40 Congresso Nazionale della Società Nazionale di Biochimica Clinica e Biologia Molecolare Clinica Ottobre 2008 Rimini- Palacongressi
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1 40 Congresso Nazionale della Società Nazionale di Biochimica Clinica e Biologia Molecolare Clinica- 8-3 Ottobre 008 Rimini- Palacongressi NEUROTROPHINS AND RECEPTORS IN PLACENTAS FROM PREGNANCIES COMPLICATED BY HELLP SYNDROME AND INTRAUTERINE GROWTH RESTRICTION (IUGR) M. Cecati, F. Orici, D. Sartini, P. Stortoni, S.R. Giannubilo, M. Emanuelli, A..L. Tranquilli Istituto di Scienze Materno-Infantili, Università Politecnica delle Marche, Ancona Istituto di Biotecnologie Biochimiche, Università Politecnica delle Marche, Ancona NEUROTROFINE Molecole coinvolte nello sviluppo, nella differenziazione, nel mantenimento e nel normale funzionamento del sistema nervoso centrale Funzione neuro-protettrice
2 In una gravidanza fisiologica I livelli di neurotrofine nel sistema circolatorio periferico fetale rispecchiano quelli del sistema nervoso centrale In condizione di ipossia cronica BRAIN-SPARING EFFECT Redistribuzione della circolazione periferica fetale ai più importanti organi Scopo del lavoro Verificare se il brain-sparing effect sia sufficiente a mantenere i livelli delle neurotrofine entro un range normale in gravidanze complicate da HELLP syndrome e IUGR (INTRAUTERINE GROWTH RESTRICTION)
3 Materiali e Metodi Raccolta di campioni Prelievo di tessuto placentare da: 0 pazienti con gravidanza fisiologica a termine 0 pazienti con gravidanza complicata da HELLP syndrome 0 pazienti con gravidanza complicata da restrizione di crescita intrauterina (IUGR) Estrazione di RNA Retrotrascrizione Macroarray Analisi mediante Real time PCR Analisi statistica: Mann- Whitney test cdna MACROARRAY. Sintesi e marcatura della sonda. Ibridazione su filtro di nylon 3. Rivelazione del segnale chemiluminescente 4. Analisi dell immagine ed elaborazione dei dati
4 cdna MACROARRAY Normale NORMALE Patologico PATOLOGICO L analisi mediante MacroArray è una tecnologia che permette in un singolo esperimento la simultanea valutazione dell espressione genica differenziale nei vari campioni 5 7 Risultati Analisi 3 di cdna array di placente normali e 4 3 patologiche Significative differenze nei livelli di espressione genica 0 tra gruppo di controllo e gruppi patologici HELLP e IUGR7 ADCYAPR LIFR MEFC APAF ATF MT3 IUGR HELLP NCOA BAX NGFB BCL NGFRAP BDNF NPY CBLN NPYR CRH NRI CRHR NTF5 CRHR NTRK CX3CR NTRK3 PPYR CXCR4 PSPN ELK IUGR 6 HELLP 5 Alcuni geni hanno un analogo trend di espressione 4 3 (down o up-regolati) in entrambe le patologie considerate ETS PTN RPS6KA6 F SNT- FGF9 SNT- FOS STAT FUS STAT GFRA STAT3 GHRH STAT5A GMFB STAT5B GPR74 TAC3 HSPB TGFB IL0RA TNFRSF5 TNFRSF6 IL0RB ILR UCN 0 ADCYAPR IL6ST APAF JUN ATF LIFR BAX MEFC BCL MT3 BDNF NCOA CBLN NGFB CRH NGFRAP CRHR CRHR NPY NPYR CX3CR NRI CXCR4 ELK NTF3 ETS NTF5 F NTRK3 FGF9 PSPN FOS PTN FUS RPS6KA6 GFRA SNT- GHRH SNT- GMFB STAT GPR74 HSPB STAT3 IL0RA STAT5B IL0RB TAC3 ILR TGFB IL6 TNFRSF5 IL6ST TNFRSF6 JUN
5 STAT3 Appartiene alla famiglia delle proteine STAT (Signal Transducer and Activator of Transcription) e viene attivata per fosforilazione del residuo di tirosina nella porzione C-terminale da parte delle JAK chinasi attivate STAT3 e STAT3 β Esistono 3 isoforme della proteina STAT3 che differiscono tra di loro o per dimensioni (STAT3α vs STAT3β ) o per composizione aminoacidica (STAT3α vs STAT3C )
6 * Risultati Saggio di Real-time PCR per l espressione genica di stat3 e stat3β Significative differenze nei livelli di espressione genica tra gruppo di controllo e gruppi patologici HELLP e IUGR per stat3 e per la sua isoforma stat3β * * * CONCLUSIONI HELLP syndrome syndrome e IUGR prevedono e IUGR un alterata prevedono funzionalità neuronale cellulare un alterata funzionalità neuronale Alterazioni nel pathway metabolico cellulare Alterazioni nel pathway metabolico delle neurotrofine potrebbero condurre delle neurotrofine nello IUGR ad una deviazione potrebbero dal normale condurre processo di crescita neuronale fetale nello Alterazioni IUGR ad nel una pathway deviazione metabolico dal Alterazioni nel pathway metabolico delle neurotrofine potrebbero normale delle neurotrofine processo di potrebbero crescita neuronale condurre condurre nella HELLP syndrome ad un processo flogistico con gravi fetale nella conseguenze HELLP neurologiche syndrome per il fetoad un processo flogistico con gravi conseguenze neurologiche per il feto
7 CONCLUSIONI L insorgenza di complicanze ostetriche quali lo IUGR e la sindrome HELLP è un processo dinamico ed evolutivo a cui partecipano anche alcune neurotrofine e molecole segnale sottolineando la natura multifattoriale di queste patologie Ringraziamenti Clinica Ostetrica e Ginecologica Università Politecnica delle Marche, Ancona Dott. S. R. Giannubilo Dott. P. Stortoni Dott.ssa F. Orici Prof. A. L. Tranquilli Istituto di Biotecnologie Biochimiche Università Politecnica delle Marche, Ancona Dott. D. Sartini Dott.ssa V. Pozzi Dott.ssa V. Rossi Prof.ssa M. Emanuelli
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