QuickTox Kit for QuickScan DON Flex (AQ-304-BG) Manuale d uso. Cat. # GX Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit

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1 QuickTox Kit for QuickScan DON Flex (AQ-304-BG) Cat. # GX12208 Versione Minima Software QS: Update 3 Manuale d uso Leggere attentamente il manuale prima di procedere all uso del kit Via San Geminiano, San Prospero (MO) Italy : : : laboratorio@generon.it : [1] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

2 1 Calibrazione dello scanner Il nuovo kit DON FLEX permette di rilevare la presenza di vomitossina a partire da 0.1 ppm fino a 8.0 ppm. Le matrici analizzabili sono : Gruppo Definizione Inglese Definizione Italiana Limite di rilevabilità (LOD) Limite alto senza diluizione Limite alto con diluizione DF MG1 Wheat Frumento DF MG2 Corn Mais DF MG3 Wheat Flour Farina di grano DF MG4 White Wheat Flour; Wheat Bran Farina bianca di grano; Crusca di grano 0.1 ppm 8.0 ppm ppm DF MG5 Wheat Midds Tritello di frumento DF MG6 DF MG7 Wheat Red Dog DDGS Residui di molitura del frumento Residui di distillazione dei cereali Per poter sfruttare questa nuova possibilità bisogna prima di tutto calibrare lo strumento utilizzando il foglio con i codici a barre inserito nella scatola. Note importanti: 1. La scansione del codice a barre è necessaria per tutte le matrici alla ricezione del kit 2. Una volta eseguita questa prima scansione il codice a barre viene memorizzato per l intero lotto di strip in uso 3. Il foglio con i codici a barre è specifico per il lotto; alla ricezione di un nuovo kit è dunque necessario ricalibrare lo strumento 4. Altri kit appartenenti alla linea QuickTox possono contenere un foglio con codici a barre utile a calibrare lo strumento per altre specifiche tossine; il software QuickScan riconosce e memorizza le diverse calibrazioni distinguendo le varie tossine in maniera indipendente 5. Si raccomanda inoltre di mantenere costantemente aggiornato il software all ultima versione disponibile; sarebbe preferibile pertanto che il PC a cui lo scanner è collegato fosse on-line in modo che gli aggiornamenti vengano «visti» automaticamente. Per calibrare lo scanner dopo averlo acceso e lanciato il software QuickScan : 1. Aprire il coperchio dello scanner e mettere il foglio con i codici a barre sul vetro rivolti verso il basso; 2. Chiudere il coperchio e cliccare il tasto Read Test (lo stesso che si usa per fare le analisi) in alto a destra nella schermata principale; 3. Un messaggio di avvenuta calibrazione, con l elenco dei nuovi gruppi di matrici riconosciuti, apparirà sullo schermo (vedi immagine). Se testate soltanto le matrici del Gruppo DF MG1, piegate il Multi Matrix Barcode e scannerizzate soltanto il codice a barre DF MG1. Se testate soltanto le matrici del Gruppo DF MG2, piegate il Multi Matrix Barcode e scannerizzate soltanto il codice a barre DF MG2. Questo permetterà al programma di saltare la tappa che obbliga l utilizzatore a selezionare un gruppo di matrici. [2] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

3 2 Contenuto del kit Ogni kit contiene: 50 strip QuickTox (Tubo bianco), una bottiglietta di Buffer DB6, 100 puntali per pipetta (sacchetto trasparente), 50 tubi per correre il test (sacchetto blu) e il Multi Matrix Barcode lotto-specifico. Se necessario è possibile acquistare separatamente il buffer DB6 (Cat. # GX11666); il lotto di buffer è legato al lotto di strip e dunque bisogna indicare nell ordine il numero di lotto delle strip. Generon può fornire anche tutti i materiali necessari ad eseguire l analisi non forniti con il kit: Bilancia (Cat. # ACC3039) e barattoli per la pesata (Cat. # ACC3525); Pipetta a volume variabile da 200 microlitri (Cat. # ACC3015) e 1000 microlitri (Cat. # ACC3014); Microcentrifuga (Cat. # ACC3064) o filtri (Cat. # ACC3504) per chiarificare gli estratti; Puntali da 1 ml (Cat. # ACC3514) e microtubi (Cat. # ACC3564) per utilizzare la microcentrifuga; Termoblocco per realizzare l analisi a temperatura costante (2 parti): base (GX12195) e blocco (GX12196); Molino Golia con crivello 1,5 mm (Cat. # ACC3081) per macinare i campioni; Cilindro graduato (Cat.# ACC3506) per misurare il liquido estraente. 3 Precauzioni Le strip sono sensibili all umidità pertanto si consiglia di conservarle all interno del tubo ben chiuso. Il tappo contiene silice disseccante che le proteggerà. Evitare di piegare le strip in quanto il normale flusso ne risulterebbe poi compromesso. Prima di utilizzare le strip portarle a temperatura ambiente (20-25 C) in quanto esse sono state tarate a queste temperature. 4 Preparazione dei reagenti Estrarre dal frigo almeno mezz ora prima delle analisi le strip necessarie e il tampone DB6 BUFFER. Riporre le altre strip in frigo. ATTENZIONE: L analisi deve essere eseguita a 22 C. Una temperatura inferiore o superiore può falsare i risultati. Accendere il termoblocco e regolare la temperatura a 22 C almeno 10 minuti prima dell esecuzione dell analisi. Assicurarsi che la temperatura sia stabile e che lo schermo indichi OK prima di cominciare l analisi. Se sono state programmate analisi durante tutto il giorno, si raccomanda di accendere l incubatore al mattino e lasciarlo acceso durante tutta la giornata. La Tabella A a pagina 8 fornisce una breve guida per testare ognuna delle matrici. Maggiori dettagli sono descritti in seguito per ogni passaggio dell analisi, e sono utili per poter ottenere risultati ottimali e precisi. [3] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

4 5 Estrazione del DON dal campione 1. Raccogliere un campione rappresentativo del materiale da analizzare: almeno 1-2 Kg. Macinare finemente tutto il campione arrivando ad una granulometria di almeno 20 Mesh (0,8 mm). Granulometrie più grossolane possono limitare l efficienza estrattiva portando a sottostime (Fig.1); 2. Prendere un barattolo pulito e rimuovere il coperchio. Posizionare il barattolo sulla bilancia e premere il pulsante TARA. Pesare 20 g di campione macinato (Fig.2). Il barattolo deve essere grande a sufficienza da garantire un adeguata agitazione del campione; 3. Aggiungere acqua distillata, demineralizzata o acqua minerale non gassata in proporzione 1 g (solido): 5 ml (liquido) (Fig.3). Esempio: per 20 g di campione aggiungere 100 ml d acqua; 4. Chiudere il recipiente. Agitare vigorosamente per 30 secondi, manualmente o tramite agitatore meccanico (Cat. # ACC3912) assicurandosi che tutto il campione venga bagnato e che non si formino grumi nei quali l estrazione non sarebbe completa (Fig.4); NOTA: Rispettare il tempo di agitazione indicato per ottenere una quantificazione precisa Purificare il campione estratto, se possibile* per centrifugazione (Fig.5): I. Prelevare 800 μl dalla parte superiore dell omogenato e trasferirli in un microtubo per centrifuga (si consiglia di tagliare l estremità del puntale per evitare che si intasi); II. centrifugare 30 a 7200 rpm (attenzione al bilanciamento del rotore). (*) Se sprovvisti di centrifuga chiarificare il campione tramite filtrazione (utilizzando appositi filtri di carta plissettata Cat. # ACC3504), solo per grano e mais, è possibile evitare la filtrazione/ centrifugazione, lasciando decantare il campione finché il macinato si deposita e il liquido in superficie diventa limpido (Fig.5). o o (solo per mais e frumento) 5 [4] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

5 6 Esecuzione del test 1. Preparare il tubo di reazione. Prelevare 100 µl di buffer DB6 e trasferirli nel tubo (Fig.6); 2. Cambiare puntale, prelevare 100 µl di campione centrifugato/filtrato/decantato e trasferirli nel tubo (Fig.7). Mescolare accuratamente con la pipetta (aspirare ed espellere delicatamente il liquido 2/3 volte) evitando di fare schiuma; 3. Accertarsi che l incubatore abbia raggiunto i 22 C e inserire il tubo di reazione all interno. Se la temperatura ambiente è sconosciuta o è al di fuori dell intervallo C (68-75 F), lasciare acclimatare il campione nell incubatore per 2 minuti prima di procedere all analisi; 4. Inserire la strip nel tubo di reazione, immergendo la parte colorata (Fig.8); 5. Attendere lo sviluppo della strip per 2 minuti; NOTA: rispettare rigorosamente i tempi di sviluppo della strip indicati se si vuole ottenere una quantificazione precisa. 6. Estrarre la strip dal tubo di reazione, tagliare via con le forbici la parte finale colorata e procedere con la lettura della strip µl µl [5] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

6 7 Lettura della strip 1. Aprire il programma di lettura, facendo doppio clic sull icona QuickScan (QS) sullo schermo. Apparirà il menu principale (Fig.9); 2. Estrarre dal QuickScan il supporto per le strip (Fig.10 parte nera a punta). Aprire lo sportellino e posizionare la strip sul numero 1; 3. La strip deve avere la parte col codice a barre rivolta verso il basso. E` possibile posizionare fino a 4 strip contemporaneamente, sfruttando le 4 posizioni disponibili (Fig.11); 4. Chiudere lo sportellino tenendolo premuto con un dito e inserire di nuovo il supporto nello scanner; (Fig.12); Cliccare sul comando READ TEST sulla schermata principale del programma. Attendere che il QuickScan termini la scansione (Fig.13); 6. Quando compare la schermata dei risultati, come in figura, inserire almeno il nome del campione nello spazio Sample ID (Fig. 14) e premere Invio (Enter) sulla tastiera Digitare qui il nome del campione Un risultato >8 ppm indica che il campione supera gli 8 ppm in DON. È possibile misurare valori fino a 30 ppm effettuando un appropriata diluizione (paragrafo Campioni che superano 8 ppm ). 8 Gestione dei risultati 1. Se si desidera stampare immediatamente il report di analisi, premere il comando PRINT in basso a destra; 2. Premere CLOSE per chiudere la finestra di lettura. Per rivedere o stampare i risultati in un secondo momento, doppio clic sulla cartella REPORTS sul desktop; 3. Per visualizzare il registro di tutte le analisi eseguite, cliccare sul comando DATA LOG nella schermata iniziale del programma. [6] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

7 9 Campioni che superano 8 ppm È possibile misurare la contaminazione anche a valori superiori di 8 ppm, la misura è validata fino a 30 ppm. Si tratta di diluire l estratto secondo questa procedura: 1. In un tubo mescolare 100 μl di estratto e 700 μl di acqua e mescolare accuratamente (diluizione 1:8); 2. A questo punto questo diventa il campione e si procede dal punto 6 fino alla lettura della strip e alla schermata dei risultati punto 15; 3. Nella stessa schermata scegliere 1:A nel menu a tendina dilution, il sistema calcolerà automaticamente il livello di DON nell estratto di origine. 10 Dichiarazione di non responsabilità Generon S.p.A. non si assume responsabilità di alcun tipo, esplicite o implicite, eccetto garantire che i materiali di cui i propri prodotti si compongono sono di qualità standard. In caso di materiale difettoso, Generon S.p.A. si impegna a fornire un prodotto sostitutivo. Generon S.p.A. non è tenuta a rispondere per qualunque danno, inclusi danni speciali o consequenziali o spese che derivano direttamente o indirettamente dall uso di questo prodotto. L acquirente può duplicare questo documento, in tutto o in parte, solo per scopi interni, a condizione che questa nota sia riportata in tutte le copie. Nella duplicazione l acquirente si impegna a compiere ogni ragionevole sforzo per impedire l'uso non autorizzato e la distribuzione delle informazioni sulla proprietà. Questo manuale è la semplice traduzione in lingua italiana del manuale in lingua straniera presente nel kit. [7] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017

8 Tabella A: matrici validate Gruppo di matrici Limite di rilevabilità -LOD (ppm) Aggiungere al recipiente prima il campione poi l acqua Immergere completamente il campione e agitare Purificare Aggiungere al tubo di reazione poi mescolare Inserire il tubo di reazione nel termoblocco impostato a 22 C Immergere la strip per Per testare >8ppm, diluire l estratto*** Frumento DF MG1 Mais DF MG2 Farina di frumento Farina bianca di grano; Crusca di grano Tritello di frumento DF MG3 DF MG4 DF MG5 0.1 ppm da 20 a 50 g poi 5X volumi di acqua (es. 20 g campione, poi 100 ml acqua*) 30 sec a massima velocità in agitatore o vigorosamente a mano Filtrare (2 min) o centrifugare (30 sec) o lasciare sedimentare 100 µl di buffer µl di estratto chiarificato Lasciare acclimatare il tubo per 2 minuti** 2 minuti 1:8 in acqua (100 µl campione µl acqua) poi 1:1 con buffer; selezionare 1:A nel menu a tendina Dilution Residui di molitura del frumento DF MG6 Residui di distillazione dei cereali DF MG7 Note : *Utilizzare acqua distillata, deionizzata o acqua minerale in bottiglia non gassata **Il passaggio di acclimatazione del tubo è richiesto soltanto se la temperatura ambiente dell analisi è sconosciuta o non cade nel range C (68-75 F) ***Seguire il protocollo descritto nel paragrafo «campioni che superano 8 ppm» [8] Manuale d uso - QuickTox Kit for QuickScan DON Flex - Rev. 1-14/02/2017