IL LABORATORIO NELLA DIAGNOSTICA DELLE EPATOPATIE AUTOIMMUNI
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- Giacomo Fontana
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1 IL LABORATORIO NELLA DIAGNOSTICA DELLE EPATOPATIE AUTOIMMUNI Fare Dr. ssa clic MARIA per modificare FIORELLI lo stile del sottotitolo dello schema DIPARTIMENTO DI PATOLOGIA CLINICA ASL3 GENOVESE
2 {BC2DAF EF-B1DA-7E1D12D522E9} e iare ite indromi autoimmune sclerosante sieronegativa SP OCITARIO mune re LIARE C ISTO primitiva(pbc) + EAI verlap tipo 1 (EAI 1) va(csp) (EAI2 NEG) ) EPATOPATIE AUTOIMMUNI DANNO EPATICO
3 CRITERI DI VALUTAZIONE EPATITI OLOGICI (aumento VIRALI PRESENZA GPT ASSENZA A,B,C,GOT, DI AUTOANTICORPI Y-GLOBULINE ) DI MALATTIE ESAME GENETICHE ISTOLOGICO NELLE EAI ASSENZA DI DANNO TOSSICO DA FARMACO O A
4 Criteri internazionali nella diagnosi delle epatiti autoimmuni Parametri positivi Sesso femminile Punteggio +2 Aumento IgG >2 N N N +1 <1 N 0 ANA,ASMA o anti-lkm : >1: : :40 +1 <1:40 0 Parametri positivi Punteggio SLA, LC1,pANCA, ACTINA +2 markers virali negativi +3 Ratio ALP/ALT < HLA DR3 o DR4 +1 Altre patologie autoimmuni +2 Familiarità per malattie autoimmuni +1 istologia :epatite interfaccia +3 istol: infiltrato linfoplasmacell +1 istol : rosette +1
5 Parametri positivi Punteggio No uso farmaci epatotossici +1 Uso alcool <25 g/die +2 Risposta alla terapia +2 Parametri negativi Punteggio Markers virali positivi -3 Uso di farmaci epatotossici -2 Positività per AMA -4 Ratio ALP/ALT >3-2 Istologia : normale -5 Istologia:alterazioni dotti biliari -3 Istologia: altre alterazioni epatiche -3 Non risposta alla terapia -2 Uso alcool > 60 g/die -2
6 Interpretazione del punteggio DIAGNOSI PUNTEGGIO Prima della terapia: CERTA >15 PROBABILE Dopo la terapia: CERTA >17 PROBABILE 12 17
7 Criteri semplificati per la diagnosi di epatite autoimmune Parametro AUTOANTICORPI : ANA, SMA o LKM Punteggio Positivo > 1:40 +1 Positivo > 1:80 +2 AUMENTO IgG SIERICHE IgG > 16 g/i +1 IgG > 18 g/l +2 ISTOLOGIA del FEGATO Compatibile per EAI +1 Tipica per EAI +2 INFEZIONE VIRALE Assente +1 Presente +2
8 Interpretazione del punteggio Diagnosi Punteggio CERTA >= 7 PROBABILE > 6
9 Validità del punteggio semplificato Diagnosi probabile Sensibilità 88 % Specificità 97 % Diagnosi certa Sensibilità 81 % Specificità 99 %
10 Tecnica di indagine IMMUNOFLUORESCENZA INDIRETTA (IFI) Permette di rilevare tutti gli autoanticorpi epatici esclusi gli anti SLA e anti-asgpr Necessita di tecniche complementari (elisa,western blot,immunoblot ) per individuare meglio la specificità autoanticorpale
11 SUBSTRATI Sezioni criostatiche di rene, fegato, stomaco di animale(ratto,topo,scimmia) Cellule HEp-2 ( linea cellulare proveniente da cancro laringeo umano)
12 Autoanticorpi nelle epatiti autoimmuni (EAI) ANA ASMA Convenzionali EAI tipo 1 Anti-LKM1 EAI tipo 2 Non convenzionali Anti-LC1 EAI tipo 2 Anti-SLA EAI tipo 1 e 2 p-anca EAI tipo 1 Anti-LKM3 EAI tipo2 Anti-ASGPR EAI tipo 1 e 2
13 anticorpi anti- nucleo Presenti nel % EAI Tipo 1 Associati spesso ad ASMA Alta sensibilità Bassa specificità (connettiviti, malattie infettive, farmaci, cancro, soggetto normale) Antigeni bersaglio: nucleari eterogenei e mal definiti La ricerca della specificità anticorpale non aggiunge informazioni alla precisione diagnostica Il pattern più comune è l omogeneo usualmente a titolo elevato meno frequente il granulare(speckled) o altri
14 Quadri fluoroscopici ANTI-NUCLEO GRANULARE(SPECKLED) OMOGENEO
15 ANTICORPI ANTI-MUSCOLO LISCIO ASMA Presenti nell 80% EAI Tipo 1 Associati spesso ad ANA Antigeni bersaglio: F- actina (sensibilità 85%,Specificità 80%); nel 20% di EAI di tipo 1 gli ASMA sono diretti verso altri antigeni del citoscheletro (vimentina, desmina,..) Gli ASMA-F actina sono markers di severità clinica e istologica Titolo IFI >1:40 su triplice tessuto Identificare la specificità F-actina : IFI su cellule Hep-2 o
16 Quadri fluoroscopici asma RENE STOMACO FEGATO
17 AUTO- ANTICORPO anti-microsoma fegato e rene ANTI-lkm ANTIGENE BERSAGLIO MALATTIA ASSOCIATA ANTICORPO ASSOCIATO titolo IFI su triplice tessuto Anti-LKM1 Citocromo P 450 2D6 90 % EAI tipo 2 Anti-LC1 (24-32%) >1:40 Anti-LKM3 1UDPglucoronosiltransferasi 8% EAI tipo 2 >1:40 Anti-LM Citocromo P 450 1A2 Citocromo P 450 2A % EAI nella sindrome poliendocrina tipo1 >1:40
18 Quadro fluoroscopico anti-lkm1 FEGATO RENE
19 Presente in EAI tipo2 Anti- CITOSOL DEL FeGATO anti-lc1 Associato a anti-lkm % Isolato 10% Antigene bersaglio : formiminotransferasi ciclodeaminasi Spesso mascherato da anti-lkm1 Il titolo anticorpale correla con l attività di malattia Marker prognostico di rapida progressione verso la cirrosi
20 Quadro fluoroscopico anti-lc1
21 ANTICORPI ANTI- ANTIGENE SOLUBILE FEGATO Anti-SLA Presente in EAI tipo 1 ( adulti e bambini) Presente in EAI tipo 2 (bambini) Bassa sensibiltà (16%) Alta specificità (99%) Antigene bersaglio: [Sep(o-phosphoserine)tRNA-: (selenocysteine)trna syntethase] Marker prognostico di malattia severa e di recidiva dopo sospensione della terapia Metodo di rilevamento: ELISA,IB, RIA
22 ANTICITOPLASMA DEI NEUTROFILI ANCA Presenti nel 90% EAI tipo1 Pattern : p-anca (atipico) Antigeni bersaglio : componente della membrana nucleare Non specifici ( presenti anche CSP, IBD e altre malattie ) Nessuna correlazione con l attività di malattia
23 Quadro fluoroscopico p-anca
24 Anti recettore dell asialoglicoproteina ANTI-ASGPR Presenti nel 90% EAI 1 e EAI 2 Non specifici ( presenti anche in epatite virale cronica B e C, epatite acuta B,ep. alcolica, PBC ) Antigene bersaglio: glicoproteina transmembrana dell epatocita Marker di attività istologica e di efficacia terapeutica Metodo di rilevamento : ELISA, RIFA
25 Criteri diagnostici della cirrosi biliare primitiva (pbc) Aumento persistente (> 6 mesi) della ALP > 1.5 N AMA > 1:40 Quadro istologico : lesioni dei dotti interlobulari compatibili con PBC Diagnosi Probabile : due criteri Diagnosi Definita : tre criteri
26 AUTOANTICORPI NELLA CIRROSI BILIARE PRIMITIVA (PBC) AMA ANA PBC specifici Anti-CENTROMERO ASMA ASCA
27 Presenti nel 90-95% PBC Specificità alta (98%) AMA Antigeni bersaglio : M2 composto da 5 subunità diverse (E2 -PDC,E2 -BCOACD, E2-OGDA, E1a -PDC,E1b- PDC) nelle membrane interne del mitocondrio Titolo IFI > 1:40 su triplice tessuto Solo AMA-M2 significativi per la diagnosi di PBC Utile ricercare con metodo ELISA gli anti-mit3 ( ibrido ricombinante delle tre pricipali subunità) quando gli AMA sono negativi con metodo IF
28 Quadri fluoroscopici ama Rene Stomaco Fegato Cellule HEp2
29 Bersaglio antigenico : ANA PBC specifici anti-gp210, anti-p62 pattern fluoroscopico rim like (nuclear lamins,nuclear pore) anti-sp100 e anti-pml pattern fluoroscopico nuclear dots Bassa sensibilità,alta specificità Identificano un sottogruppo di pazienti AMAnegativi in IFI e ELISA Markers di ra rimpida progressione istologica (Sp- 100),e di severa colestasi (gp-210)
30 ANTI-CENTROMERO Presenti nel % PBC Marker di danno severo a carico dei dotti biliari ASMA Presenti fino 50 % PBC a basso titolo
31 QUADRI FLUOROSCOPICI ANA PBC Associati Rim Like/Nuclear Lamins Multiple Nuclear Dots Centromerico
32 CRITERI DIAGNOSTICI NELLA COLANGITE SCLEROSANTE PRIMITIVA Criteri biochimici: ALP e GGT 2N, con o senza iperbilirubinemia Criteri radiodiologici : tecniche di immagine CPRE e CPRM Criteri istologici Autoanticorpi : p-anca (84%) CSP utili nella dd con PBC
33 CRITERI DIAGNOSTICI SidromE overlap PBC-EAI Devono essere soddisfatti : due criteri diagnostici per EAI tra : ALP> 2N AMA >1:40 GGT >5N Colangite distruttiva linfocitaria e due criteri diagnostici per EAI tra : transamiasi >5N
34 Sindrome overlap csp-eai Rara ( 2-5 % CSP) Più frequente nel bambino e giovane adulto spesso maschi Profilo sierologico simile a quello dell EAI Per la diagnosi si fa riferimento ai criteri per EAI
35 EPATOPATIA DA CAUSA SCONOSCIUTA ANA,ASMA,LKM1,AMA ANA+ P-ANCA+ SMA+ EAI LKM-1+ F- actina+ AMA + PBC AUTOANTICORPI CONVENZIONALI NEGATIVI F-actina,SLA,LC1,p- ANCA, LKM3,MIT3,sp- 100,gp210 LC1+ MIT3+/ + SLA+ NEG LKM3+ sp100+/gp210+ EAI CSP EAI PBC EPATITE CRONICA CRIPTOGENETICA
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