il target: Il prodotto conforme
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- Giancarlo Tedesco
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1 HPC-A e HPCHPCHPC-M standard di prodotto e controlli di qualità Michele Vacca UOS Raccolta Cellule Staminali ed effettori terapia cellulare SIMT A.O. San Camillo Forlanini Roma
2 il target: Il prodotto conforme
3 C.Q. : parametri critici dose funzionalità efficacia outcome vitalità
4 C.Q. : parametri critici Presa in carico donatore Riduzione cell mature sicurezza Test qualificaz ione Controlli microbiolo gici
5 Lentamente ma inesorabilmente GMPs GPs
6 Verso il prodotto GMP GPs GMPs
7 Il percorso verso il prodotto conforme selezione Idoneità qualificazione raccolta + MNC - GR - Neut processazione Vitalità dose
8 HPC M (marrow) HPC A (apheresis) HPC BC (cord blood)
9 fattori che influenzano la qualità del prodotto
10 Factors affecting volume reduction and red cell depletion Guttridge et al. BMT 2004 Cell population Recovery RBC ml % 1,3 (0,4-14,6) MNC % 86,6 (10 115) CD34 % 93,2 (10-115,7) Neutrophil engraftment (days) 20 (7-51) Cell dose (CD34 x 106/Kg) -6% 3,53 (0,24 18,38) -2% Tempo di Durata dello trasporto stoccaggio <3,4 h vs >3,4 2-6 C <1 vs > 1 h Tempo dalla raccolta alla manipolazione Recupero CD34 % 95,7 / 88,8 88,8 / 88,8 94,6 / 82,9 83,7 / 95,1 P-value 0,0059 0,9970 0,0217 0,0120 Concentraz. MNC < 5,7 h vs > < 836,6 x 10 /l vs > 5,7 h
11 Transportation and cryopreservation may impair CSE function and engraftment of allogenic PBSCs, but not BM Lioznov et al. BMT 2008 Integrità della membrana Capacità staminale
12 Quindi..Come diceva catalano Meglio un prodotto fresco e se di aferesi, portato velocemente in manipolazione vitale, con pochi granulociti, e sterile. Che un prodotto vecchio, manipolato il giorno dopo stoccato a temperatura ambiente per oltre 16 ore, ipercellulare, con bassa dose, e probabilmente inquinato
13 CQ post raccolta: sterilità SOPs Gestione del prodotto non conforme Test di sterilità Aerobi Anaerobi - Miceti LAL test Corretta informazione al ricevente (e al donatore) Controlli microbiologici
14 Kamble et al :Microbial contamination of hematopoietic progenitor cell grafts incidence of 735 grafts TRANSFUSION HPC-A 2.1 % HPC-M 3.5 % HPC-BC 13% totale 14 3%
15 Contaminazioni pericolose I. Kassis et al : Contamination of Peripheral Hematopoeitic Stem Cell Products With a Mycobacterium mucogenicum Related Pathogen Infection Control and Hospital Epidemiology, volume 28 (2007), pages
16 Somministrare o scartare? Somministrare o smaltire? smaltire? 16
17
18 CQ post raccolta: cellularità HPC - M HPC - A Dose per Kg ricevente : TNC > 2x108 (CD34+ >2x106 ) Dose per Kg ricevente: Auto > x106 Allo tra 4-8 x106 Aplo > 8 x106 Se AB0 incompatibile Emazie : ml / Kg ricevente TNC nel prodotto: < /µL
19 Granulociti ed eventi avversi post infusione HPC B. Calmels et al TRANSFUSION 2007;47: Graft lavati
20 CQ in manipolazione e stoccaggio Valutazione del prodotto CQ pre e post manipolazione/criopreservazioe CQ scongelamento e rilascio
21 Valutazione del prodotto Determinazione CD34+ citoflorimetria Determinazione CD3+ citoflorimetria Conta WBC emometria Vitalità cellulare 7 -AAD Test clonogenici CFU
22 CQ Manipolazione (minima) HPC m e HPC A Plasma riduzione target: Alto recupero cellulare > 80% Bassa perdita di CD34+ < 10% Riduzione di tossici come il DMSO
23 Attenzione al DMSO Nausea cefalea Sensibilizzazione alla luce Reazioni allergiche
24 Windrum P, al. Variation in dimethyl sulfoxide use in stem cell transplantation: a survey of EBMT centres. centres. Bone Marrow Transplant
25 Stoccaggio e rilascio Stoccaggio in Vapore LN2 Stoccaggio in LN2 Vapore (evitare mix up) Controllo degli allarmi locali e remoti (collegamento telefonico o telematico in stazioni presidiate 24 h/24 h
26 Controllo visivo pre rilascio
27 quantification of viable CD34+ cell number after thawing is a more accurate predictor of engraftment than postpost-thaw total CD34+ cell counts, or prepre-freeze determinations S.Lee Vox Sanguinis 2008
28 Predictive utility of cryovial Fig. 5. Linear relation between viable CD34+ cells as measured on a frozen test sample and total viable CD34+ cell content of the cord blood unit. y = x; r2 = Van Haute 2004
29 Predictive utility of QC vial C.Keever-Taylor 2008 MCW wisconsin
30
31 Comparison between cell viability testing performed after thawing in satellite samples and corresponding frozen bags Pandolfi A., Fioravanti D., Scocchera R., Iudicone P., Vacca M., Ipsevich F., Possenti M., Massarelli F., Berardini S., Pierelli L. ISBT 2011 CD34+ cells Viability 120,0 120,0 100,0 100,0 80,0 80,0 Vial 60,0 Bag 40,0 % % CD34+ cells Viability 20,0 0,0 0, Bag 40,0 20,0 1 Vial 60,0 1 8 PBSC storage time 1 MONTH PBSC storage time 3 MONTHS CD34+ cells Viability Vial Bag mean 96,0 94,9 St Dev 6,28 5,21 CV% 6, ,0 100,0 % 80,0 Vial 60,0 Bag 40,0 20,0 0, PBSC storage time 5 MONTHS 8
32 Predictive utility of cryovial Products Falsi non conformi Sensibilità = 94% Falsi conformi Lab. Manipol. S. Camillo Roma Vials
33 Outcome Attecchimento granulocitario (autologo) autologo) : day Neut > mmc mm trapianti autologhi
34 Attecchimento PLT (autologo) autologo) Titolo o asse as Titolo asse
35 In conclusione Meglio prodotti con una con vitalità pre rilascio > dell 80% con dose rivalutata uguale o superiore al target richiesto dall Unità Clinica, con controlli di sterilità post manipolazione negativi e outcome clinico con attecchimenti veloci e stabili piuttosto che prodotti..
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