Membrane receptors 1
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- Sabina Farina
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1 Membrane receptors 1
2 7 pass-transmembrane receptors: GCR 2
3 7-pass transmembrane receptors GCR = G protein coupled receptors #! " 3
4 ost-translational modification!! subunit! Farnesylated! subunit extracellular! +!! intracellular 4
5 5
6 6
7 7
8 8
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10 La via dell AMc 10 Figure Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)
11 11
12 12
13 Figure Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008) 13
14 Figure Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008) 14
15 15
16 16
17 Not all 7-pass transmembrane receptors are GCR 17
18 Wnt/Frizzled: 7-pass transmembrane receptor and the activation of a transcription factor In assenza di segnale da parte di Wnt (Off-state), la beta-catenina non associata alle caderine è legata da diversi fattori tra cui AC (Adenomatous poliposis coli) che ne promuove l'ubiquitinazione e la degradazione proteosomale. Anche se viene trasportata nel nucleo, la beta-catenina non può promuovere la trascrizione a causa della presenza dei co-repressori Groucho e HDAC. 18
19 * In seguito al legame di Wnt (On-state) al suo recettore sono attivate diverse molecole che impediscono la degradazione della beta-catenina e ne promuovono il trasporto verso il nucleo. * Nel nucleo la beta-catenina partecipa alla complesso trascrizionale che promuove la trascrizione di geni che promuovono la proliferazione cellulare (Myc, ciclina D) e la migrazione e inibiscono l'adesione * Durante lo sviluppo embrionale la segnalazione Wnt/beta-catenina si integra con molte altre vie tra cui quelle dell'acido retinoico, FGF, BM, TGF-beta. 19
20 Tyrosine kinase receptors Cytokine receptors 20
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22 22
23 23
24 Domini SH2 (o TB) legano specifiche ptyr Domini SH3 legano zone riche di proline La specificità di riconoscimento dei domini SH2 è dovuta agli aa che seguono la ptyr 24
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26 STAT Ras p85 I3K p85 LC-! Gab1 I3K p85 I3K LC-! Sos Grb2 Sos Grb2 STAT Sos Grb2 STAT 26
27 STAT Ras p85 I3K p85 LC-! Gab1 I3K p85 I3K LC-! Sos Grb2 Sos Grb2 STAT Sos Grb2 STAT 27
28 STAT Ras p85 I3K p85 LC-! Gab1 I3K p85 I3K LC-! Sos Grb2 Sos Grb2 STAT Sos Grb2 STAT 28
29 29 Gab1 STAT Grb2 Sos Sos I3K p85 Grb2 Sos Sos STAT Grb2 Sos Sos Ras I3K p85 I3K p85 LC-! LC-! STAT
30 STAT=Signal Transducers and Activators of Transcription protein Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 30
31 STAT=Signal Transducers and Activators of Transcription protein Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT STAT STAT LC-! 31
32 STAT=Signal Transducers and Activators of Transcription protein STAT=Signal Transducers and Activators of Transcription protein Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT STAT STAT LC-! STAT AT 32
33 LC-!: Fosfolipasi C-gamma Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 33
34 The hydrolysis of I2 is activated downstream of both G protein-coupled receptors and protein-tyrosine kinases. This occurs because one form of phospholipase C (LC-#) is stimulated by G proteins, whereas a second (LC-!) contains SH2 domains that mediate its association with activated receptor protein-tyrosine kinases. This interaction localizes LC-! to the plasma membrane as well as leading to its tyrosine phosphorylation, which increases its catalytic activity. 34
35 LC-!: Fosfolipasi C-gamma I(4,5)2 Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 35
36 LC-!: Fosfolipasi C-gamma LC-!: Stessa funzione di LC-B (vedere sezione GCR) Ca ++ DAG I3 Ras Sos LC-! Grb2 STAT Gab1 STAT I3K p85 LC-! Ca ++ 36
37 Fosfatidil inositolo 3 chinasi (I3K) Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 37
38 I3K: un dimero composto da una subunità regolativa (p85) e una subunità catalitica (p110) 38
39 39
40 Fosfatidil inositidi fosforilati in posizione 3 servono da sito di aggancio per proteine che contengono domini H (plextrin homology). I3K ---> I3 ---> aggancio di KD1 e AKT/KB ---> KD1 fosforila e attiva AKT/KB (vedi effetto antiapoptotico di AKT/KB) 40
41 Grb2 e Gab1 sono degli adattatori Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 41
42 Attivazione di Ras: Grb2-Sos > Ras Ras Sos LC-! Grb2 Gab1 p85 I3K STAT STAT LC-! 42
43 Ras: proteina G monomerica Disattivazione Attivazione G-protein Activating rotein GA GEF Guanine Exchange Factor roteine GA (RasGA) sono necessarie per l attivazione dell attività GTasica (idrolisi del GT) di Ras roteine GEF (come Sos) sono necessarie per lo scambio di nucleotide da GD a GT 43
44 Grb2-Sos ---> Ras ---> cascata delle MAK Cascata delle MAK RAF chinasi MAKKK Ras GT MAKK MAK MAK Sos SRF LC-! Grb2 STAT Gab1 STAT I3K p85 LC-! 44
45 45
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52 NOTCH * La segnalazione dovuta all'attivazione di Notch è fondamentale durante lo sviluppo embrionale. * Il precurosre del recettore Notch è una proteina di 300kD che subisce già un taglio proteolitico (S1) durante la sua maturazione nel Golgi. Le due subunità rimangono associate e trasportate in membrana. * Notch è attivato da Delta (DSL) mediante comunicazione juxtacrina (interazione cellulacellula). Notch * Il legame di Delta induce il taglio proteolitico di Notch nella regione extracellulare (S2) da parte della metalloprotease ADAM/TACE. Il dominio extracellulare rimane associato a Delta e viene endocitato e degradato dalla cellula che esprime Delta. * Il dominio transmembrana di Notch interagisce con la beta-secretase (protease) chiamata presenilina e viene tagliato (S3) e/o internalizzato assieme alla presenilina. * Il risultato del taglio S3 libera il dominio citoplasmatico (NICD) che è trasportato nel nucleo dove si associa e regola fattori trascrizionali. 52
53 diversi modi di desensibilizzazione ad una molecola segnale 53
54 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Signal Transduction What? When? Where? 54 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
55 55
56 molecole: 56
57 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. 57 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
58 Trasduzione del segnale e proteine scaffold. protein-protein interaction: Experimental approach 58 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
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60 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al Science Sep 11;281(5383): Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
61 61
62 Which MAK interact with JI-1? JNK1?? 38 " JI-1 JNK2?? Erk2 62
63 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I 63
64 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I 64
65 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I 65
66 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I Anti-JI1 Anti-JNK1 66
67 JNK1? JI-1 MW lysate I Anti-JI1 Anti-JNK1 67
68 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I Anti-JI1 Anti-JNK1 68
69 38"? JI-1 I anti 38" MW lysate I 69
70 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I 70
71 38"? JI-1 I anti 38 " MW lysate I 71
72 38 "? JI-1 I anti 38 " MW lysate I Anti-JI1 Anti-38 " 72
73 38 "? JI-1 MW lysate I Anti-JI1 Anti- 38 " 73
74 JNK1? JI-1 I anti JNK1 MW lysate I Anti-JI1 Anti-JNK1 74
75 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al Selective binding of JI-1 to the MA kinase JNK JNK1?? 38 " JI-1 JNK2?? Erk2 75 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
76 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
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78 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al JI-1 (endogena) JI-1 T7 MKK7 MKK7 HA ERK2 HA ERK2 78 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
79 BCII - erroteau - Tecniche - ull-down ULL-DOWN sferette di sepharose- glutatione + GLUTATIONE TRANSFERASI ROTEINA ESCA + 79 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
80 BCII - erroteau - Tecniche - ull-down metto in agitazione (rotazione) a 4 C 2h o O/N affinché la proteina esca, (fusa con la glutatione transferasi) vada in contatto con tutte le proteine presenti nell estratto centrifugo a bassa velocità (3000 rpm, 1 min, 4 C). Sul fondo della provetta si depositano:sferette di sepharoseglutatione--glutationetransferasi-proteina esca; in soluzione restano:proteine non legate alla proteina esca procedo come per l immunoprecipitazione 80 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
81 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
82 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
83 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. HK1 83 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
84 BCII - erroteau - Trasduzione del segnale e proteine scaffold. Witmarsh et al MLK MKK7 JI-1 JNK DLK 84 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
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89 BCII - erroteau - Tecniche - Doppio ibrido 89 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
90 BCII - erroteau - Tecniche - Doppio ibrido library 90 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
91 BCII - erroteau - Tecniche - Doppio ibrido Wikipedia 91 Solo per uso didattico - vietata la riproduzione o la vendita
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