DICLOROMETANO (METILENE CLORURO) urinario in GC/MS spazio di testa Codice GC18010
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- Fabiana Carbone
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1 DICLOROMETANO (METILENE CLORURO) urinario in GC/MS spazio di testa Codice GC18010 BIOCHIMICA Il diclorometano (o cloruro di metilene) è un composto chimico appartenente alla categoria degli alogenuri alchilici. Essendo un solvente volatile è facilmente assorbito attraverso i polmoni; l assorbimento cutaneo è ritenuto non significativo. Circa il 40% del diclorometano viene metabolizzato; il resto viene eliminato tal quale con l aria espirata ed in piccola parte attraverso le urine. Le caratteristiche di volatilità e la sua abilità di sciogliere un gran numero di tipologie di composti organici fanno del diclorometano un solvente ideale per molti processi chimici: viene largamente utilizzato per la rimozione di vernice e grasso. Il diclorometano è stato classificato come possibile cancerogeno. Altri effetti tossici sono: depressione del SNC, irritazione degli occhi, della pelle e della cute. Il metodo proposto determina il diclorometano iniettando in GC-MS / spazio di testa un aliquota di campione urinario precedentemente trattata in opportuno solvente. EUREKA srl LAB DIVISION VAT N info@eurekaone.com Head Quarter: Via Enrico Fermi Chiaravalle (AN) ITALY Tel Fax Release N 001 Diclorometano urinario in GC/MS-spazio di testa Marzo
2 CARATTERISTICHE DEL KIT Principio del metodo : Il presente metodo consente di determinare il diclorometano urinario in GC/MS spazio di testa. Il diclorometano viene prima diluito e poi viene direttamente iniettato in GC. Recupero del Metodo : 100% Sensibilità del Metodo : < 2 µg/l in MS Range dinamico del Metodo: µg/l in MS Valori di Riferimento: Contenuto della Confezione : < 200 µg/l soggetti esposti < 0,2 µg/l soggetti non esposti Tutti i reagenti sono pronti all uso e stabili 3 anni a Temperatura 20 C. Reagente A Soluzione Diluente, 1 x 50 ml Reagente B Soluzione test / Standard Chimico, 1 x 5 ml Dotazione strumentale minima richiesta : Strumento GC/MS Computer gestionale Dotazione opzionale : Autocampionatore Modalità di prelievo : Alla fine del turno lavorativo, raccogliere 10 ml di urine in una provetta idonea. Stabile 7 giorni a 4 C. Stabile circa 4 settimane a 20 C. 2
3 PROCEDURA PREANALITICA Preparazione della Soluzione Test a 65 µg/l Dispensare in una vial da 10ml: 900 µl di Reagente A Soluzione Diluente 100 µl di Reagente B Soluzione Test Iniettare 1000µl della soluzione nel gascromatografo GC ed attendere la stampa del cromatogramma. Verificare che il tempo di ritenzione della soluzione sia simile a quello riportato in figura 1. Se l esito è positivo si può procedere alla seduta analitica. Se cosi non fosse verificare la funzionalità del sistema analitico. PROCEDURA ANALITICA FASE 1: Preparazione della soluzione Standard di Calibrazione a 130 µg/l Dispensare in una provetta: 800 µl di Urina 200 µl di Reagente B Standard Chimico IMPORTANTE: Tale soluzione Standard di Calibrazione va preparata di volta in volta Per verificare che l urina sia effettivamente esente da Diclorometano, preparare un Bianco: 900 µl di Urina 100 µl di H 2 O di grado HPLC Qualora il Bianco urina presentasse il picco del Diclorometano, procedere all individuazione quantitativa per differenza tra le aree/altezze dei picchi del Diclorometano presenti nell urina arricchita e nel bianco. I campioni vengono iniettati direttamente trasferendone 2 ml nelle vials per GC. Inserirle nel Campionatore Chiudere ermeticamente le vials Agitare al Vortex Preparare la lista di lavoro e avviare la serie secondo le specifiche del sistema Release N 001 Diclorometano urinario in GC/MS-spazio di testa Marzo
4 DICLOROMETANO - Avvertenze REAGENTE B : SOLUZIONE TEST DICLOROMETANO 650 µg/l SETTAGGIO DEL GAS-CROMATOGRAFO : Colonna VF-5ms 30 m x 0,25 mm, 0,25 µm (condizionata) Temperatura iniettore 200 C Rapporto di Splittaggio: OFF; 4 ON split 10 Iniezione a Split-Splitless con apertura dopo 0,10 min Temperatura 40 C x 10 minuti (corsa 10 minuti) Gas Elio 1 ml/min Temperatura siringa: 40 C Temperatura agitatore: 80 C (incubare x 2 minuti) SETTAGGIO DETECTOR DI MASSA (4000): Range di Massa Modo operativo in Impatto Elettronico (EI) Temperatura della Massa: 180 C Temperatura Manifold: 80 C Temperature Tansfer Line: 270 C Filamento on: 1 minuto CONDIZIONAMENTO DELLA COLONNA VF-5 MS Seguire le prescrizioni del costruttore. Non condizionare la (le) colonna/e se attaccata al Detector di Massa. PULIZIA DELLA COLONNA Disconnettere il detector. Tenerla alla massima temperatura per il tempo consigliato. ( Vedi istruzioni del costruttore ) PARAMETRI COMPUTER GESTIONALE SECONDO LE SPECIFICHE DEL SOFTWARE GESTIONALE 4
5 DICLOROMETANO (Cromatogrammi /spettri di riferimento GC-MS / Spazio di testa) M Counts 03 t 650ugl sms 45:150 45: % Spectrum 1A BP: min, Scan: 198, 45:150, Ion: 386 us, RIC: 1.252e+6, BC % % % % minutes m/z Fig. 1 : Test Fig. 2 : Spettro di Massa del Test R.T. 1.7 DICLOROMETANO 650 µg/l IONE MOLECOLARE : 49 5
6 DICLOROMETANO (Cromatogrammi /spettri di riferimento GC-MS / Spazio di testa) kcounts 01 t 130ugl sms 45:150 45: Area: Methylene Chloride min 100% Spectrum 1A B P : min, Scan: 173, 45:150, Ion: 1817 us, RIC: , BC % % % % minutes m/z Fig. 3 : Standard Chimico Fig. 4 : Spettro di Massa di Standard chimico R.T. 1.7 DICLOROMETANO 130 µg/l IONE MOLECOLARE : 49 6
7 DICLOROMETANO (Cromatogrammi /spettri di riferimento GC-MS / Spazio di testa) kcounts 04 t 16.2ugl sms 45:150 45: % Spectrum 1A B P : min, Scan: 173, 45:150, Ion: us, RIC: 18124, BC % % % Area: 7100 Methylene Chloride min % minutes m/z Fig. 5 : Campione urinario Fig. 6 : Spettro di Massa del Campione urinario R.T. 1.7 DICLOROMETANO 16 µg/l IONE MOLECOLARE : 49 7
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