ZytoLight. Probe. For the detection of translocations involving the NTRK1 gene at 1q23.1 by fluorescence in situ hybridization (FISH)

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1 ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe Z (0.2 ml) For the detection of translocations involving the NTRK1 gene at 1q23.1 by fluorescence in situ hybridization (FISH).... In vitro diagnostic medical device according to EU directive 98/79/EC

2 Fluorescence-labeled labeled polynucleotide probe for the detection of translocations involving the NTRK1 gene at 1q23.1 q23.1, ready to use Product Description Content: Product: ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe EmiNOPF in hybridization buffer. The probe contains green-labeled polynucleotides (ZyGreen: excitation at 503 nm and emission at 528 nm, similar to FITC), which target sequences mapping in 1q22-q23.1 proximal to the NTRK1 gene, and orange-labeled polynucleotides (ZyOrange: excitation at 547 nm and emission at 572 nm, similar to rhodamine), which target sequences mapping in 1q23.1 distal to the NTRK1 gene. Z : 0.2 ml (20 reactions of 10 µl each) Specifici city: The ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe EmiNOPF is designed to be used for the detection of translocations involving the NTRK1 gene at 1q23.1 in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue or cells by fluorescence in situ hybridization (FISH). Storage/Stability: The ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe EmiNOPF must be stored at 2 8 C protected from light and is stable through the expiry date printed on the label. Use: Safety Precautions: This product is designed for in vitro diagnostic use (according to EU directive 98/79/EC). Interpretation of results must be made within the context of the patient s clinical history with respect to further clinical and pathologic data of the patient by a qualified pathologist! Read the operating instructions prior to use! - 1 -

3 Do not use the reagents after the expiry date has been reached! This product contains substances (in low concentrations and volumes) that are harmful to health. Avoid any direct contact with the reagents. Take appropriate protective measures (use disposable gloves, protective glasses, and lab garments)! If reagents come into contact with skin, rinse skin immediately with copious quantities of water! A material safety data sheet is available on request for the professional user! Principle of the Method The presence of certain nucleic acid sequences in cells or tissue can be detected by in situ hybridization using labeled DNA probes. The hybridization results in duplex formation of sequences present in the test object with the labeled DNA probe. Duplex formation (with sequences of the chromosomal region 1q22- q23.1 in the test material) is directly detected by using the tags of fluorescence-labeled polynucleotides

4 Instructions Pretreatment (dewaxing, proteolysis, post-fixation) should be carried out according to the needs of the user. Denaturation and hybridization of probe: NK Pipette 10 µl ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe EmiNOPF each onto individual samples A gentle warming of the probe, as well as using a pipette tip which has been cut off to increase the size of the opening, can make the pipetting process easier. Avoid long exposure of the probe to light. OK Avoiding trapped bubbles, cover the samples with a coverslip (22 mm x 22 mm). Seal the coverslip, e.g. with a layer of hot glue from an adhesive pistol or with rubber cement PK= Denature the slides at 75 C (±2 C) for 10 min, e.g. on a hot plate Depending upon the age of the sample and variations in the fixation stage, it may be necessary to optimize the denaturing temperature (73 C- 77 C). QK= Transfer the slide to a humidity chamber and hybridize overnight at 37 C (e.g. in a hybridization oven) It is essential that the tissue/cell samples do not dry out during the hybridization step. Further processing, such as washing and counter-staining, can be completed according to the user s needs. For a particularly user-friendly performance, we recommend the use of a ZytoLight FISH system by ZytoVision. These systems were also used for the confirmation of appropriateness of the ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe EmiNOPF

5 Results With the use of appropriate filter sets, the hybridization signals of the labeled chromosomal region 1q22-q23.1 appear green and orange. In interphases of normal cells or cells without a translocation involving the 1q23.1 band, two green/orange fusion signals appear. One 1q23.1 locus affected by a translocation is indicated by one separate green signal and one separate orange signal. In order to judge the specificity of the signals, every hybridization should be accompanied by controls. We recommend using at least one control sample in which the 1q23.1 status is known. Care should be taken not to evaluate overlapping cells, in order to avoid false results, e.g. an amplification of genes. Due to decondensed chromatin, single FISH signals can appear as small signal clusters. Thus, two or three signals of the same size, separated by a distance equal to or less than the diameter of one signal, should be counted as one signal. Our experts are available to answer your questions

6 Literature Alberti L, et al. (2003) J Cell Physiol 195: Bongarzone I, et al. (1998) Clin Cancer Res 4: Doebele RC, et al. (2013) J Clin Oncol 31 Suppl: Abstr Greco A, et al. (2010) Mol Cell Endocrinol 321: Kievits T, et al. (1990) Cytogenet Cell Genet 53: Musholt TJ (2000) Surgery 128: Russell JP, et al. (2000) Oncogene 19: Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN As of: November 13, 2013 (5.1) Trademarks: ZytoVision and ZytoLight are trademarks of ZytoVision GmbH

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8 Traduzione della scheda tecnica originale a cura di Bio-Optica S.p.A. distributore ufficiale italiano. ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe IVD Dispositivo medico-diagnostico in vitro Produttore: ZytoVision GmbH Codice: Z (0,2ml) Per l identificazione delle traslocazioni del gene umano NTRK1 nella regione 1q23.1 mediante Ibridazione in Situ fluorescente (FISH)..... Dispositivo medico-diagnostico in vitro Secondo la direttiva europea 98/79/EC

9 Sonda polinucleotidica marcata con fluoroforo per la rilevazione della traslocazione del gene umano NTRK1 nella regione 1q23.1 mediante FISH, pronta all'uso. Descrizione del Prodotto Contenuto: ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart Probe in tampone di ibridazione. La sonda contiene polinucleotidi marcati con fluoroforo ZyGreen (eccitazione 503 nm ed emissione 528 nm, simile al FITC), che identificano sequenze prossimali al gene NTRK1 regione 1q23.1 e polinucleotidi marcati fluoroforo ZyOrange ZyGreen (eccitazione 547 nm ed emissione 572 nm, simile alla Rodamina), che identificano sequenza distali al gene NTRK1 regione 1q23.1 Prodotto: Z : 0,4 ml (40 reazioni da 10μl ciascuna) Specificità: La Sonda ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart è adibita all identificazione di traslocazioni del gene NTRK1 regione 1q23.1 in tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina o cellule mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH). Conservazione: La Sonda ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart deve essere conservata a 2 8 C protetta dalla luce. La sonda è stabile durante il periodo indicato dalla data di scadenza. Utilizzo: Il prodotto è designato per la diagnosi in vitro (in accordo con la dintrk1tiva EU 98/79/EC). L interpntrk1azione dei risultati deve essere fatta in un contesto clinico e patologico del paziente da un patologo esperto. Precauzioni per l uso: Leggere le istruzioni prima dell utilizzo del prodotto. Non usare il prodotto dopo la data di scadenza. Il prodotto contiene sostanze (a basse concentrazioni) dannose per la salute, evitare il contatto diretto con il prodotto. Usare dispositivi di sicurezza (guanti, occhiali di protezione, camice). Se il prodotto viene a contatto con la pelle, lavare abbondantemente con acqua. Su richiesta dell utilizzatore è disponibile una scheda di sicurezza. Principio del Metodo La presenza di determinate sequenze di acido nucleico nelle cellule o nei tessuti può essere rilevata attraverso ibridazione in situ con l'utilizzo di sonde a DNA marcate. L'ibridazione induce la formazione di una struttura a doppio filamento (ibrido duplex) tra le sequenze presenti nel campione in analisi e la sonda.

10 La formazione del duplex (con le sequenze della regione cromosomica 1q22-q23.1) è evidenziata direttamente usando i polinucleotidi marcati con fluorofori. Istruzioni Il prerattamento (deparaffinazione, proteolisi, post-fissazione) deve essere effettuato indipendentemente dalle esigenze dell'utilizzatore. Denaturazione e ibridazione della sonda: 1. Vortexare la sonda ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart e dispensare 10μl per ogni campione. Distribuire a piccole gocce sull'intera superficie evitando di concentrare in un unico punto. Alternativamente, aggiungere la sonda al centro di un coprioggetto e applicare il coprioggetto sull'area in esame. Un leggero riscaldamento della sonda e l'utilizzo di un puntale tagliato in punta semplificano l'operazione. Evitare l esposizione prolungata alla luce. 2. Evitare la formazione di bolle, coprire il campione con un vetrino coprioggetto (22 mm x 22 mm). Sigillare il vetrino copri oggetto con colla a caldo o mastice. 3. Denaturare a 75 C (±2 C) per 10 minuti utilizzando una piastra calda. A seconda dell'età del campione e variazioni nella fase di fissazione, può essere necessario ottimizzare la temperatura di denaturazione (73 C-77 C). 4. Trasferire i vetrini in una camera umida e ibridare overnight a 37 C in una stufa ventilata. E importante che il campione (cellule o tessuto) non si asciughino durante l ibridazione Eventuali ulteriori processi, quali lavaggio e contro-colorazione, possono essere completati secondo le esigenze dell'utente. Per ottenere prestazioni ottimali, si consiglia l'uso di un sistema di FISH ZytoLight (ZytoVision). Questo sistema viene anche utilizzato per confermare l adeguatezza della ZytoLight SPEC NTRK1 Dual Color Break Apart. Risultati: Con un appropriato set di filtri, i segnali di ibridazione nella regione cromosomica 1q22- q23.1 appare verde e arancione. In una interfase di cellule normali o in cellule senza traslocazioni della regione 1q23.1, sono visibili due segnali verde/rosso fusi. La traslocazione a carico della regione 1q23.1 è indicata dalla separazione dei due segnali rosso e verde. Al fine di valutare la specificità dei segnali, ogni ibridazione deve essere verificata mediante controlli (positivo e negativo). Si consiglia di utilizzare almeno un campione di controllo in cui in cui sia inequivocabilmente noto lo stato mutazionale della regione 1q23.1. Si deve prestare attenzione a non valutare cellule sovrapposte, in modo da evitare falsi risultati, es un'amplificazione di geni. A causa decondensazione cromatina, singoli segnali FISH possono apparire come piccoli cluster di segnale. Così, due o tre segnali della stessa dimensione, separati da una distanza uguale o inferiore al diametro di un segnale, dovrebbero essere considerati come un segnale. I nostri esperti sono disponibili per rispondere alle vostre domande

11 Bibliografia: Alberti L, et al. (2003) J Cell Physiol 195: Bongarzone I, et al. (1998) Clin Cancer Res 4: Doebele RC, et al. (2013) J Clin Oncol 31 Suppl: Abstr Greco A, et al. (2010) Mol Cell Endocrinol 321: Kievits T, et al. (1990) Cytogenet Cell Genet 53: Musholt TJ (2000) Surgery 128: Russell JP, et al. (2000) Oncogene 19: Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN Marchi: ZytoVision e ZytoDot sono marchi di ZytoVision GmbH.

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