VEQ AUTOIMMUNITA. E un ottima occasione per : Favorire la crescita culturale e le competenze professionali

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Isabella Blasi
6 anni fa
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1 VEQ AUTOIMMUNITA E un ottima occasione per : Migliorare le procedure Favorire la crescita culturale e le competenze professionali Uniformare la refertazione sul territorio regionale Collaborare con le aziende per migliorare le performance analitiche

2 PROBLEMA Come definire il target del campione?? Specifiche delle caratteristiche del siero (donatore unico, storia clinica e diagnosi ben definita ) Media di consenso della maggioranza dei laboratori Consenso di un numero limitato di laboratori di riferimento PROPOSTA Media di consenso dei laboratori

3 N LAB TITOLO POSITIVO ESITO 5 NON DICHIARATO 2 NEG 3 POS 2 1:40 POS 23 1:80 6 NEG 1 DUBBIO 16 POS 31 1:160 4 NEG 2 DUBBIO 25 POS

4 ESITO VALUTAZIONE N RISPOSTE % (SU 61 LAB CHE USANO IFI) POSITIVO 46 75% DUBBIO 3 5% NEGATIVO 12 20% NEI NEGATIVI, 3 LAB HANNO INDICATO IL TITOLO 160 (LORO SOGLIA DI POSITIVITA') MA NELLA VALUTAZIONE HANNO POI INDICATO NEGATIVO

5 Anticorpi Anti Antigeni Intracellulari Nucleo-citoplasmatici (ANA) Grande eterogeneità nei comportamenti dei laboratori aderenti, con difficoltà nella valutazione delle risposte Problema noto e già evidenziato da altri esercizi VEQ (es NEQAS) Fattori da tenere in considerazione: -Diversità nell espressione dello stesso pattern (es punteggiato-speckled) -Differenti diluizioni di partenza (1:40 1:80-1:160) -Diversa reattività dei substrati (pattern diversi con HEP2 diverse) -Diversa composizione e concentrazione dei coniugati (IgG vs multivalente) -Differenti livelli di competenza -Differente disponibilità di test di II livello per chiarire pattern inusuali

6 PATTERN (46 ifi pos) TITOLO CENTROMERICO 32 (70%) NUCLEOLARE 5 (11%) OMOGENEO 4 (8%) PUNTEGGIATO 5 (11%) centromerico nucleolare omogeneo punteggiato

7 ANA Screening con metodo IFI-HEP2 Doppio pattern: Indicato da 16 laboratori Si propone di indicare tutto quello che si vede, come nel referto, con il rispettivo titolo. Anche il campo note può essere utile per farsi capire. Pattern singoli non corretti 6 Pattern punteggiato 3 Nucleolare 1 Omogeneo 1 Citoplasmatico Scarsa esperienza dell operatore nel riconoscimento del pattern centromerico?? Anomala reattività del substrato? Segnalato solo uno dei due pattern?? (nucleolare e omogeneo i più frequenti)

9 ANA Screening con metodi diversi da IFI-HEP2 6/12 esito negativo 1/12 esito dubbio 5/12 esito positivo Spiegazione : il campione era positivo per CENP A, che generalmente non è presente nella miscela utilizzata per lo screening (di solito è presente CENP B) Riflessione: Sebbene sia poco frequente, il significato clinico di CENP A è analogo a quello di CENP B RISCHIO DI RITARDATA O OMESSA DIAGNOSI

10 PROPOSTA La maggior parte dei laboratori aderenti alla VEQ utilizza 1:80 come diluizione di partenza per ANA; 6 laboratori partono da una diluizione 1:40 (5 non hanno dato indicazioni) Sarebbe senza dubbio opportuno che ogni laboratorio referti la VEQ ANA partendo dal titolo utilizzato abitualmente nella routine, ma per uniformità si propone di fissare la diluizione 1/80. I laboratori che utilizzano la diluizione 1:40 sono invitati a rivedere le loro procedure, come da linee guida OBIETTIVO UNIFORMARE PROGRESSIVAMENTE LE RISPOSTE SUL TERRITORIO REGIONALE

12 METODI N LAB RISULTATO IFI 31 1 DUBBIO 3 POS 27 NEG BLOT 1 NEG FARR 1 NEG

13 Anticorpi Anti DNA nativo Non evidenziati particolari problematiche nelle risposte Eccezione : 5/5 laboratori che utilizzano reagenti di un fornitore hanno attribuito un valore positivo al campione con risultati peraltro sovrapponibili Attenzione Se normalmente utilizzati dal laboratorio, entrambi i test devono essere eseguiti indipendentemente dal risultato del test quantitativo TEST QUANTITATIVO + TEST QUALITATIVO su CRITHIDIA LUCILIAE

14 71 RISPOSTE 58 NEGATIVO 2 DUBBIO 9 POSITIVO 2 NON RISPOSTO TRA I POSITIVI 7 HANNO UTILIZZATO LA DITTA BIO-RAD (LUMINEX E ELISA)

15 Anticorpi Anti ENA screening Differenti risposte legate alla diversa composizione dei test di screening (presenza o meno di CENP-B, diversa sensibilità per anti Ro 52 e 60 etc..) Attenzione TUTTI i laboratori devono eseguire sia ENA screening che il profilo di base (Sm, Jo1, Scl70, SSA, SSB, RNP) indipendentemente dal risultato del test di screening e dall algoritmo utilizzato dal laboratorio In caso di più specificità antigeniche per singolo ENA (es SSA 52 e 60 kd, U1RNP e RNP 70 kd ecc) il risultato va considerato POSITIVO in presenza anche di una singola positività. Nel campo NOTE il laboratorio dovrà indicare l esito delle singole specificità valutate

16 Anticorpi Anti ENA screening valutati con CTD screen Chi utilizza test di screening allargato invece di un test ENA screening deve comunque procedere alla determinazione dei singoli Ab anti ENA e alla ricerca di anti dsdna. In presenza di un risultato positivo di uno screening allargato, è comunque compito del laboratorio determinare la/le specificità che hanno dato origine alla positività stessa, come dovrebbe accadere nella routine. Qualora un campione positivo per uno screening allargato risulti negativo per i singoli ENA e per DNA, il laboratorio dovrà indicare nel campo NOTE la presenza degli altri antigeni nella miscela a cui può essere attribuita la positività dello screening

17 Anticorpi Anti ENA -Singole specificità Differenze tra le singole specificità: Concordanza 100% negativo per SSA Scl70 -Jo1 Per Sm - RNP buona concordanza con isolati esiti dubbi o positivi Per SSB discreto numero di discrepanti, per la maggior parte legati ad un singolo produttore. Sm : 8/19 risultati dubbi con uno stesso metodo RNP: 1/5 dubbio e 1/5 positivo con uno stesso metodo SSB : 1/19 dubbio con metodo 1, 2/11 dubbi e 2/11 positivi con metodo 2, 1/1 dubbio con metodo 3,2/2 positivi con metodo 4 4/5 positivo con metodo 5 e 2/2con metodo 6.

18 Anticorpi Anti ENA -Singole specificità CONSIDERAZIONI o Positività SSB/RNP/Sm generalmente non correlate alla positività ANA centromerica (però problema doppio pattern) o Positività isolata di SSB estremamente rara o ENA screening negativo con positività nel profilo In caso di risultati inattesi o non congruenti tra i vari test il laboratorio dovrebbe procedere con test adeguati a risolvere l incongruenza e/o a confermare il risultato

19 CONSIDERAZIONI Considerata la complessità della diagnostica e la scarsa standardizzazione delle procedure, i risultati complessivi dei tre esercizi siano più che soddisfacenti ed anzi, superiori alle attese. Sulla base dei risultati ottenuti ciascun laboratorio dovrebbe cogliere l occasione per una REVISIONE CRITICA delle proprie procedure, anche alla luce di quanto indicato dalle linee guida nazionali ed internazionali

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