MBT Sepsityper IVD Kit

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1 Istruzioni per l uso MBT Sepsityper IVD Kit Kit per l identificazione di microrganismi da emocolture positive per mezzo del sistema IVD MALDI Biotyper I prodotti CARE sono progettati per fornire supporto ai nostri clienti in tutto il mondo con prodotti di consumo, accessori e kit dedicati di alta qualità. La gamma dei prodotti CARE è ottimizzata e certificata per l uso con tutti i sistemi Bruker Daltonics. Lingua: it Revisione D (Giugno 2016)

2 1 Uso previsto 2 2 Descrizione del prodotto 2 3 Ispezione, stoccaggio e stabilità Ispezione all arrivo Conservazione prima e dopo la prima apertura 3 4 Informazioni sui rischi e sulla sicurezza Rischi biologici Limitazioni della procedura 5 5 Sostanze chimiche e materiali necessari Sostanze chimiche Attrezzature e materiali di consumo Materiali raccomandati per la raccolta dei campioni ematici 6 6 MBT Sepsityper IVD procedura di preparazione del campione Formazione sull applicazione MBT Sepsityper IVD 7 7 Produttore 8 1 Uso previsto Il MBT Sepsityper IVD Kit è un kit di preparazione del campione diagnostico in vitro per l'identificazione di microrganismi da colture di sangue contrassegnate positivamente con il IVD MALDI Biotyper. Esso viene utilizzato in combinazione con altre procedure cliniche e diagnosi per aiutare nella diagnosi precoce di, per esempio, infezioni della circolazione sanguigna. 2 Descrizione del prodotto Nella pratica clinica, il sangue (10 ml circa), prelevato per esempio da pazienti con sospetta infezione del torrente circolatorio, viene raccolto in flaconi per emocoltura. I flaconi vengono incubati in un sistema automatico di rilevamento che segnala la presenza di batteri, lieviti o miceti in un campione. MBT Sepsityper IVD Kit distrugge in modo selettivo le cellule ematiche e arricchisce i microrganismi di un emocoltura contrassegnata come positiva. Gli estratti risultanti possono essere usati per l analisi usando il sistema IVDMALDI Biotyper. MBT Sepsityper IVD Kit permette di identificare, con elevata probabilità, le specie rilevanti di microrganismi entro 30 minuti utilizzando il sistema IVD MALDI Biotyper. In molti casi, una volta identificata la specie è possibile stimare la sensibilità del microrganismo a una classe di antibiotici. Questo kit è un dispositivo diagnostico in vitro. Pagina 2 di 8 MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Revisione D

3 Componenti del kit MBT Sepsityper IVD Kit contiene i seguenti componenti: Lysis Buffer Washing Buffer Provette per microcentrifuga da 1,5 ml (conf. da 50) Etichette Guida rapida di MBT Sepsityper IVD Kit Informazioni per effettuare un ordine Prodotto Codice del prodotto MBT Sepsityper IVD Kit per 50 campioni N Ispezione, stoccaggio e stabilità 3.1 Ispezione all arrivo All arrivo, controllare la confezione di MBT Sepsityper IVD Kit. Se è danneggiata, controllare l integrità di provette/flaconi all'interno. Non utilizzare MBT Sepsityper IVD Kit in caso di deterioramento delle provette o dei flaconi. Smaltire MBT Sepsityper IVD Kit (provette/flaconi e confezione) rispettando le linee guida riportate nella Scheda di Sicurezza del Materiale del prodotto e richiedere la sostituzione a Bruker. 3.2 Conservazione prima e dopo la prima apertura +20 C +25 C Prima della prima apertura, controllare se MBT Sepsityper IVD Kit contiene del precipitato. In presenza di precipitato, conservare il Lysis Buffer a temperatura ambiente controllata (20 25 C) per almeno un ora e agitare il contenuto prima della prima apertura. Dopo la prima apertura, MBT Sepsityper IVD Kit è stabile fino a tre mesi a temperatura ambiente controllata (20 25 C). Non usare MBT Sepsityper IVD Kit oltre la data di scadenza indicata sull etichettatura della confezione. Revisione D MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Pagina 3 di 8

4 4 Informazioni sui rischi e sulla sicurezza Il Lysis Buffer è classificata come sostanza chimica pericolosa: PERICOLO (H: 315, 318) 1 Per ulteriori informazioni, leggere le Schede di Sicurezza dei Materiali scaricabili all indirizzo Per le procedure descritte in queste Istruzioni per l uso potrebbero essere richiesti ulteriori sostanze chimiche e materiali. Durante la manipolazione di sostanze chimiche, materiali a rischio biologico o altri materiali leggere attentamente le avvertenze, le istruzioni o le Schede di Sicurezza dei Materiali del fornitore e attenersi alle normative di sicurezza generali. 4.1 Rischi biologici MBT Sepsityper IVD Kit e il sistema IVD MALDI Biotyper prevede l impiego di materiale biologico potenzialmente pericoloso. È compito di ogni persona che utilizza questi sistemi leggere e osservare tutte le misure sanitarie e di sicurezza necessarie. Tutti i campioni dei pazienti e le colture devono essere considerati potenzialmente infettivi. MBT Sepsityper IVD Kit e il sistema IVD MALDI Biotyper devono essere utilizzati solo da personale di laboratorio qualificato, responsabile dell'adozione e dell osservanza di tutte le misure di sicurezza necessarie alla manipolazione di materiale potenzialmente infettivo. È estremamente importante indossare sempre l equipaggiamento appropriato di protezione personale, ossia un camice da laboratorio, guanti protettivi e occhiali di sicurezza. Assicurarsi che l equipaggiamento di protezione personale sia in buone condizioni. Durante l esecuzione del flusso di lavoro di MBT Sepsityper IVD alcuni reagenti vengono miscelati con microrganismi e quindi con materiale biologico potenzialmente pericoloso. Inoltre, alcuni accessori e materiali di consumo usati verranno a contatto con i microrganismi. È responsabilità dell operatore manipolare con attenzione, smaltire correttamente e decontaminare le sostanze, gli accessori e i materiali di consumo pertinenti in ottemperanza alle normative di sicurezza nazionali o locali vigenti. 1 H315: Provoca irritazione cutanea; P264: Lavare accuratamente le mani dopo l uso; P280: Indossare guanti/indumenti protettivi/proteggere gli occhi/il viso; P302+P352: IN CASO DI CONTATTO CON LA PELLE, lavare con acqua e sapone; P321: Trattamento specifico (vedere Misure di pronto soccorso nella Scheda di Sicurezza dei Materiali); P332+P313: In caso di irritazione della pelle, consultare un medico; P362+P364: Togliersi di dosso gli indumenti contaminati e lavarli prima di indossarli nuovamente. H318: Provoca gravi lesioni oculari; P280: Indossare guanti/indumenti protettivi/proteggere gli occhi/il viso; P305+P351+P338: IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI, sciacquare accuratamente con acqua per parecchi minuti. Togliere le eventuali lenti a contatto se è agevole farlo. Continuare a sciacquare; P310: Contattare immediatamente un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Pagina 4 di 8 MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Revisione D

5 4.2 Limitazioni della procedura L identificazione di infezioni multi- microbiche o contaminazioni (colture miste) utilizzando metodi biochimici può portare a risultati falsi. Quando si utilizza il MBT Sepsityper IVD Kit, possono verificarsi risultati ambigui. In tali casi, tipicamente viene identificato un solo microrganismo viene identificato, non ne viene identificato nessuno o un suggerimento coltura mista è generato (solo nei MBT Sepsityper IVD Module). Nota Il fatto che venga generato un risultato di cultura mista è un forte indicatore ma non una conferma che il campione contiene una miscela di organismi. Al contrario, un campione contenente una miscela di organismi potrebbe non essere segnalato dal sistema come una cultura mista. Di conseguenza, come per tutte le altre analisi MALDI Biotyper, i risultati finali dei campioni Sepsityper devono essere valutati da un professionista esperto in microbiologia clinica. Per controllare se nelle emocolture positive sono presenti colture miste, in microbiologia è pratica comune subcoltivare ciascun campione di emocoltura su una piastra di agar (piastra di purezza). Il giorno dopo si esaminano le colonie sulla piastra di purezza. La presenza di colonie eterogenee indica che nel campione era presente più di una specie di microrganismo. Ogni identificazione dell emocoltura con MBT Sepsityper IVD deve essere confermata controllando che le colonie sulle piastre di purezza siano omogenee e tutta la morfologia colonia è confermata usando il sistema IVD MALDI Biotyper. 5 Sostanze chimiche e materiali necessari 5.1 Sostanze chimiche Oltre ai componenti Lysis Buffer e Washing Buffer di MBT Sepsityper IVD Kit, per effettuare il flusso di lavoro di preparazione dei campioni di MBT Sepsityper IVD sono necessarie le seguenti sostanze chimiche e materiali. Per ottenere risultati ottimali, utilizzare soluzioni preparate al momento con il più alto livello di purezza disponibile (ad esempio solventi di grado HPLC o CHROMASOLV LC-MS). Etanolo assoluto Acido formico Acetonitrile Acqua di grado HPLC IVD Bacterial Test Standard (IVD BTS, cod , Bruker Daltonik GmbH) IVD Matrix HCCA-portioned (IVD HCCA, cod , Bruker Daltonik GmbH) Solvente standard (acetonitrile 50%, acqua 47,5% e acido trifluoroacetico 2,5%) di Sigma- Aldrich (cod ) o SOLUTION OS di VWR International GmbH (# PRLS , 250 ml), testati da Bruker Daltonik GmbH e raccomandati per la solubilizzazione di IVD BTS e IVD HCCA. 5.2 Attrezzature e materiali di consumo Piastra portacampioni MALDI del tipo selezionato per il proprio flusso di lavoro Miscelatore vortex Centrifuga da tavolo Revisione D MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Pagina 5 di 8

6 Griglia per provette Pipette Puntali 5.3 Materiali raccomandati per la raccolta dei campioni ematici BD 1 Vacutainer provetta per il prelievo di sangue (8,5 ml), cod. BD BD Vacutainer Eclipse ago per il prelievo di sangue, cod. BD BD Vacutainer porta aghi, cod. BD Nota Altri metodi di raccolta possono essere utilizzati. Durante la manipolazione di sostanze chimiche, materiali a rischio biologico o altri materiali leggere attentamente le avvertenze, le istruzioni o le Schede di Sicurezza dei Materiali del fornitore e attenersi alle normative di sicurezza generali. 6 MBT Sepsityper IVD procedura di preparazione del campione Prelievo dei campioni ematici 1. Disinfettare il setto del flacone per emocoltura con etanolo al 70% o simili. 2. Prelevare fluido per l emocoltura sufficiente. Procedura di preparazione del campione con MBT Sepsityper IVD Kit Nota I passaggi aggiuntivi da seguire in caso di utilizzo dei flaconi per emocoltura biomérieux contenenti carbone attivo sono indicati in corsivo. 3. Trasferire 1 ml di fluido per l emocoltura in una provetta Eppendorf. 4. Aggiungere 200 µl di Lysis Buffer e miscelare con il vortex per 10 (± 5) secondi. a. Applicare 800 µl di questa miscela a una spin column SigmaPrep (Sigma-Aldrich SC1000-1KT). b. Centrifugare per 2 minuti a rpm e smaltire il filtro. c. Continuare con il passaggio Centrifugare la provetta per 2 minuti a rpm. 6. Rimuovere il sopranatante con la pipetta e smaltirlo. 7. Aggiungere 1 ml di Washing Buffer e risospendere il pellet pipettando verso l alto e il basso. 8. Centrifugare la provetta per 1 minuto a rpm. 9. Rimuovere il sopranatante con la pipetta e smaltirlo. 1 Becton, Dickinson and Company Pagina 6 di 8 MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Revisione D

7 Metodo di estrazione e preparazione dei campioni su una piastra portacampioni MALDI 10. Aggiungere 300 µl di acqua di grado HPLC e risospendere il pellet pipettando verso l alto e il basso. 11. Aggiungere 900 µl di etanolo e mescolare la sospensione. 12. Centrifugare la provetta per 2 minuti a rpm. 13. Rimuovere il sopranatante con la pipetta e smaltirlo. 14. Centrifugare la provetta per 2 minuti a rpm. 15. Rimuovere l etanolo residuo con la pipetta e smaltirlo. 16. Lasciar asciugare il pellet per 5 (±1) minuti a temperatura ambiente. 17. Aggiungere 2 50 μl 1 di acido formico al 70% e risospendere accuratamente il pellet pipettando verso l alto e il basso. 18. Aggiungere un volume uguale di acetonitrile e mescolare la sospensione pipettando verso l alto e il basso due o tre volte. 19. Centrifugare la provetta per 2 minuti a Depositare 1 µl di sopranatante su una piastra portacampioni MALDI. 21. Per la validazione del sistema IVD, depositare 1 µl di soluzione IVD BTS ricostituita 2 su almeno una posizione della piastra portacampioni MALDI. AVVERTENZA: possibili risultati di identificazione ritardati/persi/non disponibili Dopo l asciugatura del campione, aggiungere la matrice IVD HCCA entro 30 minuti. I risultati dell identificazione ottenuti da un campione coperto di matrice IVD HCCA più di 30 minuti dopo l asciugatura non devono essere presi in considerazione. La preparazione di tale campione dovrà essere ripetuta su una posizione libera della piastra portacampioni o su una piastra portacampioni MALDI diversa e pulita. 22. Lasciar asciugare i campioni a temperatura ambiente. 23. Coprire ogni campione con 1 µl di soluzione matrice IVD HCCA ricostituita Lasciare asciugare i campioni coperti di matrice a temperatura ambiente. 25. A questo punto il campione del microrganismo di prova è pronto per il processo di identificazione. Inserire la piastra portacampioni MALDI nello spettrometro di massa MALDI-TOF e seguire il flusso di lavoro descritto nel manuale d uso del software. 6.1 Formazione sull applicazione MBT Sepsityper IVD Per aumentare l'affidabilità e le percentuali di successo della preparazione dei campioni con MBT Sepsityper IVD Kit è disponibile una formazione dedicata sull applicazione MBT Sepsityper IVD. 1 I volumi di acido formico e acetonitrile aggiunti al pellet devono essere proporzionali alle dimensioni del pellet. Per pellet molto piccoli, il volume può essere ridotto a 2 μl ciascuno. 2 Preparata come descritto nelle istruzioni per l uso di IVD Bacterial Test Standard 3 Preparata come descritto nelle istruzioni per l uso di IVD Matrix HCCA-portioned Revisione D MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Pagina 7 di 8

8 7 Produttore Bruker Daltonik GmbH Fahrenheitstraße Brema Germania Supporto biotyper.support@bruker.com Telefono: Fax: Informazioni commerciali care@bruker.com Telefono: Web: N Le descrizioni e le specifiche sostituiscono ogni informazione fornita precedentemente e sono soggette a modifiche senza preavviso. Copyright 2016 Bruker Daltonik GmbH Pagina 8 di 8 MBT Sepsityper IVD Kit Istruzioni per l uso Revisione D