ZytoLight SPEC HER2/CEN 17 Dual Color Probe

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1 ZytoLight SPEC HER2/CEN 17 Dual Color Probe Z Z (0.2 ml) 5 (0.05 ml) Per la rilevazione del gene umano HER2 e degli alfa-satelliti del cromosoma 17 mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH).... Dispositivo per uso diagnostico in vitro in base alle direttive EU 98/79/EC

2 Sonda polinucleotide marcata in fluorescenza per il rilevamento del gene umano HER2 e degli alfa-satelliti del centromero del cromosoma 17. Pronto all uso. Descrizione Prodotto: Contenuto: Prodotto: Specificità: Stabilità/Conservazione: Utilizzo: Sonda ZytoLight HER2/CEN 17 Dual Color Probe (PL8) in tampone di ibridazione. La sonda contiene polinucleotidi coniugati con un fluorocromo verde (ZyGreen, analogo alla FITC, eccitazione a 503 nm ed emissione a 528 nm) che marca il gene HER2 e polinucleotidi coniugati con un fluorocromo arancio (ZyOrange, analogo alla Rodamina, eccitazione a 547 nm ed emissione a 572 nm) che marca la sequenza degli alfa satellite del centromero del cromosoma 17 Z : 0.2 ml (20 reazioni considerando 10 μl di dispensazione per campione) Z : 0.05 ml (5 reazioni considerando 10 μl di dispensazione per campione) La sonda ZytoLight HER2/CEN 17 Dual Color Probe (PL8) è progettata per rilevare il gene umano HER2 così come gli alfa-satelliti del centromero del cromosoma 17 in tessuti fissati in formalina ed inclusi in paraffina o in campioni cellulari tramite ibridazione in situ fluorescente. La sonda ZytoLight HER2/CEN 17 Dual Color Probe (PL8) deve essere conservata a - 16/-22 C al buio ed è stabile fino alla data indicata sull etichetta. Questo prodotto è un dispositivo per uso diagnostico in vitro (in base alle direttive EU

3 Precauzioni: 98/79/EC). L'interpretazione dei risultati deve essere effettuata da personale qualificato tenendo conto degli altri dati clinici e patologici del paziente nel contesto dell'anamnesi clinica. Leggere il manuale d uso prima dell utilizzo! Non usare i reagenti dopo la data di scadenza riportata sull etichetta. Questo prodotto contiene sostanze (in piccoli volumi e piccole concentrazioni) dannose per la salute. Evitare il contatto diretto con i reagenti. Prendere le appropriate misure protettive (guanti monouso, occhiali protettivi, abbigliamento da laboratorio). Se i reagenti vengono in contatto con la pelle lavare abbondantemente con acqua. Principio del Metodo: La presenza di determinate sequenze di acido nucleico nelle cellule o nei tessuti può essere rilevata attraverso ibridazione in situ con l'utilizzo di sonde a DNA marcate. L'ibridazione induce la formazione di una struttura a doppio filamento (ibrido duplex) tra le sequenze presenti nel campione in analisi e la sonda. La formazione del duplex (con le sequenze cromosomiche del gene HER2 e degli alfa satelliti del cromosoma 17 nel campione) può essere visualizzata attraverso l'utilizzo di un microscopio a fluorescenza con filtri appropriati

4 Istruzioni: Il pretrattamento (sparaffinatura, proteolisi, post fissazione) piuttosto che l allestimento del campione dovrebbero essere ottimizzati dall utilizzatore a seconda della natura del campione e dei propri bisogni. Denaturazione e ibridazione 1. Utilizzare 10µl di ZytoLight HER2/CEN 17 Dual Color Probe (PL8) per ogni campione. Distribuire a piccole gocce sull'intera superficie evitando di concentrare in un unico punto. Alternativamente, aggiungere la sonda al centro di un coprioggetto e applicare il coprioggetto sull'area in esame. Un leggero riscaldamento della sonda e l'utilizzo di un puntale tagliato in punta semplificano l'operazione. 2. Evitare la formazione di bolle, coprire il campione con un vetrino copri oggetto (22 mm x 22 mm a seconda della dimensione del campione). Sigillare il vetrino copri oggetto con fixogum o con colla analoga. 3. Denaturare a 75 C (± 2 C) per 10 minuti utilizzando una piastra calda La temperatura di denaturazione può dipendere da vari fattori come la fissazione o l età del campione pertanto potrebbe essere necessaria l ottimizzazione di tale temperatura (73 C-77 C) 4. Trasferire i vetrini in una camera umida e ibridare overnight a 37 C in una stufa ventilata E importante che il campione (cellule o tessuto) non si asciughino durante l ibridazione E possibile condurre le fasi di denaturazione/ibridazione mediante l utilizzo di piastre a controllo automatico della temperatura come il ThermoBrite StatSpin.

5 Risultati Mediante l utilizzo di filtri appropriati, i segnali di ibridazione del gene HER2 appariranno verdi mentre i segnali di ibridazione dei alfa satelliti del cromosoma 117 appariranno arancio. In interfase, le cellule normali o le cellule senza aberrazione del cromosomi 7 si distingueranno due segnali distinti uno verde ed uno arancione. In cellule con amplificazione del gene HER2 si avrà un aumento dei segnali gene specifici o la formazione di cluster di segnale. I polinucleotidi della sonda ZytoLight HER2/CEN 17 Dual Color Probe (PL8) che riconoscono gli alfa satelliti del centromero del cromosoma 17 fungono da controllo interno per garantire che l ibridazione è avvenuta correttamente. Al fine di valutare la specificità del segnale, ogni ibridazione dovrebbe essere effettuata assieme a dei controlli. Si consiglia l utilizzo di almeno un campione in cui il numero di copie del gene HER2 e del cromosoma 17 sia noto. Particolare attenzione si deve prestare nella valutazione di cellule sovrapposte onde evitare falsi risultati tipo amplificazione del gene. A causa della de condensazione della cromatina, singoli segnali FISH possono apparire come piccoli cluster, comunque due o tre segnali della stessa dimensione, separati da uno spazio pari alla dimensione di un segnale, devono essere considerati come un unico segnale.

6 Bibliografia Alexandrov IA, et al. (1988) Chromosoma 96: Baselga J, et al. (1999) Semin Oncol 26: Coussens L, et al. (1985) Science 230: Hynes NE, Stern DF (1994) Biochim Biophys Acta 1198: Kievits T, et al. (1990) Cytogenet Cell Genet 53: Park JB, et al. (1989) Cancer Res 49: Popescu NC, et al. (1989) Genomics 4: Slamon DJ, et al. (1987) Science 235: Waye JS, Willard HF (1986) Nucleic Acids Res 14: Wilkinson DG: In Situ Hybridization, A Practical Approach, Oxford University Press (1992) ISBN Ultima versione: 11 Gennaio 2010 (4.5) Marchi di fabbrica: ZytoVision e ZytoLight sono marchi di fabbrica della ZytoVision

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