Il caso dell aldosterone: fra certezze e pitfalls
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1 Il caso dell aldosterone: fra certezze e pitfalls Renato Tozzoli Dipartimento di Medicina di Laboratorio Azienda Ospedaliera S. Maria degli Angeli, Pordenone Inquadramento di laboratorio della patologia corticosurrenalica 12 congresso Nazionale AME 6th Joint Meeting with AACE
2 Punti chiave 1.Impiego diagnostico del dosaggio dell aldosterone e della renina 2.Il rapporto aldosterone/renina (ARR) 3.Criticità del dosaggio dell aldosterone e della renina Preanalitiche Analitiche Postanalitiche
3 Impiego diagnostico dell ARR Il rapporto A/R può essere utilizzato per la rapida classificazione di tutti i disordini del sistema renina-aldosterone Iperaldosteronismo primario (PA) e secondario Ipoaldosteronismo primario e secondario
4 Impiego diagnostico dell ARR Patients with relatively high prevalence of PA Stage 2 (> mmhg/ mmhg) or stage 3 (>180/110 mmhg) hypertension Drug resistant hypertension Hypertension and spontaneous or diuretic-induced hypokalemia Hypertension with adrenal incidentaloma Hypertension and family history of early-onset hypertension or cerebravascular accident at young age (<40 years) Hypertensive first-degree relatives of patients with PA
5 ARR and PA The aldosterone to renin ratio (ARR) is currently the most reliable available mean of screening for PA ARR is superior to mesurement of potassium or aldosterone (lower sensitivity) or renin (lower specificity) in isolation (Hiramatsu, 1981; McKenna 1991; Stowasser, 2010)
6 ARR and PA ARR is not without false positive and negative ARR should be regarded as a detection (screening) test ARR should be repeated if the initial results are inconclusive or difficult to interpret because of suboptimal sampling conditions
7 ARR: variabili preanalitiche J Hypertens 2013 Horm Metab Res 2012 Horm Metab Res 2013 Postura Ora del prelievo Età Sesso Dieta sodica Concentrazione del potassio Farmaci
8 Aldosterone/renina: variabili preanalitiche Postura: 1 Campione dopo 5-15 minuti in posizione seduta No: 2 campioni (ortostatismo/1 ora-clinostatismo) Ora: Metà mattina (ritmo circadiano di ACTH) No: pomeriggio
9 Aldosterone/renina: variabili preanalitiche Età: 20-54/55-74 Sesso Maschi/Femmine
10 Aldosterone/renina: variabili preanalitiche Dieta sodica: Dieta libera: no restrizione sodica Concentrazione del potassio: Ipopotassiemia associata con risultati falsi negativi: correzione Iperpotassiemia fattizia: corretto prelievo di plasma
11 Aldosterone/renina: variabili preanalitiche Farmaci Induttori di falsi positivi: beta-bloccanti, metilldopa, clonidina, FANS Induttori di falsi negativi: diuretici, calcio-antagonisti, ACEinibitori, ARBs Effetti complessi: inibitori renina, estroprogestinici, antidepressivi
12 Aldosterone/renina: variabili analitiche Dosaggio dell aldosterone (e della renina) Metodi immunometrici isotopici vs. non-isotopici Metodi manuali vs metodi automatizzati Effettivo impiego dei metodi cromatografici
13 Aldosterone: analytical characteristics Concentration (Plasma/serum): ng/l (Cortisol/Aldosterone: 1000/1) Methods of detection Bioassay (isotope derivative assay) Radioimmunoassay GC-MS/MS HPLC-MS/MS Enzyme immunoassay (ELISA) Chemiluminescence immunoassay 60 Years of aldosterone (electrocortin) Simpson SA, Tait JF, Reichstein T, 1953
14 Aldosterone: assay methods Method Tracer Chromatography Extraction Procedure Author Bioassay 3 H, 14 C Paper, Celite, Amberlite, Sephadex RIA 3 H Paper, Celite, Amberlite, Sephadex Dichloromethane Benzene-methanol Dichloromethane Benzene-methanol Manual Simpson, 1953 Manual Mayes, 1970 Boyard, 1970 RIA 3 H No Dichloromethane Benzene-methanol RIA 125 I No Dichloromethane Benzene-methanol Manual Drewes, 1973 Farmes, 1973 Manual Hariyama, 1976 RIA 125 I No No Manual Al-Duijaili, 1978 GC-MS/ MS HPLC-MS/ MS - C18 column No Manual Prone, C18 column Acetonitrile Semiautomated Fredline, 1997 CLIA AE No No Automated Perschel, 2004
15 Renin and prorenin measurement
16 Nomenclature for different forms of renin or prorenin measured by activity assays and immunoassays Renin form measured Plasma renin activity (PRA) Plasma renin concentration (PRC) Activity assays Immunoassays Units PRA: Ang I production by plasma renin activity (both renin or prorenin with open conformation) acting on endogenous plasma angiotensinogen Ac-PRC: Ang I production by plasma renin enzymatic activity (both renin and prorenin with open conformation) acting on exogenous angiotensinogen Ir-PRC: Renin immunoassay of untreated plasma (measures both renin and prorenin with open conformation) µg or nmol Ang I/L/h IU/L, ng/l, or pmol/l
17 PRA vs PRC Factor PRA PRC Ice cooling Yes No Angiotensinogen (liver cirrhosis, cardiac failure, pregnancy, glucocorticoid excess, estrogens, diabetes) Dependent Indipendent Reproducibility Poor Acceptable Sensitivity High Acceptable Prorenin interference No No, with short incubation time at 37 C Savings of time No Yes
18 Aldosterone: analytical variability Test Method Concentration (mean) Nichols Advantge DPC-Siemens Coat-A-count Adaltis Maia Concentration (DS) CV% CLIA RIA RIA Demeditec RIA p Fisher E, et al. Horm Metab Res 2013;45:526-31
19 Renin: analytical variability Test Method Concentration (mean) Nichols Advantge Concentration (DS) CV% PRC-ILMA CIS-bio PRC-IRMA Adaltis Maia PRA-RIA DiaSorin PRA-RIA p Fisher E, et al. Horm Metab Res 2013;45:526-31
20 ARR: analytical variability Assay Combination ARR (mean) p Adaltis/Nichols 92.2 DPC/Nichols Demeditec/Cis-bio DPC/Cis-bio Nichols/Nichols Fisher E, et al. Horm Metab Res 2013;45:526-31
21 Criticità postanalitiche La torre di Babele: Quali unità? Unità PAC ng/dl Convenzionali ng/l Convenzionali pmol/l SI PRA ng/ml/h Convenzionali pmol/l/h SI PRC ng/l Convenzionali mu/l (IRP 68/356) SI ARR 1/10/100
22 ARR: post-analytical variability Clinical sensitivity: % Clinical specificity: 61-96% Different cut-offs: Proposed cut-offs from Endocrine Society PAC/PRA=60-80 PAC/PRC= Sensitivity: 22.2% Specificity: 98.7% J. Hypertens 2013 (EAOP)
23 The automated CLIA analyzers: a new era ten years after? Nichols Advantage DiaSorin Liaison IDS isys
24 Automated CLIA analyzers: analytical characteristics System Precision WA (CV%) Precision BA (CV%) Sensitivity (FS) Author (year) Aldosterone (PAC) Manual RIA ng/dl Schirpenbach, 2006 Nichols Advantage ng/dl Diederich, 2007 DiaSorin Liaison ng/dl Package insert IDS isys ng/dl Manolopoulou, 2012 Fortunato, 2012 Renin (PRC) Nichols Advantage mu/l Diederich, 2007 DiaSorin Liaison mu/l Dorrian, 2010 IDS isys mu/l Manolopoulou, 2012 Fortunato, 2012
25 Aldosterone-Renina IDS-iSYS Parametri Sensibilità funzionale (LoQ) Precisione Matrice del test Aldosterone 6,8 ng/dl CV% Intraassay 4%-10% CV% Interassay 2,3%-14% EDTA-Plasma N tests/ora 68 test/ora Stabilità kit a bordo Stabilità calibrazione 1 mese 4 giorni Parametri Sensibilità funzionale (LoQ) Precisione Matrice del test Stabilità calibrazione Principali caratteristiche del saggio per la renina Renina 2,1 mui/l CV% Intraassay 3%-11% CV% Interassay 2,3-11% EDTA-Plasma N tests/ora 68 test/ora Stabilità kit a bordo 1 mese 10 giorni
26 Correlazione y = 1,1401x - 2,6862 R² = 0,92168 y = 0,7257x - 2,2477 R² = 0,98401 Correlazione aldosterone IDS isys aldosterone RIA Correlazione renina IDS isys renina RIA
27 U-Aldosterone: è ancora utile? 9 lavori in letteratura negli ultimi 10 anni Impiego in medicina veterinaria, in pediatria e nel PA solo nel test di conferma con carico orale di sodio Criticità analitiche Raccolta urine 24 ore: impiego di UACR Presenza di aldosterone libero (5%), aldosterone-18 oxo-glucuronide (10%) renale, tetraidroaldosterone (35%), metaboliti non conosciuti (50%): estrazione o HPLC-MS/MS Non può essere usato in: ipertensione severa non controllata, insufficienza renale, scompenso cardiaco, aritmie, ipopotassiemia
28 PA: test di conferma Test Sigla Procedura Analiti Raccomandazioni Carico orale di sodio SLT >200mmol/die UA Young, Mulatero, ES Infusione di sodio SIT 2 L 0.9% NaCl PAC, PRA/PRC, K Mulatero, ES, JES Captopril challenge test Test di soppressione con fludrocortisone Furosemide upright test CCT Captopril PAC, PRA/PRC, Cortisolo FST Fludrocortisone PAC, PRA/PRC, Cortisolo FUT Furosemide PAC/PRA/PRC, Cortisolo ES, JES Mulatero, ES JES
29 Standardization of ARR: a proposal Characteristic Proposal EBM Time of venipuncture Midmorning (2 hours out of bed, 5-15 minutes seating) ES Guidelines Sample Plasma (urine) ES Guidelines Type of method CLIA (HPLC)? Aldosterone Automated Direct? Renin Automated PRC? Units SI Units (pmol/l-mu/l) ES guidelines Manufacturer The same (parallel detection)? Cut-off Method-dependent ROC Curves? Reference sample Healthy Adults (95.0%ile) Age, Gender-dependent Other Conditions Aldosterone > 400 pmol/l??
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