eparina è stata riportata una variazione media del 22% rispetto al siero. 9. CALIBRAZIONE L'analisi dei calibratori specifici per il test consente di rilevare i valori delle unità di luce relativa (RLU) per la regolazione della curva master assegnata. Ogni soluzione di calibrazione consente di eseguire sei (6) calibrazioni. La ricalibrazione tripla è necessaria ogniqualvolta si verifica una delle seguenti condizioni: Quando viene caricato un nuovo lotto di reagenti (integrale di reagenti o reagenti starter). Ogni 7 giorni. Dopo ogni intervento di assistenza effettuato sull'analizzatore. Se i valori dei controlli di qualità risultano esterni ai limiti accettabili. 4 / 10 IT
7 Intervallo di misurazione. Il DiaSorin LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay effettua misurazioni comprese tra 4,0 150 ng/ml. Il valore più basso riportabile è 4,0 ng/ml e si basa su una precisione inter-saggio pari ad un CV del 20% (sensibilità funzionale). Valori inferiori a 4,0 ng/ml dovranno essere indicati come <4,0 ng/ml Il valore massimo riportabile senza diluizione è 150 ng/ml. 10. PROCEDIMENTO DEL TEST Per ottenere prestazioni analitiche ideali, è necessario attenersi scrupolosamente alle istruzioni operative dell'analizzatore LIAISON. LIAISON Analyzer: Tutti i parametri del test sono identificati attraverso i codici a barre riportati sull'integrale di reattivi. Nel caso in cui il lettore di codici a barre non possa essere letto dallo strumento, l'integrale non può essere usato. Non smaltire l'integrale di reattivi; per istruzioni sullo smaltimento, contattare il servizio locale di assistenza tecnica DiaSorin. LIAISON XL Analyzer: Tutti i parametri del test sono identificati dalle informazioni codificate nel Tag per identificazione a radiofrequenza (Radio Frequency IDentification transponder, RFID Tag) nell'integrale di reattivi. Nel caso in cui il RFID Tag non possa essere letto dallo strumento, l'integrale non può essere usato. Non smaltire l'integrale di reattivi; per istruzioni sullo smaltimento, contattare il servizio locale di assistenza tecnica DiaSorin. Le operazioni da eseguire con lo strumento sono le seguenti: Analizzatore LIAISON 1. Dispensare il campione, il calibratore o il controllo nel modulo di reazione. 2. Dispensare le particelle magnetiche e il coniugato nel modulo di reazione. 3. Incubare. 4. Distribuire il tracciante nel modulo di reazione. 5. Incubare. 6. Lavare con la soluzione di lavaggio/sistema. 7. Aggiungere i reagenti starter e misurare la luce emessa. LIAISON XL: 1. Dispensare le particelle magnetiche e il coniugato nel modulo di reazione. 2. Dispensare il campione, il calibratore o il controllo nel modulo di reazione. 3. Incubare. 4. Distribuire il tracciante nel modulo di reazione. 5. Incubare. 6. Lavare con la soluzione di lavaggio/sistema. 7. Aggiungere i reagenti starter e misurare la luce emessa I risultati degli immunodosaggi possono essere influenzati da fluttuazioni della temperatura. Gli utenti devono essere consapevoli delle variazioni dell'ambiente di laboratorio; potrebbe essere necessario un uso più frequente dei controlli e la successiva ricalibrazione. 11. CONTROLLO DI QUALITÀ Si raccomanda di effettuare un controllo qualità per ogni giorno di uso o in conformità alle regolamentazioni locali, statali e/o federali, ai requisiti di accreditamento e alle procedure di controllo qualità del proprio laboratorio. Si raccomanda all'utente di consultare la documentazione CLSI C24-A2 e 42 CFR per le direttive sulle pratiche idonee di controllo della qualità. Il LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Control Set (no. di catalogo ) è particolarmente idoneo per il controllo di qualità di questo saggio. I controlli LIAISON devono essere testati in singolo per monitorare la performance del saggio. Se i valori di controllo sono esterni all'intervallo atteso, il test non è valido e i risultati del paziente non possono essere riportati. Se un valore di controllo è esterno all'intervallo, eseguire una verifica e una ricalibrazione. I risultati del campione del paziente non sono validi e i campioni devono essere rianalizzati. Le prestazioni di altri controlli devono essere valutate per assicurarne la compatibilità con questo test prima dell'uso. È indispensabile stabilire intervalli di valori appropriati per tutti i materiali utilizzati per il controllo di qualità. Il range delle concentrazioni di ciascun controllo è stampato sul certificato di analisi ed indica i limiti stabiliti da DiaSorin per i valori dei controlli ottenuti con dosaggi affidabili. I laboratori devono stabilire i propri intervalli target sulla base dei criteri di accettabilità della performance dei test. 12. INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI L'analizzatore LIAISON calcola automaticamente le concentrazioni di vitamina D 25 (OH) nel campione Questa concentrazione è espressa in ng/ml. Per convertire i risultati in unità SI: ng/ml 2,5 = nmol/l. Intervallo test: da 4,0 a 150 ng/ml I calibratori e i controlli possono dare risultati RLU o di dosaggio diversi su LIAISON e LIAISON XL, tuttavia i risultati paziente sono equivalenti. 5 / 10 IT
8 13. LIMITI DEL DOSAGGIO Una tecnica esperta e una stretta osservanza delle istruzioni sono requisiti indispensabili per ottenere risultati affidabili. Contaminazione batterica o cicli ripetuti di congelamento e scongelamento dei campioni possono influenzare i risultati del test. Gli anticorpi eterofilici nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline del reagente o con altro materiale reagente, interferendo con gli immunodosaggi in vitro. I pazienti normalmente esposti al contatto con animali, prodotti di siero animale o altri prodotti immunogenici che possono causare la produzione di anticorpi eterofilici contro i reagenti del test possono essere esposti a questa interferenza e possono essere osservati valori anomali. I risultati devono essere usati insieme ad altri dati clinici e di laboratorio come ausilio per il medico nella decisione della gestione individuale in una popolazione di pazienti adulti. Non è possibile scambiare gli integrali fra i diversi analizzatori (LIAISON e LIAISON XL). Quando un integrale è stato introdotto in un particolare tipo di analizzatore, deve essere sempre usato su quell'analizzatore fino ad esaurimento. A causa di problemi di tracciabilità derivanti da quanto indicato sopra, il follow-up del paziente non può essere condotto con diversi tipi di analizzatore. Si deve usare un unico tipo di analizzatore (LIAISON o LIAISON XL). 14. VALORI PREVISTI Intervallo di riferimento È importante che ogni laboratorio determini il proprio intervallo di riferimento, rappresentativo della tipica popolazione locale. Esposizione agli UV [16,17], stagione 18, 19], razza [20] e apporto dietetico [21] sono tutti fattori noti per influire sulle concentrazioni di vitamina D 25 (OH) nell'uomo. Un elevata prevalenza di carenza subclinica di vitamina D 25 (OH) è stata osservata in molti paesi [3-8], in particolare nei mesi invernali. La letteratura recente suggerisce di classificare lo stato della vitamina D 25 (OH) secondo i seguenti intervalli: Stato della vitamina D Vitamina D 25 (OH) Carenza < 10 ng/ml < 25 nmol/l Insufficienza ng/ml nmol/l Sufficienza ng/ml nmol/l Tossicità >100 ng/ml >250 nmol/l DiaSorin ha valutato 396 campioni di siero raccolti da pazienti adulti. I campioni sono stati raccolti in diverse stagioni e in diverse zone geografiche degli USA. Campioni con valori PTH, calcio e TSH anomali sono stati esclusi dallo studio. Sulla base dell'intervallo di confidenza 95%, sono stati stabiliti i seguenti valori in base alla linea guida CLSI C28-A2. Sono stati ottenuti i valori seguenti: Intervalli di riferimento osservati Vitamina D 25 (OH) mediana Intervallo osservato dal 2,5-esimo al 97,5-esimo percentile Popolazione (396) USA 24,9 ng/ml 9,3 ng/ml 47,9 ng/ml 15. CARATTERISTICHE SPECIFICHE DELLE PERFORMANCE 15.1 Sensibilità funzionale: La sensibilità funzionale è definita come la concentrazione alla quale il valore %CV supera il 20% ed è stata testata in conformità a CLSI EP17-A. I campioni sono stati preparati a concentrazione nominale di 2-14 ng/ml e analizzati in diversi test per determinare concentrazione media e %CV. La concentrazione del campione è stata riportata in funzione del CV% ed è stata preparata una regressione allo scopo di stabilire la sensibilità funzionale. La sensibilità funzionale derivata ottenuta dall'equazione di regressione è 4,0 ng/ml. 6 / 10 IT
9 15.2 Comparazione dei metodi: Complessivamente 587 campioni, fra 3,6 e 153,2 ng/ml sono stati analizzati mediante LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL e DiaSorin 25 OH Vitamin D RIA, in conformità a CLSI EP9-A2. I dati derivanti dalle regressioni lineari sono riassunti nella tabella e nel grafico seguenti. Test N Inclinazione Intercetta Coefficiente di Std Err Deviazione Sd (95% IC) (95% IC) correlazione Est media differenza RIA 587 1,047 (1,02 1,07) 2,41 (1,43 3,40) 0,936 7,116 4,083 7,212 LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL (ng/ml) LIAISON 25 OH D vs. RIA Metodo di comparazione (n = 587) y = 1,0467x + 2,4088 R 2 = 0, RIA (ng/ml) 15.3 Precisione dell'analizzatore LIAISON : La precisione del test è stata valutata conformemente a CLSI EP5-A2. Sei campioni di siero contenenti diverse concentrazioni di analita e controlli del kit sono stati analizzati in doppio in due test per giorno per 20 giorni lavorativi in due lotti. I campioni sono stati analizzati internamente presso DiaSorin Inc e presso 2 sedi esterne. Sono stati ottenuti i valori seguenti: Intra-seduta fra lotti e sedi Totale fra lotti e sedi ID campione Media (ng/ml) DS %CV DS %CV Campione no. 1 7,9 0,6 7,7% 1,0 12,6% Campione no. 2 12,0 0,7 5,8% 1,3 11,1% Campione no. 3 18,0 0,9 5,0% 1,7 9,7% Campione no. 4 20,4 1,0 5,0% 2,1 10,4% Campione no. 5 24,3 1,2 5,0% 2,6 10,6% Campione no. 6 56,8 2,9 5,0% 5,8 10,3% Campione no. 7 61,8 3,0 4,9% 5,8 9,5% Campione no ,1 5,4 4,8% 12,2 10,8% In una sede sono stati ottenuti i risultati seguenti dagli stessi otto campioni e con un lotto del kit analizzato in doppio in due test al giorno per 20 giorni lavorativi. Intra-corsa all'interno di un lotto e una sede Totale all'interno di un lotto e una sede ID campione Media (ng/ml) DS %CV DS %CV Campione no. 1 7,9 0,6 7,7% 0,9 10,9% Campione no. 2 12,2 0,6 5,2% 1,1 9,3% Campione no. 3 17,6 0,8 4,8% 1,0 5,8% Campione no. 4 20,7 1,1 5,1% 1,9 9,1% Campione no. 5 24,0 1,0 4,1% 1,8 7,7% Campione no. 6 56,8 2,3 4,0% 3,6 6,3% Campione no. 7 60,8 2,2 3,7% 3,7 6,0% Campione no ,6 4,6 4,2% 7,8 7,2% 7 / 10 IT
10 15.4 Precisione dell'analizzatore LIAISON XL: La precisione dell'analizzatore LIAISON XL è stata valutata in conformità a CLSI EP5-A2. Sei campioni di siero contenenti diverse concentrazioni di analita e controlli del kit sono stati analizzati in doppio in due test per giorno per 20 giorni lavorativi in due lotti. I campioni sono stati analizzati su due analizzatori LIAISON XL. Sono stati ottenuti i valori seguenti: ID campione Media Intra-corsa Totale (ng/ml) DS %CV DS %CV Campione no. 1 7,85 0,3 3,8% 0,8 9,8% Campione no. 2 17,2 0,6 3,2% 1,5 8,9% Campione no. 3 19,6 0,4 2,3% 1,4 7,3% Campione no. 4 22,8 0,4 1,8% 2,0 8,9% Campione no. 5 51,9 1,0 2,0% 3,1 6,0% Campione no. 6 55,2 1,7 3,1% 3,6 6,4% Campione no ,3 2,1 1,9% 6,9 6,3% Campione no ,5 0,2 0,1% 11,0 9,1% 15.5 Esattezza L'esattezza del test è stata controllata mediante i test di diluizione e di recupero. Test di diluizione. La linearità è stata valutata in conformità a CLSI EP6-A. Due (2) pool di campioni sono stati diluiti con LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent (PN ) e analizzati. I risultati sono stati analizzati in termini di regressione lineare dai valori attesi rispetto ai valori osservati. L'equazione di regressione risultante è: Osservato = atteso 1,01x -0,180; R 2 = 0,995. L'intervallo dei campioni variava fra 3,8 e 151 ng/ml. 160 LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Linearità siero e SST Concentrazione di vitamina D osservata y = 1,0126x - 0, R = 0, Concentrazione di vitamina D prevista 8 / 10 IT
11 Test di recupero. Campioni ad alta concentrazione sono stati miscelati con campioni a bassa concentrazione in rapporto di 1:2, 1:1 e 2:1. I valori osservati sono stati comparati con i valori attesi per determinare la % di recupero. Il recupero medio è 93%. Concentrazione attesa (ng/ml) Concentrazione osservata (ng/ml) % Recupero Campione 1 Alto puro H:1 L 86,4 77,8 90% 1 H:1 L 68,8 58,4 85% 1 H:2 L 51,1 46,4 91% Basso puro - 16,9 - Campione 2 Alto puro H:1 L 81,0 77,4 96% 1 H:1 L 64,9 60,3 93% 1 H:2 L 48,9 48,7 100% Basso puro - 17,7 - Campione 3 Alto puro H:1 L 84,7 80,3 95% 1 H:1 L 65,9 59,9 91% 1 H:2 L 47,1 42,5 90% Basso puro - 10,6 - Campione 4 Alto puro - 59,6-2 H:1 L 44,7 42,8 96% 1 H:1 L 37,0 35,5 96% 1 H:2 L 29,3 27,4 94% Basso puro - 14,3 - Campione 5 Alto puro - 65,2-2 H:1 L 47,6 45,3 95% 1 H:1 L 38,5 36,6 95% 1 H:2 L 29,5 28,2 96% Basso puro - 11,9 - Recupero medio 93% (85%-100%) 15.6 Specificità La cross-reattività è stata analizzata come descritto in CLSI EP7-A2. I dati sulla reattività crociata dell'antisiero utilizzato in questo saggio sono stati ottenuti mediante aggiunta di concentrazioni fino a 100 ng/ml del potenziale reagente crociato prima del dosaggio. La reattività crociata di ciascun preparato, normalizzata alla 25-OH-Vitamina D 3, è riportata di seguito. L'anticorpo usato in questo test intende dimostrare la cross reattività a molti metaboliti diidrossilati della vitamina D. Steroide % Reattività crociata 25 OH Vitamina D 2 100,0% 25 OH Vitamina D 3 100,0% Vitamina D 2 1,9% Vitamina D 3 1,9% 1,25-(OH) 2 Vitamina D 2 6,7% 1,25-(OH) 2 Vitamina D 3 9,3% 3-epi-25 OH Vitamina D 3 1,3% 9 / 10 IT
12 15.7 Sostanze interferenti Le sostanze interferenti sono state analizzate come descritto in CLSI EP7-A2 usando il LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Assay. I risultati sono presentati di seguito. Campioni che sono Emolizzati Lipemici Itterici Itterici Campioni che contengono Colesterolo Acido urico Proteine totali Dimostrazione di alterazione < 10% nei risultati Fino a 200 mg/dl di emoglobina 589 mg/dl di trigliceridi 40 mg/dl di bilirubina coniugata 40 mg/dl di bilirubina non coniugata Dimostrazione di alterazione < 10% nei risultati Fino a 301 mg/dl 20 mg/dl 12 g/dl DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN U.S.A DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy 10 / 10 IT
13 DiaSorin Inc 1951 Northwestern Ave - Stillwater, MN USA Tel Fax Modifiche: 4 Soppressioni: LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set (REF ) 1. USO PREVISTO Il Diluente per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL può essere utilizzato per diluire campioni con valori maggiori di 150 ng/ml mediante l apposito kit LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL (310600). 2. SOMMARIO E SPIEGAZIONE DEL TEST Il Set di diluenti per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL può essere utilizzato per diluire campioni con valori di 25-OH-Vitamina D elevati entro l intervallo del dosaggio. Si consiglia di diluire 1 parte del campione del paziente con 3 parti di diluente. 3. MATERIALI FORNITI Nel Set di diluenti per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL sono forniti i seguenti materiali: 4 flaconi (da 5 ml ciascuno) contenenti tampone con proteine, surfattanti e lo 0,2% di ProClin 300. Materiali richiesti ma non forniti: Pipette calibrate da 75 μl e 225 μl. Provette in vetro (12 X 75 mm). 4. AVVERTENZE E PRECAUZIONI PER USO DIAGNOSTICO IN VITRO Non per uso interno o esterno nell'uomo o negli animali. Sicurezza generale: Tutti i campioni, tutti i reagenti biologici e tutti i materiali usati per effettuare il dosaggio devono essere considerati potenzialmente in grado di trasmettere agenti infettivi. Evitare il contatto con la pelle, gli occhi o le mucose. Durante l'esecuzione del test seguire le abituali pratiche di igiene industriale. Non mangiare, bere, fumare o applicare cosmetici nel laboratorio in cui si esegue il dosaggio. Non pipettare soluzioni con la bocca. Evitare il contatto con qualsiasi tipo di materiale potenzialmente infettivo indossando camici da laboratorio, protezioni per gli occhi/il viso e guanti monouso. Lavare accuratamente le mani al termine di ciascun dosaggio. Evitare schizzi o la formazione di aerosol quando si maneggiano, diluiscono o trasferiscono campioni o reagenti. Eventuali perdite di reagente dovranno essere decontaminate con una soluzione di candeggina al 10% (ipoclorito di sodio 0,5%) e smaltite come potenzialmente infettive. I materiali di rifiuto devono essere smaltiti secondo le disposizioni vigenti e le linee guida impartite dagli enti competenti nel territorio dove ha sede il laboratorio e secondo la regolamentazione vigente in ciascun paese. Non usare kit o componenti dopo la data di scadenza indicata sull'etichetta. Informazioni sui pericoli chimici e di sicurezza: I reagenti di questo kit sono classificati in base allo standard US OSHA Hazard Communication; alle leggi sul diritto di conoscenza dei singoli stati USA; alle regolamentazioni sul controllo dei prodotti del Canadian Centre for Occupational Health and Safety e alle direttive applicabili dell'unione Europea (vedere la scheda dati di sicurezza del materiale per ulteriori informazioni). GHS/CLP: ProClin CAS No.: Reagenti: [DIL SPE] Classificazione: Sensibilizzazione cutanea, categoria di pericolo 1 Avvertenza: Attenzion Pittogramma: Indicazione Di Pericolo: Consigli Di Prudenza: GHS07 Punto esclamativo H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea. P261 Evitare di respirare la nebbia/ gli aerosol. P272 Gli indumenti da lavoro contaminati non devono essere portati fuori dal luogo di lavoro. P280 Indossare guanti/ indumenti protettivi/ Proteggere gli occhi. LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set (REF ) 1 / 2 IT
14 5. PREPARAZIONE ED USO Il Set di diluenti per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D è fornito in forma liquida da conservare a 2-8 C. Mescolare accuratamente capovolgendo lentamente prima dell uso. Trasferire circa 75 µl di campione del paziente in una provetta in vetro o plastica ed aggiungere 225 µl di Diluente per campioni. Agitare lentamente nel Vortex. Scartare la porzione non utilizzata del campione rimasta nella provetta al termine dell analisi. Tutti i lotti di diluente per campioni sono interscambiabili con i lotti del kit LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL. 6. CONSERVAZIONE Al momento dell arrivo e prima dell uso il Set di diluenti per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL deve essere conservato a 2-8 C. Se correttamente conservato a 2-8 C, il Diluente per campioni rimane stabile fino alla data di scadenza impressa sui flaconi. La presenza di materiali in sospensione (particolato) nel liquido o una deviazione significativa rispetto ai risultati precedenti possono essere elementi indicativi del deterioramento del prodotto. 7. LIMITI Una tecnica esperta ed una rigida osservanza delle istruzioni sono requisiti indispensabili per ottenere risultati affidabili. Una conservazione inappropriata dei reattivi o errori tecnici possono causare una discordanza dei risultati. I risultati devono essere valutati insieme con altri riscontri clinici e di laboratorio come ausilio per il medico quando deve decidere il trattamento di ogni singolo paziente. Il Set di diluenti per campioni LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL è concepito per l uso con il saggio LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL (310600) e la famiglia di analizzatori a chemiluminescenza LIAISON. ProClin 300 è un marchio registrato di Rohm and Haas Co. DiaSorin Inc Northwestern Avenue P.O. Box 285 Stillwater, MN DiaSorin S.p.A., Saluggia (VC) Italy LIAISON 25 OH Vitamin D TOTAL Specimen Diluent Set (REF ) 2 / 2 IT
PCR QUANTITATIVA. FASE POST-ANALITICA: I dati ottenuti vengono validati tecnicamente poi clinicamente e quindi firmati digitalmente.
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