Centro di saggio Certificazione M.S. 158/245/2005 DRAFT AM1379-5
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- Geraldina Bini
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1 Pagina: 1 di 7 DRAFT AM VALUTAZIONE DELL ATTIVITÀ ANTIMICROBICA SU CANDIDA ALBICANS DI AGENTE INCORPORATO SU LAMINATO D ALLUMINIO SECONDO ASTM E 2180/01 Programma di Studio n.: AM1379 Contratto n: M06/0879.1MI Committente: ALP s.r.l. Via Vezze, 62/ CALCINATE (BG) Sostanza in esame: ALPactive Direttore dello Studio:... Data:... (Dr. M. Cavalleri) Il presente rapporto non può essere riprodotto parzialmente salvo approvazione scritta dal laboratorio.
2 SOSTANZA IN ESAME Pagina: 2 di 7 La sostanza in esame consiste in un laminato di alluminio ricoperto di polimero contenente sostanza antimicrobica a base di argento. Denominazione: Composizione quali-quantitativa: Stabilità: ALPactive in corso caratterizzazione presso Biolab SpA presunta maggiore di 10 anni CAMPIONE ANALIZZATO I campioni analizzati, rappresentativi della sostanza in esame, consistono in laminati di metallo trattati con antimicrobico a base di argento. In particolare, il campione denominato A consiste in provini di metallo trattati con antimicrobico a base di argento, mentre il campione denominato B consiste in provini di metallo trattati con antimicrobico a base di argento, spazzolati in modo da simulare 1000 interventi di pulizia ed esposti a 150 C per 72 ore per simulare condizioni ambientali avverse. Lotto: 88804/10 Data di preparazione: 21/12/2005 Ricevimento nr.: R Data di ricevimento: 11/04/2006 Id campione nr:
3 CONDIZIONI SPERIMENTALI Pagina: 3 di 7 Metodo di prova Microorganismo test Provini Controllo Tempo di contatto del microrganismo con la sostanza in esame Temperatura e grado di umidità relativa del test Concentrazione contaminante Volume contaminante ASTM E2180 Candida albicans ATCC10231 Laminati (2.5x2.5 cm) in metallo trattati con antimicrobico a base di argento Laminati (2.5x2.5 cm) in metallo non trattati (senza antimicrobico a base di argento) 96±2 ore 30±1 C; 75±5% RH 1-5x10 6 /ml 1 ml MATERIALI E METODI APPARECCHIATURA: - normale apparecchiatura da laboratorio, in particolare: - stufa a secco (MEMMERT) - autoclave a vapore (FEDEGARI) - termostato (MEMMERT) - phmetro (BECKMANN) - Agitatore vortex (VELP) - Apparecchio a ultrasuoni (BRANSONIC) REAGENTI: SAB: (ACOMEDIA) - Peptoni 10.0g - glucosio monoidrato 40.0g - Agar 2.5g - acqua sterile q.b. a 1000 ml Soluzione fisiologica contenente NaCl (0.85%) Il lievito è stato fatto crescere su slant di SAB per ore e poi diluito in acqua fisiologica fino a raggiungere circa la concentrazione di 10 8 CFU/ml. Successivamente, 1 ml di sospensione è stato diluito 1:100 in un liquido semi-gelatinoso composto da agar-agar a una concentrazione dello 0.3% e NaCl allo 0.85% equilibrato a 45 ±2 C.
4 Pagina: 4 di 7 In questo modo è stata ottenuta una sospensione pari a circa 1-5x10 6 CFU/ml. 1 ml di questa sospensione è stato inoculato con una siringa direttamente sui provini di laminato trattati con la sostanza in esame e sul controllo, in modo tale che l inoculo si distribuisse in maniera omogenea sulla superficie di saggio formando uno pseudobiofilm. I provini sono stati lasciati a contatto con la sospensione batterica per 96±2 ore alla temperatura di 30±1 C e a un umidità relativa pari al 75±5%.. Il recupero, effettuato al tempo 0 e dopo 96 ore di contatto è stato effettuato prendendo i provini con pinzette sterili e immergendolo in 100 ml di soluzione fisiologica e sottoponendoloa ultrasuoni per circa. L efficacia neutralizzante della soluzione salina è stata verificata in un saggio preliminare. E stato poi prelevato 1 ml della soluzione di recupero, piastrato su SAB e incubato a 30±1 C per 72±2 ore. Il numero di CFU/ml è stato contato mediante diluizioni successive 1:10 in acqua fisiologica e semina di 1 ml su piastra, eseguita in triplo. BIBLIOGRAFIA 1 ASTM E 2180/01 (presente metodo) 2 ASTM E 1054: Practice for evaluation of inactivators of antimicrobial agents used in disinfectant, sanitizer, antiseptic, or preserved products 3 ASTM G 21/96: Practice for determining resistance od synthetic polymeric materials to fungi. CALCOLO ED ESPRESSIONE DEI RISULTATI I risultati sono stati espressi in forma di riduzione percentuale della contaminazione batterica del trattato rispetto al controllo (bianco), secondo quanto prescritto dal metodo ASTM E 2180/01: è stata calcolata la media geometrica del numero di microorganismi recuperati nelle tre repliche effettuate per i due provini trattati (A e B) e per il provino di controllo; quindi è stata calcolata la differenza percentuale tra l antilogaritmo della media geometrica del provino di controllo e l antilogaritmo della media geometrica del provino trattato. Media geometrica = (LogR1 + LogR2 + LogR3)/3 R1 = numero totale di microorganismi recuperati dopo esposizione alla sostanza in esame o al controllo e incubazione (replica 1) R2 = numero totale di microorganismi recuperati dopo esposizione alla sostanza in esame o al controllo e incubazione (replica 2) R3 = numero totale di microorganismi recuperati dopo esposizione alla sostanza in esame o al controllo e incubazione (replica 3)
5 Pagina: 5 di 7 Riduzione % = (a-b)x100/a a = antilog(media geometrica) del campione trattato b = antilog(media geometrica) del controllo Il saggio è stato considerato valido quando il conteggio iniziale è stato uguale o superiore a 10 6 CFU/ml. RISULTATI La sospensione di partenza presentava una concentrazione pari a 1.0x10 6. Sono quindi soddisfatti i criteri di accettabilità del saggio. La tabella qui sotto riporta i valori delle medie geometriche su 3 repliche del numero totale (numero che tiene quindi conto sia del fattore di diluizione della piastra contata, sia della diluizione 1:100 dovuta all immersione del provino di metallo inoculato con un 1 ml di sospensione iniziale in 100 ml di diluente di recupero) di microorganismi recuperati dopo esposizione alla sostanza in esame o al controllo e dopo incubazione. C. albicans (recupero dopo 24 ore) B (ALPactive + spazzolamento A (ALPactive) + esposizione Controllo a 150 x 72 ore) <2.2 < Dopo 24 ore di esposizione alla sostanza in esame, il provino A presenta una riduzione della contaminazione rispetto al controllo nelle stesse condizioni sperimentali, superiore al 99.91%. Dopo 24 ore di esposizione alla sostanza in esame, il provino B presenta una riduzione della contaminazione rispetto al controllo nelle stesse condizioni sperimentali, superiore al 99.94%.
6 Pagina: 6 di 7 VALUTAZIONE DELL ATTIVITÀ ANTIMICROBICA SU CANDIDA ALBICANS DI AGENTE INCORPORATO SU LAMINATO D ALLUMINIO SECONDO ASTM E 2180/01 APPENDICI
7 Pagina: 7 di 7 TABELLE Le tabelle qui sotto riportate contengono i dati relativi alle CFU/ml di Candida albicans recuperate rispettivamente al tempo 0 e dopo 24±1 ore di esposizione del microorganismo test alla sostanza in esame, tenendo in considerazione il fattore di diluizione della piastra contata. C. albicans (recupero al tempo 0) B (ALPactive + A spazzolamento Sostanza Controllo (ALPactive) + esposizione a 150 x 72 ore) CFU/ml C. albicans (recupero dopo 24 ore) Sostanza A (ALPactive) B (ALPactive + spazzolamento + esposizione a 150 x 72 ore) Controllo Replica 1 <1 < Replica 2 4 < Replica 3 <
Centro di saggio Certificazione M.S. 158/245/2005 DRAFT AM1379-4
Pagina: 1 di 7 DRAFT AM1379-4 VALUTAZIONE DELL ATTIVITÀ ANTIMICROBICA SU LEGIONELLA PNEUMOPHILA DI AGENTE INCORPORATO SU LAMINATO D ALLUMINIO SECONDO ASTM E 2180/01 Programma di Studio n.: AM1379 Contratto
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