Procedure per analisi indicatori

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1 Procedure per analisi indicatori

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3 Conta enterobacteriaceae Conta coliformi totali Conta coliformi fecali e E. coli ricerca Shigella- Salmonella

4 Enterobatteriacee Cristal violetto e sali biliari + indicatore ph + glucosio (ISO: VRBGA) Coliformi E. coli Cristal violetto e sali biliari + indicatore ph + lattosio (ISO: VRBLA o MacConkey) Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie (o inclusione in agar) Incubazione 37 C per 24h Conta colonie rosa con alone chiaro

5 Sali biliari + rosso fenolo + lattosio

6 Lettura di coliformi con differenziazione di E. coli: Lattosio e substrato per glucuronidasi

7 MPN presuntivo coliformi omogenato 10 ml mezzo a doppia concentrazione + 10 ml campione 10 ml mezzo a concentrazione regolare + 1 ml campione 10 ml mezzo a concentrazione regolare ml campione

8 MPN presuntivo coliformi Fermentazione lattosio Viraggio rosso fenolo Produzione gas Tubo positivo

9 MPN presuntivo coliformi

10 microrganismi aerobi mesofili Mezzo non selettivo (ISO: PCA) Semina per spatolamento in superficie Funghi totali/funghi e lieviti Mezzo non selettivo (ISO: OGYE) Semina per spatolamento in superficie Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie Incubazione 28/25 C per 24h Conta colonie totali

11 Alimenti suscettibili alla contaminazione da Staphylococcus aureus Carne Prodotti derivati dalla carne Insalate miste Prodotti di pasticceria Prodotti lattiero-caseari Vie di disseminazione di Staphylococcus aureus Contatto diretto o indiretto con alimenti infetti Uso di strumenti per il taglio o di utensili infetti Refrigerazione inadeguata Cottura o riscaldamento inadeguato dell alimento

12 Stafilococchi coagulasi positivi Mezzo con lecitina e tellurito di potassio (ISO: BPA) Incubazione 37 C per 24h Conta colonie nere con alone opaco Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie

13 Bacillus subtilis - coagulans - licheniformis: alteranti termotrattati in scatola polymixa - termophilus: alteranti conserve sotto vuoto thuringiensis: patogeno artropodi cereus - anthracis patogeni uomo ufc/g

14 Bacillus cereus (gruppo) Mezzo con mannitolo, indicatore di ph, polimixina e lecitina (ISO: MYP) Incubazione 30 C per 24h Conta colonie rosa (rosso fenolo) o azzurre (blu bromotimolo) con aspetto ceroso, contorno irregolare Omogenato: 25g prodotto + 225ml diluente Diluizioni Semina per spatolamento in superficie

15 Salmonella spp. Preparazione dei campioni Inoculo in acqua peptonata per rivitalizzazione 24 ore a 37 C Inoculo in mezzo Rappaport-Vassiliadis 24 ore a 42 C Inoculo in piastra su terreno selettivo (brilliant green-rosso fenolo o salmonella-shigella agar) o cromogenico 24 ore a 37 C Colonie sospette strisciate su agar nutriente per conferme 24 ore a 37 C Test di conferma su colonie sospette: TSI, idrolisi urea(-), decarbossilaz. Lisina, ß-galattosidasi(+), MR(+)VP(-), indolo(-), gelatina(-), fer. Gluc(AG), cat(+) Test sierologici

16 Ceppi patogeni di Escherichia coli enterotossigeni (ETEC), enteroinvasivi (EIEC), enteroemorragici (EHEC), enteropatogeni (EPEC), enteroaggregativi (EAggEC). categorie alimentari per le quali rappresentano un pericolo per la salute pubblica: carne di manzo cruda o poco cotta o carne di altri ruminanti carne macinata carne di manzo fermentata e prodotti derivati latte crudo e prodotti a base di latte crudo prodotti freschi, in particolare semi germogliati succhi di frutta e di ortaggi non pastorizzati

17 Escherichia coli enteropatogeno O157:H7 Preparazione dei campioni Inoculo in mezzo di arricchimento selettivo (modified Tryptone Soya Broth + novobiocina o acriflavina) 24 ore a 37 C Inoculo in mezzo selettivo: MacConkey s agar contenente sorbitolo 0.1% invece di lattosio 24 ore a 37 C Test di conferma: indolo(+), MR(+)VP(-), ferm. Gluc(AG) e lattosio(ag), ureasi(-), citrato(-), TSI, cat(+)

18 colonie sorbitolo -: sospette O157:H7 falsi positivi: ceppi di E. coli e altri generi non fermentanti colonie sorbitolo + (colorazione rosso porpora) falsi negativi: eventuali ceppi di O157:H7 sorbitolo fermentanti

19 Listeria: anaerobi facoltativi psicrofili, resistenti congelamento inibiti ph 5 tollerano a w 0.8 latte - carne - vegetali - acqua - foraggi forma biofilm Bassa dose minima infettante (10-??cell/g) produce emolisine listeriosi invasiva: attacca sistema nervoso centrale e placenta - individui a rischio - dose infettiva bassa - incubazione 2-3w listeriosi gastroenterica: attacca tratto gastrointestinale - popolazione non predisposta - incubazione 12-24h

20 Listeria monocytogenes Preparazione dei campioni Inoculo in mezzo unico di arricchimento selettivo 4 ore a 30 C + 24 ore a 37 C Inoculo in piastra su terreno selettivo o cromogenico ore a C Colonie sospette strisciate su terreno triptone-soia-estr.lievito o cromogenico ore a 30 C Test di conferma su colonie sospette: ß-emolisi - CAMP test, ferm. Mannitolo(-), xilosio(-), ramnosio(+), cat(+).

21 Cronobacter (Enterobacter sakazakii) spp. Preparazione dei campioni Inoculo in acqua peptonata per rivitalizzazione 18 ore a 37 C Inoculo in mezzo di arricchimento selettivo (modified lauryl sulfate tryptose (mlst) broth base) 24 ore a 44 C Striscio in mezzo cromogenico (Enterobacter Sakazakii Isolation Agar - ESIA) 24 ore a 44 C Test di conferma: ferm. X-metil glucoside, prod. pigmento giallo

22 Clostridium perfringens Intossicazioni alimentari Ingestione di cibi in cui sia presente la tossina (p.i. 8 a 24 ore, mediamente 12 ore) Sintomatologia: diarrea e vomito Alcuni stipiti di perfrigens sono in grado di elaborare una tossina enterotossica che si produce solo in condizioni in cui sia possibile la sporificazione. Questa tossina è infatti associata alla tunica sporale con caratteristica di super antigene. 20

23 Clostridium perfringens Preparazione dei campioni Se carica particolarmente bassa fare conta in tubi MPN Inoculo su mezzo selettivo (solfito.ferrocitrato-cicloserina o solfito-kanamicina) 24 ore a 37 C Colonie sospette (nere) strisciate su agar nitrato e agar sangue 24 ore a 37 C nitrato in anaerobiosi, sangue in aerobiosi Conferma se riducono e sono mobili in nitrato e non crescono su sangue in aerobiosi. Colorazione di Gram per conferma bastoncelli G+