Therapeutic targeting of eosinophil adhesion and accumulation in allergic conjuctivitis
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- Albana Rizzo
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1 Therapeutic targeting of eosinophil adhesion and accumulation in allergic conjuctivitis
2 AllergyInflammation-Medications Steroids Topical Systemic NSAIDs Topical systemic Antihistamines Topical Systemic Mast-Cell stabilizers Decongestants Cyclosporine
3 AllergicConjunctivitis Antigen in tears Conjunctival epithelium B lymphocyte IL-3, IL-4, IL6, IL-8, IL-13, TNF-α Major Histocompatibility Complex II IL-4 IL-13 IL-5 IL-6 IgE antibodies T lymphocyte Plasma cell Antigen-presenting cell Sensitised mast cell
4 Antigen in tears EarlyPhase α 4 β 1 INTEGRIN Chemokines (eotaxins) Adhesion molecules Conjunctival epithelium Histamine Heparin Chymase Blood Vessel Synthesis Cytokines Tryptase Leukotrienes Prostaglandins Chemokines Itching Vasodilatation Edema Nerve Stimulation Lacrimation Platelet Activating Factor TNF-α TGF-β
5 Late Phase Lymphocyte Recruitment and activation Chemokines Eosinophil Activated mast cell Leukotrienes TNF-α Basophil Blood Vessel PAF IL-5 IL-6 Leucocyte migration and activation Neutrophil
6 EosinophilRecruitment Eosinophil Mast cell ECF-A ICAM1/VCAM1 Expression Integrins Eosinophil Blood Vessel
7 In figura sono schematizzati i 4 step a cui i leucociti vanno incontro durante il processo di accumulo nel vaso sanguigno; in basso,le molecole espresse dai leucociti con i rispettivi contro-recettori endoteliali.
8 Adhesion Molecules with a Critical Role in Inflammation Selectins E-selectin (on endothelium) P-selectin (on endothelium & platelets; is preformed and stored in Weible Palade bodies) L-selectin (leukocytes) Ligands for E-and P-Selectins are sialylated glycoproteins (e.g Sialylated Lewis X) Ligands for L-Selectin are Glycan-bearing molecules such as GlyCam-1, CD34, MadCam-1 Mucin-like glycoproteins Heparan sulfate (endothelium) Ligands for CD44 on leukocytes Bind chemokines Integrins (α + β chain) Heterodimeric molecules VLA-4 (β1 integrin) binds to VCAM-1 LFA1 and MAC1 (CD11/CD18) = β2 integrin bind to ICAM Expressed on leukocytes Immunoglobulin family ICAM-1 (intercellular adhesion molecule 1) VCAM-1 (vascular adhesion molecule 1) Are expressed on activated endothelium Ligands are integrins on leukocytes
9 LE INTEGRINE Recettori coinvolti nei processi di: Embriogenesi Morfogenesi tissutale Differenziamento cellulare Crescita cellulare Proliferazione cellulare Coagulazione
10 Integrinsexpressedin eosinophils
11 Integrin bidirectional signalling
12 L integrinavla-4 (α 4 β 1 ): target terapeutico
13 L integrinavla-4 (α 4 β 1 ): target terapeutico
14 DS-70 DS 70 - UN NUOVO ANTAGONISTA DUALE DELLE INTEGRINE α4β1 e α4β7 Inibisce in vitro l adesione dei mastociti e degli eosinofili a VCAM-1
15 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Clinical score Effetto del composto DS70 sui sintomi congiuntivali indotti dall ovalbumina (OVA) nelle cavie. Ogni gruppo sperimentale comprendeva cinque animali. I dati presentati sono la media ± SEM (sono stati valutati entrambi gli occhi). 0, assenza di sintomi; 1, lieve arrossamento congiuntivale con o senza lacrimazione; 2, moderato arrossamento congiuntivale con lacrimazione e lieve chemosi; 3, moderato arrossamento congiuntivale con lacrimazione e chemosi moderata; 4, severo arrossamento congiuntivale con lacrimazione e parziale eversione della palpebra; 5, severo arrossamento congiuntivale con lacrimazione e palpebre chiuse più della metà. Clinical score (Arbitrary units) * * * * NI OVA DS70 0,1% **p<0,01 vs OVA Time (h) OVA: ovalbumina NI: non immunizzato
16 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Degranulazione dei mastociti a livello della congiuntiva 2 h post OVA Non immunizzato Ovalbumina DS70 + ovalbumina Giemsa staining
17 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Infiltrazione degli eosinofili a livello della congiuntiva Colorazione di Luna Non immunizzato Ovalbumina DS70 + ovalbumina
18 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Analisi della perossidasi nel tessuto congiuntivale e nelle lacrime EPO U/mg tissue OVA **p<0,001 vs OVA ** DS70 EPO activity in OLF ( OD 450nm (±Br - ) OVA ** DS70 0,1% **p<0,001 vs OVA 0h 1h 2h 4h 6h 24h Effetto del composto DS70, entrambi alla concentrazione di 0,1%, sui livelli di perossidasidegli eosinofili (EPO), valutati nelle congiuntivedi animali in cui, precedentemente, era stata indotta congiuntivite allergica mediante immunizzazione con ovalbumina (OVA). Attività della perossidasi degli eosinofili (EPO) valutata nelle lacrime prelevate da animali con congiuntivite allergica indotta da ovalbumina (OVA), **p< 0,001 vs OVA.
19 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Analisi chemochine e citochine pro-infiammatorie 610 IL8 650 IL1β **p<0,001 vs OVA Valutazione dell espressione di chemochine e citochine pro-infiammatorie in campioni di congiuntiva IL8 mrna levels (2 - Ct ) OVA ** DS70 IL1β mrna levels (2 - Ct ) OVA ** DS70 provenienti da animali trattati e DS70, alla concentrazione 0,1% CCL5 mrna levels (2 - Ct ) OVA CCL5 ** DS70 CCL11 mrna levels (2 - Ct ) OVA CCL11 ** DS70
20 MODELLO DI CONGIUNTIVITE ALLERGICA INDOTTO IN CAVIE Immunoistochimica Integrinaα 4 β 1 Non immunizzato Ovalbumina DS70 + ovalbumina
21 LA REAZIONE INFIAMMATORIA Endotelio α L β 2 Eosinofilo α 4 β 1 PSGL-1 α L β Linfocita 2 P-, E-selectine PSGL-1 α 4 β 1 ICAM-1 VCAM-1 Tethering/Rolling Eosinofilo α L β 2 α 4 β 1 PSGL-1 Firm adhesion Linfocita α PSGL-1 L β 2 α 4 β 1 Diapedesi Istamina Prostaglandine Leucotrieni IL-1, IL-6, TNF-α α L β 2 α L β 2 α 4 β 1 PSGL-1 PSGL-1 Mastocita attivato DS70 α 4 β 1 Tessuto
22 LA REAZIONE INFIAMMATORIA Endotelio α L β 2 Eosinofilo α 4 β 1 PSGL-1 α L β Linfocita 2 P-, E-selectine PSGL-1 α 4 β 1 ICAM-1 VCAM-1 Tethering/Rolling Eosinofilo α L β 2 α 4 β 1 PSGL-1 Firm adhesion Linfocita α PSGL-1 L β 2 α 4 β 1 Diapedesi Istamina Prostaglandine Leucotrieni IL-1, IL-6, TNF-α α L β 2 α L β 2 α 4 β 1 PSGL-1 PSGL-1 Mastocita attivato DS70 α 4 β 1 Tessuto
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