LowCross-Buffer. CANDOR Buffer Product Line

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1 ottimizzazione dei saggi immunologici LowCross-Buffer Un tampone innovativo per saggi in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting e immuno-pcr in grado di ridurre l aspecificità delle reazioni LowCross-Buffer è stato sviluppato per ridurre al minimo il legame aspecifico, le cross-reattività e gli effeti della matrice. La formulazione del LowCross-Buffer aiuta a ridurre l interferenza nei saggi immunologici, in tal modo la sensibilità della rilevazione è incrementata in modo significativo. Il legame aspecifico degli anticorpi, gli effetti negativi prodotti da sostanze di disturbo e una bassa o media cross-reattività, legata all affinità degli anticorpi, vengono ridotti. In aggiunta gli effetti causati dalla matrice, come per esempio in campioni di siero o di plasma, vengono diminuiti. Tutto ciò comporta una diminuzione di errori nella rilevazione degli analiti. La riduzione di tutti questi effetti negativi per contro aumenta la qualità del saggio e facilita la riproducibilità dei risultati. LowCross-Buffer non contiene fosfati. LowCross-Buffer riduce Gli effetti aspecifici legati alla matrice Il legame aspecifico La cross-reattività Il campione contenente l analita, così come gli anticorpi per il rivelamento, viene diluito nel LowCross-Buffer e utilizzato per il saggio. LowCross-Buffer viene utilizzato in sostituzione del normale tampone di diluzione del campione o dell anticorpo. In saggi particolarmente delicati come l immuno-pcr, Low- Cross-Buffer può essere impiegato anche come soluzione per il lavaggio. Valore di ph: ph 7,2 50 ml codice ml codice ml codice

2 Comparazione dei Risultati Saggi proteici Riduzione del segnale di fondo aspecifico Alcuni anticorpi contro uno stesso analita spottato su vetrino Rapporto del segnale rispetto al fondo aspecifico Senza LowCross : 3,42 Con LowCross : 17,26 ELISA Si evita l insorgere dei falsi positivi senza LowCross con LowCross (Dati del dipartimento di chimica Dankbar, università di Münster) Controllo di specificità (A1-A12) e bianchi (H1-H12) evidenziano falsi positivi. Falsi positivi Western-blotting Riduzione del legame aspecifico e di conseguenza del segnale di fondo. Solo la combinazione della soluzione di bloccagio di CANDOR con il LowCross- Buffer permette la rilevazione di Miostatina. L ampio segnale aspecifico di fondo legato alla superfice non è spiegabile solo dall inadeguata saturazione della stessa. Western blotting Evita il legame aspecifico Rilevazione di citocheratina 4, 5 e 6 influenzata negativamente da una combinazione di legame aspecifico e cross-reattività. Le tre bande attese possono essere rilevate nitidamente utilizzando LowCross-Buffer. (Dati da S. Siewert, A. Döhring, PD Dr. W. Weidemann, Instituto di Zoology e Endocrinology, università di Ulm) con LowCross con TTBS Tampone normale Falsi positivi LowCross-Buffer (Dati provenienti da Dr. C. Specht, PARA BioScience GmbH, Gronau) ELISA Eliminazione degli effetti legati alla matrice. Gli effetti legati alla matrice in un saggio per la rilevazione di CRP (proteina C reattiva) in plasma di coniglio. Le proteine della matrice nel plasma mascherano l analita CRP. LowCross-Buffer smaschera l analita e aumenta la sensibilità e il limite di rilevamento di un fattore 3. (Dati da Dr. D. Sperling, Macherey & Nagel GmbH & Co. KG, Düren) ELISA Riduzione del segnale aspecifico di fondo L anticorpo rivelatore è accopiato alla fosfatasi alcalina. L aspecifico si lega direttamente all anticorpo di cattura in assenza dell analita. LowCross-Buffer previene questo legame aspecifico. Il segnale di fondo aspecifico viene così ridotto in modo significativo. (Dati del M. Braun, PD Dr. H.-P. Wendel, Clinic of Thorax-, Cardiac- and Vascular Surgery, research laboratory, università Hospital of Tübingen) ELISA Diminuzione del COV Interferenze fra i plasmi umani causa un elevato coefficiente di variazione (COV) a causa dell uso di PBS/BSA Tween (n=96, determinato sull intervalo di misurazione totale). COV è ridotto in modo significativo con l uso del LowCross-Buffer in ragione di aver evitato l effetto d interferenza. In questo modo i criteri della guida per l industria Validazione del metodo analitico del FDA potrebbero essere recepiti. Essi richiedono per accuratezza e precisione un massimo del 15%. coeffi ciente di variazione [%] (Dati da Dr. P. Rauch, CANDOR Bioscience GmbH, Weißensberg) PBS/BSA Tween LowCross-Buffer (Dati da Dr. P. Rauch, CANDOR Bioscience GmbH, Weißensberg)

3 Sample Buffer Il tampone per la diluzione del campione e dell anticorpo per saggi in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting, immuno-pcr e immunocitochimica Sample Buffer è un tampone per la diluzione dei campioni e dell anticorpo per un uso diretto in saggi immunologici. Gli anticorpi coniugati alla fosfatasi alcalina o perossidasi possono essere diluiti e utilizzati nel Sample Buffer senza alcun problema poiché è privo di fosfati. Per la diluzione di analiti o campioni biologici Per la diluzione di anticorpi di rilevamento Privo di fosfati Sample Buffer è stato progettato per eseguire tutti quei saggi che devono risultare privi di problematiche e interferenze. Sample Buffer è anche disponibile senza Tween o altri detergenti per l uso in immunocitochimica. Il campione con l analita, così come l anticorpo per la rilevazione, viene diluito nel Sample Buffer e poi utilizzato nel saggio. Valore di ph: ph 7,2 Sample Buffer 50 ml codice ml codice ml codice Sample Buffer privo di Tween per IHC 50 ml codice ml codice ml codice

4 The Blocking Solution Soluzione di bloccaggio per saggi in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting, immuno-pcr e immunoistochimica The Blocking Solution inibisce la formazione del legame aspecifico e non desiderato sulle superfici. Incubando le superfici, per esempio piastre per microtitolazione, membrane per western blot o vetrini, i siti di legame liberi delle superdici vengono saturati dai componenti della The Blocking Solution diminuendo in tal modo i legami non voluti degli analiti o degli anticorpi per la rilevazione alle superfici. Questo bloccaggio rende il fondo aspecifico molto basso e incrementa significativamente la sensibilità dei saggi. The Blocking Solution è prodotta con una caseina modificata chimicamente e di elevata purezza. I vantaggi della The Blocking Solution rispetto alle normali soluzione di bloccaggio sono esemplificati nella comparazione di due saggi ELISA. Il coefficiente di variabilità del saggio ELISA effettuato con The Blocking Solution diminuisce in modo evidente. ELISA (saggio competitivo) Diminuzione del COV con n=96 misure al massimo B0 The Blocking Solution riduce con efficacia l aspecificatà di fondo. The Blocking Solution satura i legami liberi sulle superfici plastiche, membrane o altri superfici di legame delle proteine. coeffi cient of variation [%] The Blocking Solution riduce: Il fondo aspecifico molto efficacemente I legami aspecifici sulle superfici BSA-Block The Blocking Solution (Dati da Dr. P. Rauch, CANDOR Bioscience GmbH, Weißensberg) Una validazione del saggio ha quantificato in modo certo l incremento dell efficienza del bloccaggio. Si consiglia l incubazione a 4 C per tutta la notte, sono però possibili tempi di incubazione più brevi in rapporto alle superfici e alle tecniche utilizzate. Soluzione di bloccaggio per saggi in ELISA, EIA, RIA, Westernblotting, saggi proteici, immuno-pcr e immunoistochimica. Composizione: caseina a basso peso molecolare e di elevata purezza con NaCl e Tween Valore di ph: ph 7,2 50 ml codice ml codice ml codice

5 BSA-Block Soluzione di blocaggio per saggi in ELISA, EIA, saggi proteici, Westernblotting e immuno-pcr BSA-Block satura la capacità legante aspecifica presente sui consumabili plastici e altre superfici come piastre ELISA e membrane per Western-blotting. Utilizzando questo prodotto si può ottenere una riduzione del legame aspecifico alle superfici. BSA-Block è un normale bloccante per molte applicazioni. BSA-Block Satura i siti di legame liberi Utilizzabile per molte applicazioni Composizione tradizionale BSA-Block: satura i siti di legame liberi sulle superfici. BSA-Block: è il bloccante standard utilizzable per svariate applicazioni. BSA-Block: è la soluzione universale che sostituisce efficacemente tutti i vari tipi di bloccanti a base di BSA. Per rilevazioni particolarmente complesse, si raccomanda l utilizzo della The Blocking Solution (110050, o ). BSA-Block è utilizzabile come i comuni bloccanti. BSA-Block si utilizza senza diluzioni direttamente sulla superficie per i processi di saturazione. Soluzione di bloccaggio per ELISA, EIA, saggi proteici, Western-blotting e immuno-pcr. Composizione: bloccante standard con BSA e Tween Valore di ph: ph 7,4 125 ml codice ml codice

6 Nuovo SmartBlock TM Soluzione di bloccaggio per ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Westernblotting e immuno-pcr SmartBlock TM previene efficacemente le aspecificità di fondo. SmartBlock TM satura la capacità legante aspecifica presente sui consumabili plastici o altre superfici come piastre ELISA e membrane per Western-blotting. SmartBlock TM Blocca efficacemente Semplice da utilizzare Privo di BSA SmartBlock TM previene in molti saggi il legame aspecifico e non desiderato sulle superfici. Incubando le superfici, per esempio piastre per microtitolazioni, membrane per Western-blotting o ventrini, i siti di legame liberi vengono saturati dai componenti dello SmartBlock TM riducendo, in tal modo, i legami aspecifici alle superfici degli analiti o degli anticorpi per la rilevazione. Ciò rende l aspecificità di fondo trascurabile. SmartBlock TM è adatto per tutti quegli esperimenti preparativi o molto frequenti e rappresenta anche una valida alternativa al bloccaggio effettuato con BSA. SmartBlock TM, poiché non contiene proteine del siero, risolve molti dei problemi legati alla possibile interazione e alla cross-reattività con la BSA presente in molte soluzioni di bloccaggio. Se si analizzano campioni di sangue, siero o tessuti si raccomanda l utilizzo della The Blocking Solution (110050, o ). SmartBlock TM è utilizzabile come i comuni bloccanti. SmartBlock TM si utilizza senza diluzioni direttamente sulla superficie per i processi di saturazione. Soluzione di bloccaggio per saggi tipo ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting e immuno-pcr. Composizione: privo di proteine del siero come la BSA e di fosfato Valore di ph: ph 7,0 125 ml codice ml codice

7 Nuovo Liquid Plate Sealer TM Stabilizzante per piastre Liquid Plate Sealer TM stabilizza le piastre ELI- SA e le sigilla, dopo l immobilizzazione degli anticorpi o degli antigeni e il bloccaggio, con uno strato denso ma facilmente solubile. Indicato per una conservazione per un lungo periodo, dopo essiccamento o per una conservazione temporanea senza essiccazione. Può essere utilizzato per la stabilizzazione di anticorpi o antigeni dopo aver ricoperto le superfici in polistirene o vetro nel caso di saggi proteici. Le piastre trattate con Liquid Plate Sealer TM possono essere conservate per un lungo periodo, da uno a tre anni, dopo essiccamento, ma anche per tempi più brevi in condizioni diverse. E possibile conservare per un lungo periodo di tempo, anche a temperatura ambiente, numerosi anticorpi e antigeni dopo aver essiccato le piastre. Se non si effettua l essicamento la temperatura ottimale di conservazione è 2-8 C. Liquid Plate Sealer TM Sigilla piastre per ELISA Stabilizza gli anticorpi che ricoprono la piastra Privo di BSA Composizione: privo di proteine del siero come la BSA e di fosfato Valore di ph: ph 6,5 Conservazione: a -20 C tempo die conservazione 1 anno. Evitare più di un ciclo di congelamento e scongelamento. 50 ml codice ml codice ml codice

8 Antibody Stabilizer Stabilizzatore, per un periodo di conservazione lungo, di proteine e anticorpi in soluzione Antibody Stabilizer conserva la struttura delle proteine e degli anticorpi così da prevenire la perdita di funzionalità delle proteine e degli anticorpi causata dalla conservazione prolungata nel tempo. Si consiglia di dissolvere le proteine o gli anticorpi nell Antibody Stabilizer quando si vogliono conservare in frigorifero. Antibody Stabilizer contiene additivi per la conservazione delle strutture delle proteine e degli anticorpi in soluzione. Adatto ad una conservazione per lungo tempo a 4 C. Antibody Stabilizer Stabilizzante, conserva le strutture A base di TRIS o PBS Composizione: stabilizzante a base di TRIS o PBS Valore di ph: ph 7,2 (a base di TRIS); 7,4 (a base di PBS) Conservazione: a -20 C tempo di conservazione 2 anni. A 2-8 C tempo di conservazione 1 anno. Antibody Stabilizer a base di TRIS 50 ml codice ml codice Antibody Stabilizer a base di PBS 50 ml codice ml codice

9 Washing Buffer Tampone di lavaggio per saggi in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting, immuno-pcr e immunoistochimica Il Washing Buffer è utile per tutti i generi di saggi immunologici. Si può scegliere fra un tampone a base di TRIS o PBS. E disponibile anche una versione priva di Tween per immunoistochimica. Washing Buffer è prodotto per essere utilizzato in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici, Western-blotting, immuno-pcr e immunoistochimica. I passaggi di lavaggio sono necessari per rimuovere i componenti non legati e eccessivi che possono interferire con il saggio. Washing Buffer è utilizzabile con le strumentazioni automatiche di lavaggio. Attenersi alle istruzioni relative al proprio strumento di lavaggio. Si può scegliere fra un tampone di lavaggio basato su TRIS o su PBS e per saggi immunologici la versione priva di Tween e detergenti. Soluzione concentrata 10x Diluire semplicemente con acqua! Washing Buffer Permette un risparmio di tempo Vi è la possibilità di scelta della soluzione a base di TRIS o PBS Utilizzabile per apparecchiature di lavaggio di piastre per ELISA Composizione della soluzione di lavoro: Tampone a base di TRIS o PBS con Tween e NaCl 350 mm Valore di ph: ph 7,2 Se si formano dei precipitati cristallini quando si conserva il prodotto a 2-8 C o si congela dissolverli portando il prodotto a temperature ambiente. La soluzione diluita è da usare immediatamente. Washing Buffer basato su TRIS 500 ml codice Washing Buffer TRIS privo di Tween per IHC 500 ml codice Washing Buffer basato su PBS 500 ml codice Washing Buffer PBS privo di Tween per IHC 500 ml codice

10 Coating Buffer Coating Buffer per saggi in ELISA, EIA, RIA, saggi proteici e immuno-pcr Coating Buffer per una semplice immobilizzazione. Possibilità di scelta fra tamponi basati sul PBS (ph 7,4) o carbonato (ph 9,6). La soluzione per l immobilizzazione funzionale di proteine a anticorpi su superfici plastiche (per esempio piastre per microtitolazione) o altre superfici di legame proteico. Coating Buffer è preparato per l immobilizzazione di proteine e anticorpi su superfici plastiche o altri superfici di legame proteico. Applicazioni: ELISA, EIA, RIA, saggi proteici e immuno-pcr. In relazione alle superfici, così come agli anticorpi o alle proteine, i tempi di incubazione neccessari possono variare. Di conseguenza ciascun utilizzatore dovrebbe ottimizzare i propri tempi d incubazione in rapporto al proprio protocollo. Per alcune proteine e anticorpi il Coating Buffer ph 7,4 risulta essere più efficace nell immobilizzazione, per altre risulta migliore quello a ph 9,6. Il valore di ph può avere un influenza sulla struttura sterica delle proteine e degli anticorpi tale da avere un effetto sull immobilizzazione. Per ottimizzare un protocollo durante lo sviluppo di nuovi saggi immunologici si consiglia di testare i due differenti prodotti in parallelo. Soluzione concentrata 10x Diluire semplicemente con acqua! Coating Buffer Semplice da utilizzare Possibilità di scelta fra soluzione a base di PBS o carbonato Composizione: tampone basato su PBS concentrato 10x tampone basato sul carbonato concentrato 10x Valore di ph: ph 7,4 o 9,6 Conservazione: Coating Buffer ph 7,4 (PBS) a -20 C tempo di conservazione 1 anno a 2-8 C tempo di conservazione 3 mesi Coating Buffer ph 9,6 (carbonato) a -20 C tempo di conservazione 3 mesi a 2-8 C tempo di conservazione 1 mese La soluzione diluita è da usare immediatamente. Coating Buffer ph 7,4 (PBS) 125 ml codice Coating Buffer ph 9,6 (carbonato) 125 ml codice

11 Stripping Buffer Per il rispristino alla condizione iniziale delle membrane da Western-blotting già blottate Una soluzione semplice da utilizzare e completamente atossica per rimuovere gli anticorpi. Lo Stripping Buffer rimuove delicatamente gli anticorpi primari e secondari senza danneggiare la membrana; dopo lo stripping la membrana può nuovamente venir ibridata. Stripping Buffer rimuove la soluzione di reazione e gli anticorpi primari e secondari dalle membrane di Westernblotting. Dopo aver effettuato lo stripping la membrana può essere re-ibridata con gli stessi o altri anticorpi. La membrana viene incubata in una vaschetta con lo Stripping Buffer, per rimuovere gli anticorpi, per minuti. Dopo l incubazione con lo Stripping Buffer la membrana deve essere lavata con la soluzione di lavaggio e a questo punto si può procedere ad una nuova re-ibridazione. Poiché lo Stripping Buffer non contiene né DTT né beta-mercaptoetanolo la soluzione non emette fumi tossici e cattivi odori rendendo più gradevole e sicuro il lavoro in laboratorio. Stripping Buffer Semplice da utilizzare Non è pericoloso ne emana cattivi odori in quanto non contiene né DTT né beta-mercaptoetanolo Valore di ph: ph 2,8 Conservazione: a -20 C tempo di conservazione 1 anno a 2-8 C tempo di conservazione 6 mesi 50 ml codice ml codice ml codice